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제품특징
□ 제품설명
TaKaRa LA PCR Kit Ver.2.1은 LA PCR technology의 효과를 최대한 활용하여 그 위력을 발휘하도록 개발한 새로운 LA PCR Kit이다. LA PCR용으로 최적화한 전용 buffer (LA PCR Buffer II)와 TaKaRa LA Taq 의 조합으로, human genomic DNA를 template으로 긴 단편의 DNA를 증폭하는 등 보다 긴 단편의 PCR을 가능하게 하는 PCR Kit이다. 물론 다양한 template DNA에 응용할 수 있으며 짧은 단편의 DNA 증폭에도 사용할 수 있다. Mg2+ free의 buffer를 첨부하므로써 반응액 조성을 검토할 수 있다.
□ 내용 (50 ㎕ PCR 50 회)
| TaKaRa LA Taq (5 U/㎕) | 125 U |
| dNTP Mixture (각 2.5 mM) | 400 ㎕ |
| 10 × LA PCR Buffer II (Mg2+, plus) (Mg2+ 농도 25 mM) | 250 ㎕ |
| 10 × LA PCR Buffer II (Mg2+ free) | 250 ㎕ |
| MgCl2 (25 mM) | 500 ㎕ |
| Control Template (100 ng/㎕ HT29 유래 genome DNA) | 10 ㎕ |
| Control Primer LA3 (10 μM) | 10 ㎕ |
| Control Primer LA4 (10 μM) | 10 ㎕ |
| λ-Hind III digested MW Marker (100 ng/㎕) | 20 ㎕ |
| 2×GC Buffer I (Mg2+ plus)* (Mg2+ 농도 5 mM) | 1.25 ㎖ |
| 2×GC Buffer II (Mg2+ plus)* (Mg2+ 농도 5 mM) | 1.25 ㎖ |
| Control Primer GC1 (10 μM) | 10 ㎕ |
| Control Primer GC2 (10 μM) | 10 ㎕ |
* 증폭영역이 GC-rich 또는 견고한 2차 구조를 취하는 것으로 판단되는 경우, 우선 2×GC Buffer I을 사용한다. Buffer I으로 증폭이 어려운 경우에는 2×GC Buffer II를 사용하는 경우 반응이 개선되는 경우가 있다.
□ 보존 -20℃
□ Control Primer 서열
| Control Primer LA3 :5’-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3’Control Primer LA4 :5’-TGCACCTGCTCTGTGATTATGACTATCCCACAGTC-3’* Control Template의 17.5 kb를 증폭한다.Control Primer GC1 :5’-GGGAGGGGACCGGGGAACAGAG-3’Control Primer GC2 :5’-GAACAGTCCGTCACTTCACGTG-3’* Control Template의 GC-rich 영역 1,255 bp를 증폭한다. |
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2.腹水浓稀释于3倍体积Tris缓冲液1~5 ml/min 速度于蛋白A-Sepharose柱用Tris缓冲液洗柱直至所未结合蛋白都洗脱采用A280监测
3.依用2~3倍柱床体积柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白洗脱蛋白直接接入装缓冲液管缓冲液体积应所收集蛋白体积1/4
