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RayBiotech/Human RTK Phosphorylation Array G1/4 Sample Kit/AAH-PRTK-G1-4
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4000-520-616
Antigen Information
Gene Symbols:
ABL1 | AXL | BLK | BMX | BTK | CSF1R | CSK | DDR2 | EGFR | EPHA1| EPHA2 | EPHA3 | EPHA4 | EPHA5 | EPHA6 | EPHA7 | EPHA8 | EPHB1 | EPHB2 | EPHB3 | EPHB4 | EPHB6 | ERBB2 | ERBB3 | ERBB4 | FER | FGFR1 | FGFR2 | FGR | FLT4 | FRK | FYN | HCK | IGF1R | INSR | ITK | JAK1 | JAK2 | JAK3 | KDR | KIT | LCK | LTK | LYN | MATK | MET | MUSK | NGFR | NTRK2 | PDGFRA | PDGFRB | PTK2 | PTK2B | RET | ROR1 | ROR2 | ROS1 | RYK | SLPI | SRMS | SYK | TEC | TEK | TIE1 | TNK1 | TNK2 | TXK | TYK2 | TYRO3 | ZAP70 View more Hide
Assay Format
Pathway:
- PI3K-AKT Signaling
Number of Targets Detected:
71
Species Detected:
- Human
Compatible Sample Types:
- Cell Culture Supernatants
- Cell Lysates
- Plasma
- Serum
- Tissue Lysates
Design Principle:
- Sandwich-based
Method of Detection:
Fluorescence Laser Scanner
Quantitative/Semi-Quantitative:
- Semi-Quantitative
Solid Support:
Glass Slide
Product Specifications
Size:
4 or 8 Sample Kit
Product Features
- High sensitivity and specificity
- Low sample volume (10-100 µl per array)
- Large dynamic range of detection
- Compatible with most sample types
- Test 4 or 8 samples on each slide
- Suitable for high-throughput assays
Target Names
Scroll over each target protein for more information | ||||
---|---|---|---|---|
ABL1
| ACK
| ALK-1
| Axl
| Blk
|
BMX
| Btk
| Csk
| Dtk
| EGFR
|
EphA1
| EphA2
| EphA3
| EphA4
| EphA5
|
EphA6
| EphA7
| EphA8
| EphB1
| EphB2
|
EphB3
| EphB4
| EphB6
| ErbB2
| ErbB3
|
ErbB4
| FAK
| FER
| FGFR1
| FGFR2
|
FGFR2 alpha isoform
| Fgr
| FRK
| Fyn
| Hck
|
HGFR
| IGF-1 R
| Insulin R(CD220)
| Itk
| JAK1
|
JAK2
| JAK3
| LCK
| LTK
| Lyn
|
MATK
| M-CSF R
| MUSK
| NGFR(TNFRSF16)
| PDGFRA
|
PDGFRB
| PYK2
| RET
| ROR1
| ROR2
|
ROS
| RYK
| SCF R(CD117/c-kit)
| SRMS
| SYK
|
Tec
| Tie-1
| Tie-2
| TNK1
| TRKB
|
TXK
| Tyk2
| TYRO10(DDR2/TKT)
| VEGFR2
| VEGFR3
|
ZAP70
|
Species Detected
Human
Application Notes
Suggested Application
Multiplexed Protein Detection; Detection of Relative Protein Expression; Detecting Patterns of Cytokine Expression; Biomarker Screening; Identifying Key Factors; Confirming a Biological Process
Kit Components
- Human RTK Phosphorylation Antibody Array G1 Slide(s)
- Blocking Buffer
- Wash Buffer 1
- Wash Buffer 2
- Biotinylated Detection Antibody Cocktail
- Streptavidin-Conjugated Fluor
- Lysis Buffer
- Protease Inhibitor Cocktail
- Phosphatase Inhibitor Cocktail II
- Adhesive Plastic Strips
- 30 ml Centrifuge Tube
- Manual
Other Materials Required
- Small plastic boxes or containers
- Pipettors, pipette tips and other common lab consumables
- Orbital shaker or oscillating rocker
- Aluminum foil
- Gene microarray scanner or similar laser fluorescence scanner
Protocol Outline
- Dry the glass slide
- Block array surface
- Incubate with Sample
- Incubate with Biotinylated Detection Antibody Cocktail
- Incubate with Streptavidin-Conjugated Fluor
- Disassemble the glass slide
- Scan with a gene microarray laser scanner
- Perform densitometry and analysis
Storage/Stability
For best results, store the entire kit frozen at -20°C upon arrival. Stored frozen, the kit will be stable for at least 6 months which is the duration of the product warranty period. Once thawed, store array slide(s) and 1X Blocking Buffer at -20°C and all other reagents undiluted at 4°C for no more than 3 months.
