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RayBiotech/Human RTK Phosphorylation Array G1/4 Sample Kit/AAH-PRTK-G1-4
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RayBiotech/Human RTK Phosphorylation Array G1/4 Sample Kit/AAH-PRTK-G1-4
品牌 / 
RayBiotech
货号 / 
AAH-PRTK-G1-4
美元价:
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Antigen Information

Gene Symbols:
ABL1 | AXL | BLK | BMX | BTK | CSF1R | CSK | DDR2 | EGFR | EPHA1 View more Hide

Assay Format

Pathway:
  • PI3K-AKT Signaling
Number of Targets Detected:
71
Species Detected:
  • Human
Compatible Sample Types:
  • Cell Culture Supernatants
  • Cell Lysates
  • Plasma
  • Serum
  • Tissue Lysates
Design Principle:
  • Sandwich-based
Method of Detection:
Fluorescence Laser Scanner
Quantitative/Semi-Quantitative:
  • Semi-Quantitative
Solid Support:
Glass Slide

Product Specifications

Size:
4 or 8 Sample Kit

Product Features

  • High sensitivity and specificity
  • Low sample volume (10-100 µl per array)
  • Large dynamic range of detection
  • Compatible with most sample types
  • Test 4 or 8 samples on each slide
  • Suitable for high-throughput assays