4.采用ELISA检测抗原特异性MAb
5.超滤器浓缩所离单克隆抗体1~5mg/ml所用超滤膜XM50单克隆抗体存于-20℃
双缩脲试剂工作原理铜离强碱性条件与肽键发反应紫色络合物
(我做实验候斐林试剂先试管制加原糖溶液双缩脲试剂先往蛋白质加碱再加铜离所原双缩脲试剂硫酸铜浓度比氢氧化钠稀斐林试剂二者浓度相近原)
ClonExpress II One Step Cloning Kit同源重组克隆试剂盒同原理重组效率高我实验室都用克隆试剂盒基本用重复实验功推荐使用产品
美国约翰斯·霍普金斯大学研究人员曾在两年前发表论文说,多数癌症发病要怪“坏运气”,遗传和环境因素影响相对较小。这一结论在科学界引起巨大争议。如今,该校研究人员经进一步分析再次报告说,多数癌症发病确实是因为运气不好。
干细胞分裂时出现错误
这项于23日发表在美国《科学》杂志上的新研究称,近三分之二的癌症基因突变可归咎于健康细胞在分裂过程中发生的DNA(脱氧核糖核酸)复制随机错误,而不是遗传基因或环境因素。
“正常细胞每次分裂时,都会发生几个错误或者说突变。这些突变大多数时候不会造成伤害,因为它们发生在垃圾DNA上、与癌症无关的基因上或者不重要的区域。这是通常情况,按我们的说法这就是好运气,”研究报告作者、约翰斯·霍普金斯大学肿瘤学教授贝尔特·福格尔斯坦在华盛顿举行的记者会上说。“但它们偶然发生在癌症驱动基因上,这就是坏运气。”
福格尔斯坦等人2015年1月在《科学》杂志上发表文章称,人体组织的癌症风险差异可以用干细胞分裂时出现的错误,即所谓“坏运气”来进行解释,三分之二的癌症基因突变是“坏运气”的结果,另三分之一归因于遗传和环境因素。
不同观点认为癌症仍可预防
这一结论随即引起极大争议。许多科学家批评说,该研究完全基于美国癌症患者,没有纳入乳腺癌与前列腺癌两种常见癌症,且严重低估癌症预防的作用,是一种“危险的误导”。
最新研究中,福格尔斯坦等人基于423个国际癌症数据库,利用数学模型分析了全球近70个国家人群干细胞分裂与癌症风险之间的关系。这些国家的人口总计达48亿,约占全球总人口的三分之二。结果显示,癌症风险和干细胞分裂之间存在强相关性。这种关联具有普遍性,并非仅适用于美国。
例如,胰腺癌77%的突变可归因于DNA复制随机错误,18%为吸烟等环境因素,只有5%是遗传因素;肺癌的情况则大不一样,65%的突变归因于环境因素,其中主要是吸烟,35%是DNA复制随机错误,而遗传因素没有影响。
“成百上千万人过着几近完美的生活方式,不吸烟、晒太阳前擦防晒霜、饮食健康、经常锻炼,做了我们认为可以防癌的一切事情,但他们还是患上癌症。我们希望这项研究能为这些患者带来安慰。”福格尔斯坦说。“他们需要知道不管他们做了什么,癌症还是可能会发生。”
《科学》杂志配发的一篇评论文章说,预计有关癌症“坏运气”理论的争论还会继续下去。还有专家认为,这项研究并不意味着否认通过改善环境和生活方式预防癌症的重要性,英国癌症研究会就认为,42%的癌症病例可以预防。
1.形态突变:结构镰刀型细胞贫血症;体水平红眼突变白眼
2.化突变:镰刀型细胞贫血症血红蛋白结构突变原理
3.致死突变:比隐性纯合致死
设计引物候引物度设置25-27左右
主要分两种情况
1 如果是在受精卵分裂时发生的突变,就有可能是可遗传的,因为全身的细胞都是由受精卵发育来的
2 如果是已经差不多成形的胎儿 以及之后的整个生命过程中突变则又可分3种情况
A 发生在体细胞的突变这种是不可遗传的
B 发生在生殖细胞的突变如果那个突变了的生殖细胞成功地与对方结合形成受精卵的话那么就把突变遗传下去了;如果那个突变的生殖细胞没有被"用到"那也就没有遗传下去
C如果是体细胞发生的基因突变只能在本体体现,而只有生殖细胞的基因突变才有可能遗传给下一代
总的的来说就是基因突变在配子或性染色体中可遗传给后代,而发生在体细胞中不会遗传给后代
希望对你有所帮助,望采纳O(∩_∩)O谢谢~
P因子随机插入会导致基因发生突变,产生突变体,请问怎么用PCR来鉴定是哪个基因发生突变?求告知讲解,非常感谢!