- Matsumoto M., Seike M., Noro R., et al. Control of the MYC-eIF4E axis plus mTOR inhibitor treatment in small cell lung cancer. BMC Cancer. 2015 Apr 9;15:241. doi: 10.1186/s12885-015-1202-4.Species: HumanSample type: Cell Lysate
- Cui Y., Xiw S., Luan J., et al. Identification of the receptor tyrosine kinases (RTKs)-oriented functional targets of miR-206 by an antibody-based protein array. FEBS Lett. 2015 Jul 22;589(16):2131-5. doi: 10.1016/j.febslet.2015.06.026. Species: HumanSample type: Cell Lysate
- Shabtay-Orbach A., Amit M., Binenbaum Y., et al. Paracrine regulation of glioma cells invasion by astrocytes is mediated by glial-derived neurotrophic factor. Int J Cancer. 2015 Sep 1;137(5):1012-20. doi: 10.1002/ijc.29380.Species: HumanSample type: Cell Lysate
- Amit, Moran, and Ziv Gil. "Macrophages increase the resistance of pancreatic adenocarcinoma cells to gemcitabine by upregulating cytidine deaminase."?Oncoimmunology?2.12 (2013): e27231.Species: HumanSample type: Cell Lysate
- Zhang H., Pelech S. Using protein microarrays to study phosphorylation-mediated signal transduction. Semin Cell Dev Biol. 2012 Oct;23(8):872-82. doi: 10.1016/j.semcdb.2012.05.009Species: HumanSample type: N/A
- Qi W, Cooke LS, Stejskal A, Riley C, Croce KD, et al. MP470, a novel receptor tyrosine kinase inhibitor, in combination with Erlotinib inhibits the HER family/PI3K/Akt pathway and tumor growth in prostate cancer. BMC Cancer. 2009;9:142. doi:10.1186/1471-2407-9-142Species: HumanSample type: Cell Lysate
- Wenqing Q, Cooke LS, Stejskal A, Riley C, Croce KD, Saldanha JW, Bearss D, Mahadevan D. MP470, a novel receptor tyrosine, in combination with Erlotinib inhibits the HER family/PI3K/Akt pathway and tumor growth in prostate cancer. BMC Cancer 2009;9:142. Species: HumanSample type: Cell Lysate
04/09/2018, 01:28 PM
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
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蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台,
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2017-11-12
提供商:江苏启动子生物 查看更多
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2021-08-13
基因载体作为基因导入细胞/动物的工具,应用范围几乎涉及所有的生物医药领域。在分离纯化限制性内切酶、合成PCR引物已成产品化的今天,很多实验室仍亲自构建载体,却往往耗费大量的时间、精力与财力。 为了加速推进载体产品化,帮助科研工作者节省时间与精力,赛业生物结合IT与生物信息学的传统强项,于2011年开始筹备载体设计线上化计划,并在2014年成功搭建了第一个互联网+基因载体的智慧生产平台VectorBuilder,把... 查看更多
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2021-09-08
上海延慕生物科技专业出售pBABE-GFP载体,病毒系列质粒,大肠系列质粒,哺乳系列质粒,植物系列质粒,酵母系列质粒,RNA文库质粒,基因文库质粒,人源基因质粒,基因文库质粒,大肠系列质粒包含:pUC18载体,pUC19载体,pGEX-6P-3载体,pET-11c载体,pET-28a载体,pET-39b载体,pET-44c载体,pT7-6×His-MCS载体,pMal-c4X载体,PQE-70载体,pRSETB-EGFP载体... 查看更多
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2018-03-08