Target Names

Scroll over each target protein for more information
ABL1
  • Gene Symbol: ABL1
  • Gene ID: 25
  • Accession #: P00519
ACK
  • Gene Symbol: TNK2
  • Gene ID: 10188
  • Accession #: Q07912
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ACK ELISA
ALK-1
  • Gene Symbol: ALK
  • Gene ID: 238
  • Accession #: Q9UM73
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ALK ELISA
Axl
  • Gene Symbol: Axl
  • Gene ID: 558
  • Accession #: P30530
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine AXL ELISA
Blk
  • Gene Symbol: BLK
  • Gene ID: 640
  • Accession #: P51451
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine BLK ELISA
BMX
  • Gene Symbol: BMX
  • Gene ID: 660
  • Accession #: P51813
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine BMX ELISA
Btk
  • Gene Symbol: BTK
  • Gene ID: 695
  • Accession #: Q06187
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine BTK ELISA
Csk
  • Gene Symbol: CSK
  • Gene ID: 1445
  • Accession #: P41240
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine CSK ELISA
Dtk
  • Gene Symbol: TYRO3
  • Gene ID: 7301
  • Accession #: Q06418
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine DTK ELISA
EGFR
  • Gene Symbol: EGFR
  • Gene ID: 1956
  • Accession #: P00533
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EGFR ELISA
EphA1
  • Gene Symbol: EphA1
  • Gene ID: 2041
  • Accession #: P21709
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA1 ELISA
EphA2
  • Gene Symbol: EphA2
  • Gene ID: 1969
  • Accession #: P29317
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA2 ELISA
EphA3
  • Gene Symbol: EphA3
  • Gene ID: 2042
  • Accession #: P29320
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA3 ELISA
EphA4
  • Gene Symbol: EphA4
  • Gene ID: 2043
  • Accession #: P54764
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA4 ELISA
EphA5
  • Gene Symbol: EphA5
  • Gene ID: 2044
  • Accession #: P54756
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA5 ELISA
EphA6
  • Gene Symbol: EphA6
  • Gene ID: 285220
  • Accession #: Q9UF33
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA6 ELISA
EphA7
  • Gene Symbol: EphA7
  • Gene ID: 2045
  • Accession #: Q15375
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA7 ELISA
EphA8
  • Gene Symbol: EphA8
  • Gene ID: 2046
  • Accession #: P29322
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphA8 ELISA
EphB1
  • Gene Symbol: EphB1
  • Gene ID: 2047
  • Accession #: P54762
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphB1 ELISA
EphB2
  • Gene Symbol: EphB2
  • Gene ID: 2048
  • Accession #: P29323
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphB2 ELISA
EphB3
  • Gene Symbol: EphB3
  • Gene ID: 2049
  • Accession #: P54753
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphB3 ELISA
EphB4
  • Gene Symbol: EphB4
  • Gene ID: 2050
  • Accession #: P54760
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphB4 ELISA
EphB6
  • Gene Symbol: EphB6
  • Gene ID: 2051
  • Accession #: O15197
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine EphB6 ELISA
ErbB2
  • Gene Symbol: ErbB2
  • Gene ID: 2064
  • Accession #: P04626
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine Erb-B2 ELISA
ErbB3
  • Gene Symbol: ErbB3
  • Gene ID: 2065
  • Accession #: P21860
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine Erb-B3 ELISA
ErbB4
  • Gene Symbol: ErbB4
  • Gene ID: 2066
  • Accession #: Q15303
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine Erb-B4 ELISA
FAK
  • Gene Symbol: PTK2
  • Gene ID: 5747
  • Accession #: Q05397
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FAK ELISA
FER
  • Gene Symbol: FER
  • Gene ID: 2241
  • Accession #: P16591
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FER ELISA
FGFR1
  • Gene Symbol: FGFR1
  • Gene ID: 2260
  • Accession #: P11362
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FGFR1 ELISA
FGFR2
  • Gene Symbol: FGFR2
  • Gene ID: 2263
  • Accession #: P21802
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FGFR2 ELISA
FGFR2 alpha isoform
  • Gene Symbol: FGFR2
  • Gene ID: 2263
  • Accession #: P21802
Fgr
  • Gene Symbol: FGR
  • Gene ID: 2268
  • Accession #: P09769
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FGR ELISA
FRK
  • Gene Symbol: FRK
  • Gene ID: 2444
  • Accession #: P42685
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FRK ELISA
Fyn
  • Gene Symbol: FYN
  • Gene ID: 2534
  • Accession #: P06241
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine FYN ELISA
Hck
  • Gene Symbol: HCK
  • Gene ID: 3055
  • Accession #: P08631
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine HCK ELISA
HGFR
  • Gene Symbol: MET
  • Gene ID: 4233
  • Accession #: P08581
  • ELISA Kit: RayBio Human HGF R ELISA
IGF-1 R
  • Gene Symbol: IGF1R
  • Gene ID: 3480
  • Accession #: P08069
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine IGF-1R ELISA
Insulin R(CD220)
  • Gene Symbol: INSR
  • Gene ID: 3643
  • Accession #: P06213
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine Insulin R ELISA
Itk
  • Gene Symbol: ITK
  • Gene ID: 3702
  • Accession #: Q08881
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ITK ELISA
JAK1
  • Gene Symbol: JAK1
  • Gene ID: 3716
  • Accession #: P23458
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine JAK1 ELISA
JAK2
  • Gene Symbol: JAK2
  • Gene ID: 3717
  • Accession #: O60674
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine JAK2 ELISA
JAK3
  • Gene Symbol: JAK3
  • Gene ID: 3718
  • Accession #: P52333
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine JAK3 ELISA
LCK
  • Gene Symbol: LCK
  • Gene ID: 3932
  • Accession #: P06239
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine LCK ELISA
LTK
  • Gene Symbol: LTK
  • Gene ID: 4058
  • Accession #: P29376
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine LTK ELISA
Lyn
  • Gene Symbol: LYN
  • Gene ID: 4067
  • Accession #: P07948
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine LYN ELISA
MATK
  • Gene Symbol: MATK
  • Gene ID: 4145
  • Accession #: P42679
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine MATK ELISA
M-CSF R
  • Gene Symbol: CSF1R
  • Gene ID: 1436
  • Accession #: P07333
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine MCSFR ELISA
MUSK
  • Gene Symbol: MuSK
  • Gene ID: 4593
  • Accession #: O15146
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine MUSK ELISA
NGFR(TNFRSF16)
  • Gene Symbol: NGFR
  • Gene ID: 4804
  • Accession #: P08138
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine NGFR ELISA
PDGFRA
  • Gene Symbol: PDGFRA
  • Gene ID: 5156
  • Accession #: P16234
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine PDGFRA ELISA
PDGFRB
  • Gene Symbol: PDGFRB
  • Gene ID: 5159
  • Accession #: P09619
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine PDGFRB ELISA
PYK2
  • Gene Symbol: PTK2B
  • Gene ID: 2185
  • Accession #: Q14289
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine PYK2 ELISA
RET
  • Gene Symbol: RET
  • Gene ID: 5979
  • Accession #: P07949
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine RET ELISA
ROR1
  • Gene Symbol: ROR1
  • Gene ID: 4919
  • Accession #: Q01973
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ROR1 ELISA
ROR2
  • Gene Symbol: ROR2
  • Gene ID: 4920
  • Accession #: Q01974
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ROR2 ELISA
ROS
  • Gene Symbol: ROS1
  • Gene ID: 6098
  • Accession #: P08922
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ROS ELISA
RYK
  • Gene Symbol: RYK
  • Gene ID: 6259
  • Accession #: P34925
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine RYK ELISA
SCF R(CD117/c-kit)
  • Gene Symbol: KIT
  • Gene ID: 3815
  • Accession #: P10721
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine SCFR ELISA
SRMS
  • Gene Symbol: SRMS
  • Gene ID: 6725
  • Accession #: Q9H3Y6
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine SRMS ELISA
SYK
  • Gene Symbol: SYK
  • Gene ID: 6850
  • Accession #: P43405
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine SYK ELISA
Tec
  • Gene Symbol: TEC
  • Gene ID: 7006
  • Accession #: P42680
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TEC ELISA
Tie-1
  • Gene Symbol: TIE1
  • Gene ID: 7075
  • Accession #: P35590
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TIE1 ELISA
Tie-2
  • Gene Symbol: TEK
  • Gene ID: 7010
  • Accession #: Q02763
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TIE2 ELISA
TNK1
  • Gene Symbol: TNK1
  • Gene ID: 8711
  • Accession #: Q13470
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TNK1 ELISA
TRKB
  • Gene Symbol: NTRK2
  • Gene ID: 4915
  • Accession #: Q16620
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TRKB ELISA
TXK
  • Gene Symbol: TXK
  • Gene ID: 7294
  • Accession #: P42681
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TXK ELISA
Tyk2
  • Gene Symbol: TYK2
  • Gene ID: 7297
  • Accession #: P29597
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TYK2 ELISA
TYRO10(DDR2/TKT)
  • Gene Symbol: DDR2
  • Gene ID: 4921
  • Accession #: Q16832
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine TYRO10 ELISA
VEGFR2
  • Gene Symbol: KDR
  • Gene ID: 3791
  • Accession #: P35968
  • ELISA Kit: RayBio Human VEGF R2 ELISA
VEGFR3
  • Gene Symbol: FLT4
  • Gene ID: 2324
  • Accession #: P35916
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine VEGFR3 ELISA
ZAP70
  • Gene Symbol: ZAP70
  • Gene ID: 7535
  • Accession #: P43403
  • ELISA Kit: RayBio Human Phosphotyrosine ZAP70 ELISA

