表达载体
2021-09-08
问题描述:
各位大神,我现在用PET28α作为表达载体,在连接的时候是不是载体要进行双酶切、胶回收?我双酶切的目的片段和PET28α连接后,导入感受态中没有成功,不知道怎么回事,请教各位。
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mpark
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How big is the insert? How many base pairs are there between the two restriction enzyme sites on the pET28a?
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Doctor-pxz
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825bp,pET28a两个酶切位点之间大概是30个bp
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Doctor-pxz
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mparkHowbigistheinsert?HowmanybasepairsaretherebetweenthetworestrictionenzymesitesonthepET28a?插曲片段是825bp,pET28a两个酶切位点之间大概是30个bp。谢谢
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mpark
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IftheinsaertDNAisgeneratedfromPCR,trytomakebluntendingthengelpurificationoftheblunt-ended825bpPCRproduct.makebluntendligationofthe825bpfragmentonsomesubclonevector,suchpUC19first.Screeningsubclonesandsequencingthepositiveone.CutofftheinsertDNAandthencloneitintopET28a.
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Doctor-pxz
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展开引用mparkIftheinsaertDNAisgeneratedfromPCR,trytomakebluntendingthengelpurificationoftheblunt-ended825bpPCRproduct.makebluntendligationofthe825bpfragmentonsomesubclonevector,suchpUC19first.Screeningsubclonesandsequencingthepositiveone.CutofftheinsertDNAandthencloneitintopET28a.......好的,谢谢你
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