pE-SUMO载体病毒克隆载体是由深圳市伟通生物公司代理或销售的伟通生物品牌的试剂,产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的pE-SUMO载体病毒克隆载体试剂销售服务商之一,在深圳等地方销售pE-SUMO载体病毒克隆载体试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pE-SUMO载体病毒克隆载体仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的pE-SUMO载体病毒克隆载体产品 查看更多
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2018-07-03
pPARS载体酵母游离型质粒是由BiovectorCo.,LTD代理或销售的Biovector,Addgene,ATCC,Invi品牌的试剂,产品来源于BiovectorInc.USA。BiovectorCo.,LTD是中国最权威的pPARS载体酵母游离型质粒试剂销售服务商之一,在海淀区等地方销售pPARS载体酵母游离型质粒试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pPARS载体酵母游离型质粒仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的pPARS载体酵母游离型质粒产品 查看更多
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2017-11-20
本文献方法研究中使用了Comso Bio公司的GenomONE获得实验数据并进行发布 GenomONETM -Neo EXGenomONETM -CAb EX 相关产品请点击:GenomONETM -Neo EXGenomONETM -CAb EX 背景诱导性多能性的间充质干细胞(iPMSCs)是药物筛选、再生医学和细胞治疗的新型候选药物。然而,用于生成骨髓间充质干细胞的诱导性多能性间充质干细胞(iPSC),在导入编码基因的转录因子中... 查看更多
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2018-07-15
产品名称: 人腺相关病毒载体(AAV)ELISA Kit(elisa试剂盒) 国内优质ELISA厂家 产品简介: 人腺相关病毒载体(AAV)ELISA Kit(elisa试剂盒) 国内优质ELISA厂家 ELISA试剂盒 国产现货 SIXIN生产的优质ELISA试剂盒直供全国。http://www.aatbio.com.cn/elisa/ 人腺相关病毒载体(AAV)ELISA Kit(elisa试剂盒) 国内优质ELISA厂家 进口试剂 查看更多
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2018-04-08
北京海创科业生物科技有限责任公司在发布的亚克隆载体构建供应信息,浏览与亚克隆载体构建相关的产品或在搜索更多与亚克隆载体构建相关的内容。 查看更多
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2018-03-20
上海康朗生物科技有限公司在发布的pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体供应信息,浏览与pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体相关的产品或在搜索更多与pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体相关的内容。 查看更多
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2017-11-25
2018-03-20
上海嵘崴达实业有限公司在发布的钾离子载体 I供应信息,浏览与钾离子载体 I相关的产品或在搜索更多与钾离子载体 I相关的内容。 查看更多
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人HIF1αRN干扰质粒构建及其转染人急性髓性白血病骨髓基质细胞...123
西月是神4222017-11-10
稳定转染hif-1α rna干扰表达载体_有道翻译
翻译结果:
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
稳定转染hif-1α rna干扰表达载体_有道翻译
翻译结果:
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
翻译结果:
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
稳定转染hif-1α rna干扰表达载体_有道翻译
翻译结果:
Alpha stable transfection hif - 1 RNA interference expression vector
【求助】表达载体为什么要构建正义和反义? 形态学与生理生化...123
▇爱新觉罗▇厐2017-11-07
表达载体构建正义和反义,一般用于基因功能的研究,正义为强势表达
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
(forced expression)或过表达(overexpression),以观察基因表型,反义则是用来抑制基因表达,以观察在目的基因的表达受到抑制的情况下表型的变化
表达载体的构建方法及步骤 123
镜音双子9536922017-10-01
有两种常用的方法。第一种是直接将PCR扩增的基因片段酶切,然后连接到酶切过的表达载体上。第二种是先把PCR产物连到过度载体上,再从过度载体抢切下目的基因,最后再连接到酶切过的表达载体上。
基因表达载体是怎样进入微生物细胞内的123
夏露露HW632021-07-27
1、目的基因:是人们需要的特定基因,主要指编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子.