Species Detected

Human

Application Notes

Suggested Application
Multiplexed Protein Detection; Detection of Relative Protein Expression; Detecting Patterns of Cytokine Expression; Biomarker Screening; Identifying Key Factors; Confirming a Biological Process
Kit Components
  • Human RTK Phosphorylation Antibody Array G1 Slide(s)
  • Blocking Buffer
  • Wash Buffer 1
  • Wash Buffer 2
  • Biotinylated Detection Antibody Cocktail
  • Streptavidin-Conjugated Fluor
  • Lysis Buffer
  • Protease Inhibitor Cocktail
  • Phosphatase Inhibitor Cocktail II
  • Adhesive Plastic Strips
  • 30 ml Centrifuge Tube
  • Manual
Other Materials Required
  • Small plastic boxes or containers
  • Pipettors, pipette tips and other common lab consumables
  • Orbital shaker or oscillating rocker
  • Aluminum foil
  • Gene microarray scanner or similar laser fluorescence scanner
Protocol Outline
  1. Dry the glass slide
  2. Block array surface
  3. Incubate with Sample
  4. Incubate with Biotinylated Detection Antibody Cocktail
  5. Incubate with Streptavidin-Conjugated Fluor
  6. Disassemble the glass slide
  7. Scan with a gene microarray laser scanner
  8. Perform densitometry and analysis

