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λ DNA/BamH I 分子量参照物是λ DNA 被BamH I 彻底水解并经过热灭活的产物。浓度:0.5ug/ul储藏条件:10 mM Tris-HCl (pH7.8),10mM NaCl,1mM EDTA ,-20℃参照物片段(bp):16,841 7,233 6,770 6,527 5,626 5,505... 查看更多>
北京五加和分子医学研究所有限公司在发布的miRNA生物传感器供应信息,浏览与miRNA生物传感器相关的产品或在搜索更多与miRNA生物传感器相关的内容。 查看更多>
细胞培养的支原体污染和分型 点击浏览该文件一种消除细胞培养中污染支原体的简单方法 点击浏览该文件应用聚合酶链反应对细胞培养液中支原体的方法 点击浏览该文件用基因突变细胞检测支原体 点击浏览该文件 查看更多>
血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)是一种抑制血管紧张素转化酶活性的化合物。血管紧张素转化酶催化血管紧张素I生成血管紧张素II,后者是强烈的血管收缩剂和肾上腺皮质类醛固酮释放的激活剂。... 查看更多>
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中图法分类号与中图分类法查询生物科学属于Q类,医学类属于R类,可以直接转至Q或R类查询A 马克思主义、列宁主义、毛泽东思想A1 马 查看更多>
标准品的制备、鉴定、计量1.标准品的制备:标准品的制备是非常复杂的问题,也是标记免疫分析中比较难于制备的一个成分。以下讨论的是实验室标准品(或商品化试剂中标准品)的制备。1)基质的制备:如前所述,作为标准品的介质(基质)成分应与被测样品相同。对大多数用于测定血清中某物质的标准品,应用不含被测物质的零血清制备,以求反应的介质环境相当。但有时零值血清的制备十分困难,所以有些标准品用适当的缓冲液制备,并在缓冲液中加入一定量的载体蛋白(一般用1... 查看更多>
Interchim 多肽和寡核苷酸纯化系统 puriFlash 5.250P 查看更多>
一、核酸分子杂交技术1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究,其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键的形成,出现稳定的双链区,形成杂交的双链。自此以后,由于分子生物学技术的迅猛发展,特别是70年代末到80年代初,分子克隆、质粒和噬菌体DNA的构建成 查看更多>
生物素酰化探针的制备实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。在标准的切口平移实验体系中,生物素-11-dNTP取代了dNTP,DNA酶I 的浓度调整到可生成长100~500个核苷酸的范围,... 查看更多>
Plasmid stability testImmediately before indcution, it is advisable to test the culture to determine the fraction of cells that still carry the target plasmid. 查看更多>
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补充,还有说常见的有丝氨酸水解酶家族,有文献提及赖氨酸。请问这些是如何选择的

国庆节到了,给大家整理下园子内关于siRNA转染的资料。供刚开始进行转染的科研者使用。同时附上自己转染的经验。

第一部分


siRNA理论知识

siRNA转染讨论-蚂蚁淘论坛

细胞转染小技巧-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】siRNA观念性问题-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】siRNA基因敲除-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】shRNA和siRNA的区别-蚂蚁淘论坛

回复:RNAishRNA和siRNA的区别是什么,两者分别用于什么时候?-蚂蚁淘论坛

关于这方面的理论知识去看看文献综述是个好办法。

第二部分

siRNA的设计

siRNA设计的原则-蚂蚁淘论坛

siRNA设计原则-蚂蚁淘论坛

回复:【共享】SiRNA序列的设计方法-蚂蚁淘论坛

请问siRNA和shRNA的设计有何区别?-蚂蚁淘论坛

第三部分

siRNA转染效率

FAM-siRNA转染效率检测-蚂蚁淘论坛

荧光显微镜检测细胞转染效率前是否需要换液-蚂蚁淘论坛

回复:siRNA效率-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】为何siRNA转染效果不佳-蚂蚁淘论坛