2、基因表达载体的构建
(1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用.(2)基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
②启动子在基因的首段,它是RNA聚合酶的结合位点,能控制着转录的开始,故②正确;
③终止子在基因的尾端,它控制着转录的结束,故③正确;
④由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分,以及目的基因导入受体细胞的方法不同,因此基因表达载体的构建是不完全相同的,
2、基因表达载体的构建
(1)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用.(2)基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
②启动子在基因的首段,它是RNA聚合酶的结合位点,能控制着转录的开始,故②正确;
③终止子在基因的尾端,它控制着转录的结束,故③正确;
④由于受体细胞有植物、动物以及微生物之分,以及目的基因导入受体细胞的方法不同,因此基因表达载体的构建是不完全相同的,
如何预测和鉴定miRNA的靶基因 123
Bsvn丶鼬ゅ2017-11-07
免疫沉淀
当然,确定miRNA与mRNA之间的互作,我们还有更直接的方法,那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物(RISC)中的Argonaut(AGO)蛋白的抗体进行免疫共沉淀(co-IP)。生物通 www.ebiotrade.com
目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物,然后开展深度测序以鉴定发现的RNA,这种方法被称为紫外交联免疫沉淀结合高通量测序(HITS-CLIP),或CLIP-seq。利用这种方法来寻找miRNA的靶基因,能够明显降低miRNA结合位点的假阳性预测率,并且缩小miRNA结合位点的空间范围,可在全基因组范围内鉴定AGO蛋白与不同RNA上的结合。现在有多家公司提供CLIP-seq服务,如锐博生物。
Clontech公司(Takara旗下)也推出了一种新工具,能协助鉴定细胞中的miRNA靶点。这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体,允许miRNA与其目标结合,但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中,并“锁定”miRNA-目标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK(FLAG表位)标签有助于整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其目标的免疫沉淀,从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。生物通
整个过程大致如下:
1. 创建miRNA模拟物。生物通 www.ebiotrade.com
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞,并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。生物通 www.ebiotrade.com
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物(其中包括靶标mRNA)进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA,鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。
Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后,细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞,它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样,研究人员只需投入很少,就能实现大范围的筛选。
靶基因的验证
预测终归是预测,miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似,也就是抑制或过表达miRNA,然后检查mRNA或蛋白水平的反应。生物通 www.ebiotrade.com