表达谱差异分析(differential expression profiling)主要包括基因表达谱(gene expression profiling) 和蛋白质表达谱(protein expression profiling) 。大规模表达谱分析已经成为认识疾病分子机制的有利方法,在癌症研究等方面取得了一定的进展。成功的表达谱分析基于实验及其过程分析的有机结合。实验过程从关注的疾病开始,首先收集大量的疾病相关组织样本,样本数量可从10 多个到数百个,但必须足以对每一组织类型及个体差异进行比较分析,而且许多情况下不能仅简单地分为正常和疾病组织。例如,在对糖尿病的研究中,所收集的样本来自健康人、胰岛素耐受和糖尿病病人的不同试验阶段,如胰岛素治疗前后。样品还应包括其他器官的取材,以便进行基因表达的组织分布研究。为了便于对后来的实验数据进行分析管理,需采集并储存所有的组织样本和临床参数。接下来进行组织样本的处理,利用生物芯片(寡核苷酸芯片、cDNA 芯片或全基因组芯片) 进行表达谱测定,并进行生物信息学分析。
通常,表达谱的分析结果需进一步的实验加以证实。定量RT2PCR 是最灵敏的确证方法,该方法还可以将确证实验的范围扩大到原测组织以外的更广泛的组织和组织类型,揭示基因表达的组织分布情况。
确证实验揭示了疾病相关基因。据此,可以进行进一步研究,探索这些基因的功能,开发新的治疗手段。例如,对于正常和疾病组织中表达有显著性变化的基因,可以进行新治疗靶点的鉴定和确定研究,或利用实验和分析工具研究分析其功能;对于疾病组织中活性升高的酶,可以当作前药活化酶进行鉴定研究。典型的表达谱能够显示疾病过程中有大量的已知基因表达的改变,而许多已知基因的代谢通路、表达产物酶学分类和蛋白质功能业已发表,将两者对照分析,可以鉴定出酶活性,选择其中可能成为前药活化酶的部分进行进一步研究;对于疾病特异的蛋白质,可以进行抗原表型分析,决定疫苗的开发策略。
寻找差异表达基因的方法除芯片技术外,一些新的检测方法如差异显示PCR ( differential display PCR, DD-PCR) 、消减杂交( suppression subreactive hy bridization , SSH) 等也相继得到结合应用。
[日期]BiolChem.2004Jun3
[作者]SordetO,LiaoZ,LiuH,AntonyS,StevensEV,KohlhagenG,FuH,PommierY.
[单位]NCI,NIH,Bethesda,MD20892.
[摘要]TopoisomeraseIisanessentialenzymethatrelaxesDNAsupercoilingbyformingcovalentDNAcleavagecomplexes,whicharenormallytransient.TopoisomeraseI-DNAcomplexescanbetrappedbyanticancerdrugs(camptothecins),aswellasbyendogenousandexogenousDNAlesions.Weshowherethatarsenictrioxide(apotentinducerofapoptosisthatinducestheintracellularaccumulationofreactiveoxygenspeciesandtargetsmitochondria)inducescellulartopoisomeraseIcleavagecomplexes.Bcl-2overexpressionandquenchingofreactiveoxygenspecies,whichpreventarsenictrioxide-inducedapoptosis,alsopreventtheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes,whereasenhancementofreactiveoxygenspeciesaccumulationpromotesthesecomplexes.Thecaspaseinhibitor,z-VADpartiallypreventsarsenictrioxide-inducedtopoisomeraseI-DNAcomplexesandapoptosis,suggestingthatactivatedcaspasesfurthermaintainintracellularlevelsofreactiveoxygenspeciesthatinducetheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes.DownregulationoftopoisomeraseIexpressiondecreasesarsenictrioxide-inducedapoptoticDNAfragmentation.Thus,weproposethatarsenictrioxideinducestopoisomeraseI-DNAcomplexesthatparticipateinchromatinfragmentationandprogrammedcelldeathduringapoptosis.
[翻译]拓扑异构酶I是一种很重要的酶,可以作用于DNA,与之形成短暂的DNA共价物,使DNA超螺旋结构解开。抗癌药物如喜树碱,以及内源性和外源性的DNA损伤剂可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物形成。我们研究发现三氧化二砷(细胞凋亡诱导剂,能诱导细胞内活性氧和线粒体增多)可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物的形成Bcl-2表达增加和活性氧的消失提示Bcl-2可以预防三氧化二砷引起的细胞凋亡以及防止拓扑异构酶I–DNA复合物形成,z-VAD不仅是caspases的抑制剂,也可以防止拓扑异构酶I–DNA复合物的形成,他的作用说明拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很有可能是通过激活caspases导致细胞内活性氧的含量进一步升高。拓扑异构酶I表达下调会降低三氧化二砷诱导的细胞小体的生成,因此,我们推测三氧化二砷诱导的拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很可能导致染色体的断裂和程序化细胞死亡。
[点评]一直以来,我们发现三氧化二砷可以用来治疗白血病,但对于它为什么能用来治疗白血病我们一直不太清楚它的机制,对于三氧化二砷的毒理研究目前是热点。希望通过本摘要的翻译,引起大家对毒物的机制研究的兴趣。

