
QuantiChrom™ Alcohol Dehydrogenase Assay Kit
- Product Overview
- Product FAQ
- Product Citations
- Assay Service
Application
- For quantitative determination of alcohol dehydrogenase activity and evaluation of drug effects on its metabolism.
Key Features
- Fast and sensitive. Linear detection range (20 μL sample): 0.4 to 80 U/L for 30 min reaction. Detection Limit of 0.1 U/L for 120 min reaction.
- Convenient and high-throughput. Homogeneous "mix-incubate-measure" type assay. Can be readily automated on HTS liquid handling systems for processing thousands of samples per day.
Method
- OD565nm
Samples
- Biological (e.g. plasma, serum, urine, tissue and culture media)
Species
- All
Size
- 100 tests
Detection Limit
- 0.4 U/L
Shelf Life
- 6 months
More Details
- ALCOHOL DEHYDROGENASE (ADH) is an oxidoreductase which catalyzes the interconversion of alcohols and aldehydes or ketones. ADH is important in humans and other organisms for the break down of alcohols which may otherwise be toxic. In yeast and some bacteria, ADHs catalyze the opposite reaction and produce alcohol as part of fermentation. BioAssay Systems non-radioactive, colorimetric ADH assay is based on the reduction of the tetrazolium salt MTT in a NADH-coupled enzymatic reaction to a reduced form of MTT which exhibits an absorption maximum at 565 nm. The increase in absorbance at 565 nm is directly proportional to the enzyme activity.
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Adeasy系统:通过原核重组极大提高了腺病毒的重组效率。其具体的构建步骤如下图。
AdMax系统:Cre/LoxP体系改造后的真核腺病毒包装体系,进一步增加的操作的便捷,同时滴度较Adeasy有进一步提高。步骤如图所示。
下面是一些经典的AdMax系统质粒图谱:
参照药物为rDNA的肽类产品,如果高纯度合成后如何申报存在争议,最近刚出指南草案,给出了一些意见,见附件。
其中该指南指出五种肽,胰高血糖素、利拉鲁肽、奈西立肽、特立帕肽、替度鲁肽。这一类品种都是属于小于等于40aa的肽类产品,其余类似的品种应该也可以参考。
其中提出一些注意事项:
杂质分布相似--------这个还挺难的,不同途径出来的杂质不同,降解杂质会比较一致。化学合成肯定有新的种类,对合成与纯化工艺也是挑战;
对于每种相关的杂质证明合成中杂质水平相同或者更低;
证明合成肽不含超过药物成分0.5%的任何新杂质;
鉴定新的肽相关杂质;
对新的肽相关杂质论证不影响安全性和有效性----------------其中包括免疫原性是个大问题,具体如何做可能需要关注;
说到底就是要去除的非常干净就容易获批。
ANDAsforCertainHighlyPurifiedSyntheticPeptideDrugProductsThatRefertoListedDrugsofrDNAOrigin.pdf(104.95k)
这方面的新手还在看文献看帖学习阶段有个疑惑看到有的文章siRNA也会用到载体比如说pSUPERxx
Thecellsweretransientlytransfectedwith4mg(1:1)pSUPER.retroandpSilencer2.1-U6hygrovectors(vectorgroup),4mgHIF-1asiRNA-expressingplasmid(HIF-1asiRNAgroup),4mgVEGFsiRNA-expressing
plasmid(VEGFsiRNAgroup),or4mg(1:1)HIF-1asiRNA-andVEGFsiRNA-expressingplasmids(co-transfectiongroup)bytheLipofectamine2000(LF2K;Invitrogen,Carlsbad,CA)methodaccordingtothemanufacturer’sinstructions
但是我看各位前辈的说法
siRNA是化学合成的加发卡结构后shRNA才可以加载体构建质粒?然后可能在进一步构建病毒
为什么文章把siRNA插入到载体里面呢?我没理解错吧?它这种表述是不是有问题呢?
然后是构建了质粒载体之后可以再包装成病毒吗?那质粒载体可以直接用吗?
可能我表述的也不太清楚。。。希望有前辈简单回答!
siRNA:Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。
siRNA有如下特点:
1. 长度约在22nt左右。
2. 依赖Dicer酶的加工,是Dicer的产物,所以具有Dicer产物的特点。
3. 生成需要Argonaute家族蛋白存在。
4. 是RISC组分。
5. siRNA合成是由双链的RNA或RNA前体形成的。
6. siRNA一般是人工体外合成的,通过转染进入人体内,是RNA干涉的中间产物;植物体内也存在内源的siRNA。
7. 结构上, siRNA是双链RNA。
8. 在Dicer酶的加工过程中, siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。
9. 在作用位置上, siRNA可作用于mRNA的任何部位,并与mRNA完全互补。
10. 在作用方式上, siRNA只能导致靶标基因的降解,即为转录水平后调控。
11. siRNA不参与生物生长,是RNAi的产物,原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。
启动子是RNA聚合酶能够识别并与之结合,从而起始基因转录的一段DNA序列,通常位于基因上游.一个典型的启 动子包括CAAT-box和TATA-box,它们分别依赖DNA的RNA聚合酶的识别和结合位点,一般位于转录起始位点上游几十个碱基处.在核心启动子上 游通常会有一些特殊的DNA序列,即顺式作用元件,转录因子与之结合从而激活或抑制基因的转录.一旦RNA聚合酶定位并结合在启动子上即可 启动基因转录,因此启动子是基因表达调控的重要元件,它与RNA聚合酶及其他蛋白辅助因子等反式作用因子的相互作用是启动子调控基因转录的实质.
根据启动子的转录模式可将其分为3类:组成型启动子、组织或器官特异性启动子和诱导型启动子.
二:主要功能:①运输功能②在逆转录作用中作为合成互补链DNA链的引物。③在细菌细胞壁、叶绿素、脂多糖和氨酰磷脂酰甘油的合成中都与某些tRNA的参与有关。