目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先,构建荧光素酶表达载体,将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中,然后将构建好的重组载体转染到细胞中,并改变miRNA的表达水平,最后检测荧光素酶的表达情况,以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。
目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pmirGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因,其中萤火虫荧光素酶(luc2)作为主要报告基因,其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合;海肾荧光素酶/新霉素基因(hRluc-neo)作为对照报告基因,既能实现归一化处理,又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。
就目前而言,预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少,但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展,这种现状有望改变。让我们拭目以待吧。(生物通 余亮)
当然,确定miRNA与mRNA之间的互作,我们还有更直接的方法,那就是从实验上寻找物理相互作用。我们可以利用RNA诱导沉默复合物(RISC)中的Argonaut(AGO)蛋白的抗体进行免疫共沉淀(co-IP)。生物通 www.ebiotrade.com
目前更先进的方法是通过紫外线照射以交联复合物,然后开展深度测序以鉴定发现的RNA,这种方法被称为紫外交联免疫沉淀结合高通量测序(HITS-CLIP),或CLIP-seq。利用这种方法来寻找miRNA的靶基因,能够明显降低miRNA结合位点的假阳性预测率,并且缩小miRNA结合位点的空间范围,可在全基因组范围内鉴定AGO蛋白与不同RNA上的结合。现在有多家公司提供CLIP-seq服务,如锐博生物。
Clontech公司(Takara旗下)也推出了一种新工具,能协助鉴定细胞中的miRNA靶点。这一工具名为MirTrap系统。它利用RISC蛋白的显性失活突变体,允许miRNA与其目标结合,但限制进一步的加工。此亚基整合到内源的Argonaute/RISC复合物中,并“锁定”miRNA-目标mRNA。显性失活亚基上的DYKDDDDK(FLAG表位)标签有助于整个Ago/RISC复合物的捕获和分离。这样就能实现miRNA及其目标的免疫沉淀,从而通过新一代测序或定量PCR来鉴定或定量。生物通
整个过程大致如下:
1. 创建miRNA模拟物。生物通 www.ebiotrade.com
2. 将这些miRNA模拟物和pMirTrap载体共转染到哺乳动物细胞,并孵育24小时。同时利用miR-132、pMirTrap载体和pMirTrap对照载体开展对照转染。
3. 利用附带的MirTrap分离试剂盒裂解转染后的细胞培养物。生物通 www.ebiotrade.com
4. 利用分离试剂盒中的磁珠对RISC复合物(其中包括靶标mRNA)进行免疫沉淀。
5. 利用附带的NucleoSpin RNA XS试剂盒分离与磁珠结合的靶标mRNA。
6. 通过qPCR或新一代测序分析分离出的RNA,鉴定出特定miRNA的靶标mRNA。
Sigma-Aldrich的MISSION Target ID cDNA文库让研究人员能够在实验室内开展全转录组范围的miRNA和ncRNA靶基因鉴定。它是个全转录组范围的cDNA文库。在文库转染和选择之后,细胞被已知miRNA转染。对于那些包含与miRNA相互作用的cDNA的细胞,它们将生存到第二轮。那些选择出的cDNA可通过测序来鉴定。这样,研究人员只需投入很少,就能实现大范围的筛选。
靶基因的验证
预测终归是预测,miRNA的靶基因还必须经过验证。这个过程与一开始寻找靶基因的过程相似,也就是抑制或过表达miRNA,然后检查mRNA或蛋白水平的反应。生物通 www.ebiotrade.com
目前最常用的方法是荧光素酶报告基因法。首先,构建荧光素酶表达载体,将希望鉴定的miRNA靶基因的3’UTR插入荧光素酶基因的3’UTR中,然后将构建好的重组载体转染到细胞中,并改变miRNA的表达水平,最后检测荧光素酶的表达情况,以分析3’UTR中是否含有miRNA的靶位点。
目前有多家公司提供荧光素酶报告载体或构建服务。Promega就提供pmirGLO双荧光素酶表达载体。它采用萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶这两种报告基因,其中萤火虫荧光素酶(luc2)作为主要报告基因,其表达减少意味着内源性的或外源引入的miRNA 与克隆的miRNA 的靶序列发生了结合;海肾荧光素酶/新霉素基因(hRluc-neo)作为对照报告基因,既能实现归一化处理,又能筛选稳定转染的细胞系。这样就以一个载体实现了以往两个载体的功能。