回复:用lipo3000转染结直肠癌细胞dld-1,质粒DNA浓度偏低-蚂蚁淘论坛

关于siRNA转染效率的就推荐这5个帖子吧。有反馈结果的,都基本成功的帖子。外加第5个为质粒转染。

第四部分


siRNA动物体内转染

RNAi及siRNA转染相关实验技术答疑,有问题尽管提-蚂蚁淘论坛

回复:【求助】活体内的RNAi导入实验设计请教-蚂蚁淘论坛


标记基因通常用来检验重组DNA载体转化成功与否,或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因,如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。如:某种具有氨苄抗性基因质粒(该基因即可认为标记基因),与外源DNA片段组合形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体细胞是否具有氨苄抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。当用选择培养基(比如含有氨苄的培养基),来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功的导入了外源DNA,标记基因就起作用了。作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物在受体细胞中不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)其表达产物能进行定量测定。目前常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、分泌型碱性磷酸酶基因(seap)、绿色荧光蛋白基因(gfp)等。如:绿色荧光蛋白(gfp)基因。绿色荧光蛋白来源于海洋生物水母,其基因可在异源组织中表达并产生光,GFPCdnad开放阅读框架长度约740bp,编码238个氨基酸残基,其肽链内部第65-67位丝氨酸-脱氢酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基因,在长紫外波长或蓝光照射下发出绿色荧光。转染后的细胞可在荧光显微镜或流式细胞仪(FACS)中直接观察基因的表达。
sigma标准品,网站介绍说明(analytical standard).sigma提供标准品都证书 . 除外产品,都高纯试剂.用做照,定性.做

各位老师好,请问一下生工引物订单的合成量“提供总量(OD)”跟“nmoles”有啥区别,应该填哪个?最终是要配成100uM储存液,10uM的反应液的。

分装管数应该多少呢?这引物还没验证的,是不是1管就好?

小弟最近在用realtimePCR扩增HPV16病毒(双链环状DNA病毒)的一个片段。引物和探针的设计都是参考文献的。东西设计完后做了几天实验一直不出实验结果,心中焦虑万分,怀疑是引物或是探针设计的问题。求教各位达人,能否帮小弟验证一下设计的引物和探针的合理性。
上游引物:5′-GAATGTGTGTACTGCAAGCA-3′
下游引物:5′-GTTGTATTGCTGTTCTAATGTTGT-3′
Taqman探针:5′-FAM-CAGCATATGGATTCCCATCTC-TAMRA-3′
扩增的产物长度是:195bp(nt188-382)
HPV16全长序列:贴在附件中

磕头跪谢!!!

HPV16.txt(9.91k)
cDNA文库的用途 123
sjg百合2021-08-07
cDNA文库是以特定的组织或细胞mRNA为模板,逆转录形成的互补DNA(cDNA)与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌形成重组DNA克隆群,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织或细胞的cDNA文库。cDNA文库特异地反映某种组织或细胞中,在特定发育阶段表达的蛋白质的编码基因,因此cDNA文库具有组织或细胞特异性。
cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多,能够比较容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同,基因组DNA文库所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。
真核生物基因组DNA十分庞大,其复杂程度是蛋白质和mRNA的100倍左右,而且含有大量的重复序列. 采用电泳分离和杂交的方法,都难以直接分离到目的基因.这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难。
高等生物一般具有10^5种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都仅有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多。
cDNA文库在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势,从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值,是研究工作中最常使用到的基因文库。
请问pSilencer和pSUPER干扰载体(普通的质粒,不是腺病毒或慢病毒)转染动物细胞后,质粒能够整合到染色体上吗?
若不整合,干扰效果能稳定持续多长时间啊?
细胞会不会最终把游离的质粒摔掉?

上面较高的是样本曲线,下面较低的是未加样本(茎环引物和引物、探针都加入)

几种表达载体123
Doctor-pxz2021-09-08

各位大神,我现在用PET28α作为表达载体,在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后,导入感受态中没有成功,不知道怎么回事,请教各位。

【求助】pEGFPN1载体的问题 急啊123
贫乳圆香☆1032017-11-10
与以往常用的报告基因相比,GFP具有以下优点:
①在荧光显微镜下,用波长约490 nm的紫外线激发后,即可观察到绿色荧光,直接、简捷、便于检测;
②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响,保证了极高的检出率;
③蛋白本身性质稳定;
④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性;
⑤其基因片段长度较小(约717 bp),易于构建融合蛋白,且融合蛋白仍能保持荧光激发活性,为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。
pEGFP是一种优化的突变型GFP,使其产生的荧光较普通GFP强35倍,大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子,而且其N及C端均可融合,并不影响其发光。
pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因,如上图质粒图谱所示。
pEGFP-N1载体具有以下几方面特点:
①从结构上看,该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是保证目的基因稳定表达的因素之一;
②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV,可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达;
③具有多克隆位点,便于目的基因的插入;
④该载体具有neo基因,可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。
这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。向左转|向右转
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