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补充,还有说常见的有丝氨酸水解酶家族,有文献提及赖氨酸。请问这些是如何选择的
国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。
第一部分
siRNA理论知识
siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛
细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛
回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛
关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。
第二部分
siRNA的设计
siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛
siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛
回复:【共享】SiRNA序列的设计方法-蚂蚁淘论坛
请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛
第三部分
siRNA转染效率
FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛
荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛
回复:siRNA效率-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】为何siRNA转染效果不佳-蚂蚁淘论坛
回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛
关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。
第四部分
siRNA动物体内转染
RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛
回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛
上游引物:5′-GAATGTGTGTACTGCAAGCA-3′
下游引物:5′-GTTGTATTGCTGTTCTAATGTTGT-3′
Taqman探针:5′-FAM-CAGCATATGGATTCCCATCTC-TAMRA-3′
扩增的产物长度是:195bp(nt188-382)
HPV16全长序列:贴在附件中
磕头跪谢!!!
HPV16.txt(9.91k)
cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。
真核生物基因组DNA十分庞大,其复杂程度是蛋白质和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重复序列. 采用电泳分离和杂交的方法,都难以直接分离到目的基因.这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难。
高等生物一般具有10^5种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都仅有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。
cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。
上面较高的是样本曲线,下面较低的是未加样本(茎环引物和引物、探针都加入)
各位大神,我现在用PET28α作为表达载体,在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后,导入感受态中没有成功,不知道怎么回事,请教各位。
①在荧光显微镜下,用波长约490 nm的紫外线激发后,即可观察到绿色荧光,直接、简捷、便于检测;
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响,保证了极高的检出率;
③蛋白本身性质稳定;
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性;
⑤其基因片段长度较小(约717 bp),易于构建融合蛋白,且融合蛋白仍能保持荧光激发活性,为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。
pEGFP是一种优化的突变型GFP,使其产生的荧光较普通GFP强35倍,大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子,而且其N及C端均可融合,并不影响其发光。
pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因,如上图质粒图谱所示。
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点:
①从结构上看,该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是保证目的基因稳定表达的因素之一;
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV,可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达;
③具有多克隆位点,便于目的基因的插入;
④该载体具有neo基因,可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转