就目前而言,预测和鉴定miRNA靶基因的方法虽然不少,但仍然没有一种常规方法。随着计算机算法的不断改进和生物学技术的快速发展,这种现状有望改变。让我们拭目以待吧。(生物通 余亮)
人pparγ慢病毒过表达载体构建123
安好3202016-04-12
我现在手上有PMD2.G与PSPAX2两个载体,求推荐与其配套的慢病毒过表达载体,谢谢。
基因捕获技术的现状及应用123
落帅2102017-11-06
基因捕获载体在基因组中也有“hot”和“cold”插入位点。但是计算机模拟显示,按照单个克隆被捕获的百分比,如果以多种类型的载体进行足够多次的突变实验所获得的突变克隆就可以覆盖整个ES细胞基因组中全部基因位点 。因此,新型捕获策略和载体不断被设计应用。
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。因此,在第一、二代基因捕获载体中应用报告基因和含自身启动子( PGK) 的筛选标记基因neo ,抗药性的产生不需要捕获基因的表达。不同的是,第二代基因捕获载体中筛选标记基因3′末端没有polyA 加尾信号而含有一剪接供体序列 ,必须由内源基因提供polyA 加尾信号以产生稳定的筛选标记基因mRNA 而获得筛选克隆,因此与第一代载体相比,降低了基因间插入的背景。polyA 捕获载体还解决了第一代基因捕获载体突变基因信息鉴定的难题。3′- RACE 可用以鉴定polyA 捕获基因3′端编码序列或3′非翻译区(UTRs) 序列信息,对于基因鉴定比5′- UTRs 序列有用得多。用以克隆捕获特异类型蛋白编码基因的多种新型载体也已问世,如Skarnes 等利用分泌蛋白的原理及β-gal 活性在内质网被灭活的特点设计了一种载体专门用以捕获在ES 细胞中表达的编码穿膜分泌蛋白的基因 。一些研究小组还在载体中引入了重组位点,以实现由重组酶介导的捕获位点插入后修饰 。这种“敲进 ”的策略允许对捕获位点作进一步修饰,如“指派”捕获基因的启动子成分驱动敲入的转基因表达来进行“回复突变( rescue) ”或细胞标记实验;通过敲入含不同突变的捕获基因cDNA 还可产生等位基因系列;含lox 位点的载体还可实现在捕获基因组条件性取代载体产生更精细的突变,包括点突变和/ 或选择性表型标记,可以更好地控制突变的性质。向左转|向右转
早期基因捕获载体的特点是当报告基因与内源基因的读码框一致时,产生由内源蛋白的N 末端与报告基因蛋白融合的活性蛋白质 。近来对这一类载体所做的改进是在报告基因与SA 序列间插入一来源于脑、心肌炎病毒的IRES ,这样即使报告基因与捕获基因不发生融合也可产生报告基因翻译产物。尽管ES 细胞中大量基因具转录活性,为了获得全基因组突变克隆必须使用不依赖于捕获基因表达的筛选策略。因此,在第一、二代基因捕获载体中应用报告基因和含自身启动子( PGK) 的筛选标记基因neo ,抗药性的产生不需要捕获基因的表达。不同的是,第二代基因捕获载体中筛选标记基因3′末端没有polyA 加尾信号而含有一剪接供体序列 ,必须由内源基因提供polyA 加尾信号以产生稳定的筛选标记基因mRNA 而获得筛选克隆,因此与第一代载体相比,降低了基因间插入的背景。polyA 捕获载体还解决了第一代基因捕获载体突变基因信息鉴定的难题。3′- RACE 可用以鉴定polyA 捕获基因3′端编码序列或3′非翻译区(UTRs) 序列信息,对于基因鉴定比5′- UTRs 序列有用得多。用以克隆捕获特异类型蛋白编码基因的多种新型载体也已问世,如Skarnes 等利用分泌蛋白的原理及β-gal 活性在内质网被灭活的特点设计了一种载体专门用以捕获在ES 细胞中表达的编码穿膜分泌蛋白的基因 。一些研究小组还在载体中引入了重组位点,以实现由重组酶介导的捕获位点插入后修饰 。这种“敲进 ”的策略允许对捕获位点作进一步修饰,如“指派”捕获基因的启动子成分驱动敲入的转基因表达来进行“回复突变( rescue) ”或细胞标记实验;通过敲入含不同突变的捕获基因cDNA 还可产生等位基因系列;含lox 位点的载体还可实现在捕获基因组条件性取代载体产生更精细的突变,包括点突变和/ 或选择性表型标记,可以更好地控制突变的性质。向左转|向右转
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小飞哥wU赐62017-10-01
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小男人沼L652021-08-16
因为目的基因要靠运载体进入受体细胞,然后目的基因才能在受体细胞中表达。所以基因表达载体的构建是基因工程的核心
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