Storage/Stability

For best results, store the entire kit frozen at -20°C upon arrival. Stored frozen, the kit will be stable for at least 6 months which is the duration of the product warranty period. Once thawed, store array slide(s) and 1X Blocking Buffer at -20°C and all other reagents undiluted at 4°C for no more than 3 months.
  1. Matsumoto M., Seike M., Noro R., et al. Control of the MYC-eIF4E axis plus mTOR inhibitor treatment in small cell lung cancer. BMC Cancer. 2015 Apr 9;15:241. doi: 10.1186/s12885-015-1202-4.Species: HumanSample type: Cell Lysate
  2. Cui Y., Xiw S., Luan J., et al. Identification of the receptor tyrosine kinases (RTKs)-oriented functional targets of miR-206 by an antibody-based protein array. FEBS Lett. 2015 Jul 22;589(16):2131-5. doi: 10.1016/j.febslet.2015.06.026. Species: HumanSample type: Cell Lysate
  3. Shabtay-Orbach A., Amit M., Binenbaum Y., et al. Paracrine regulation of glioma cells invasion by astrocytes is mediated by glial-derived neurotrophic factor. Int J Cancer. 2015 Sep 1;137(5):1012-20. doi: 10.1002/ijc.29380.Species: HumanSample type: Cell Lysate
  4. Amit, Moran, and Ziv Gil. "Macrophages increase the resistance of pancreatic adenocarcinoma cells to gemcitabine by upregulating cytidine deaminase."?Oncoimmunology?2.12 (2013): e27231.Species: HumanSample type: Cell Lysate
  5. Zhang H., Pelech S. Using protein microarrays to study phosphorylation-mediated signal transduction. Semin Cell Dev Biol. 2012 Oct;23(8):872-82. doi: 10.1016/j.semcdb.2012.05.009Species: HumanSample type: N/A
  6. Qi W, Cooke LS, Stejskal A, Riley C, Croce KD, et al. MP470, a novel receptor tyrosine kinase inhibitor, in combination with Erlotinib inhibits the HER family/PI3K/Akt pathway and tumor growth in prostate cancer. BMC Cancer. 2009;9:142. doi:10.1186/1471-2407-9-142Species: HumanSample type: Cell Lysate
  7. Wenqing Q, Cooke LS, Stejskal A, Riley C, Croce KD, Saldanha JW, Bearss D, Mahadevan D. MP470, a novel receptor tyrosine, in combination with Erlotinib inhibits the HER family/PI3K/Akt pathway and tumor growth in prostate cancer. BMC Cancer 2009;9:142. Species: HumanSample type: Cell Lysate
Highly informative setup that answers many initial questions and provides insights on future directions. The protocol is easy to follow and not very time consuming. The final results came out clear with high degree of reproducibility. Very low background and great signal to noise ratio. On the less positive side I would mention high cost of the kit. But given the fact the kit provides with great amount of data the one might consider the price factor as worthwhile.
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公司介绍
公司简介
蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-08-12
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稳定转染hif-1α rna干扰表达载体_有道翻译
翻译结果:
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
稳定转染hif-1α rna干扰表达载体_有道翻译
翻译结果:
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
表达载体构建正义和反义,一般用于基因功能的研究,正义为强势表达
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
表达载体的构建方法及步骤 123
镜音双子9536922017-10-01
有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切,然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上,再从过度载体抢切下目的基因,最后再连接到酶切过的表达载体上。
1、目的基因:是人们需要的特定基因,主要指编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子.
2、基因表达载体的构建
(1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用.(2)基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
②启动子在基因的首段,它是RNA聚合酶的结合位点,能控制着转录的开始,故②正确;
③终止子在基因的尾端,它控制着转录的结束,故③正确;
④由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分,以及目的基因导入受体细胞的方法不同,因此基因表达载体的构建是不完全相同的,
免疫沉淀
当然,确定miRNA与mRNA之间的互作,我们还有更直接的方法,那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物(RISC)中的Argonaut(AGO)蛋白的抗体进行免疫共沉淀(co-IP)。生物通 www.ebiotrade.com
目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物,然后开展深度测序以鉴定发现的RNA,这种方法被称为紫外交联免疫沉淀结合高通量测序(HITS-CLIP),或CLIP-seq。利用这种方法来寻找miRNA的靶基因,能够明显降低miRNA结合位点的假阳性预测率,并且缩小miRNA结合位点的空间范围,可在全基因组范围内鉴定AGO蛋白与不同RNA上的结合。现在有多家公司提供CLIP-seq服务,如锐博生物。
Clontech公司(Takara旗下)也推出了一种新工具,能协助鉴定细胞中的miRNA靶点。这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体,允许miRNA与其目标结合,但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中,并“锁定”miRNA-目标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK(FLAG表位)标签有助于整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其目标的免疫沉淀,从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。生物通
整个过程大致如下:
1. 创建miRNA模拟物。生物通 www.ebiotrade.com
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞,并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。生物通 www.ebiotrade.com
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物(其中包括靶标mRNA)进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA,鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。
Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后,细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞,它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样,研究人员只需投入很少,就能实现大范围的筛选。
靶基因的验证
预测终归是预测,miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似,也就是抑制或过表达miRNA,然后检查mRNA或蛋白水平的反应。生物通 www.ebiotrade.com
目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先,构建荧光素酶表达载体,将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中,然后将构建好的重组载体转染到细胞中,并改变miRNA的表达水平,最后检测荧光素酶的表达情况,以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。
目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pmirGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因,其中萤火虫荧光素酶(luc2)作为主要报告基因,其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合;海肾荧光素酶/新霉素基因(hRluc-neo)作为对照报告基因,既能实现归一化处理,又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。
就目前而言,预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少,但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展,这种现状有望改变。让我们拭目以待吧。(生物通 余亮)

我现在手上有PMD2.G与PSPAX2两个载体,求推荐与其配套的慢病毒过表达载体,谢谢。

基因捕获载体在基因组中也有“hot”和“cold”插入位点。但是计算机模拟显示,按照单个克隆被捕获的百分比,如果以多种类型的载体进行足够多次的突变实验所获得的突变克隆就可以覆盖整个ES细胞基因组中全部基因位点 。因此,新型捕获策略和载体不断被设计应用。
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。因此,在第一、二代基因捕获载体中应用报告基因和含自身启动子( PGK) 的筛选标记基因neo ,抗药性的产生不需要捕获基因的表达。不同的是,第二代基因捕获载体中筛选标记基因3′末端没有polyA 加尾信号而含有一剪接供体序列 ,必须由内源基因提供polyA 加尾信号以产生稳定的筛选标记基因mRNA 而获得筛选克隆,因此与第一代载体相比,降低了基因间插入的背景。polyA 捕获载体还解决了第一代基因捕获载体突变基因信息鉴定的难题。3′- RACE 可用以鉴定polyA 捕获基因3′端编码序列或3′非翻译区(UTRs) 序列信息,对于基因鉴定比5′- UTRs 序列有用得多。用以克隆捕获特异类型蛋白编码基因的多种新型载体也已问世,如Skarnes 等利用分泌蛋白的原理及β-gal 活性在内质网被灭活的特点设计了一种载体专门用以捕获在ES 细胞中表达的编码穿膜分泌蛋白的基因 。一些研究小组还在载体中引入了重组位点,以实现由重组酶介导的捕获位点插入后修饰 。这种“敲进 ”的策略允许对捕获位点作进一步修饰,如“指派”捕获基因的启动子成分驱动敲入的转基因表达来进行“回复突变( rescue) ”或细胞标记实验;通过敲入含不同突变的捕获基因cDNA 还可产生等位基因系列;含lox 位点的载体还可实现在捕获基因组条件性取代载体产生更精细的突变,包括点突变和/ 或选择性表型标记,可以更好地控制突变的性质。向左转|向右转
生物发光,是生物素酶
世界上第一支病毒载体的基因治疗抗肿瘤药物是由哪个公司研发生产的
黄单胞菌,革兰氏阴性,进行基因敲除。
有什么样的载体可以选择?
选择的依据是什么?

敬请行家指教......
病毒量偏高了,要治疗
因为目的基因要靠运载体进入受体细胞,然后目的基因才能在受体细胞中表达。所以基因表达载体的构建是基因工程的核心
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