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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit/50-preps/D2411-01
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Omega Bio-Tek/E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit/50-preps/D2411-01
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Omega Bio-Tek
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D2411-01
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Overview

The E.Z.N.A.® Plant DNA DS Mini Kit is designed for efficient recovery of genomic DNA up to 30 kb in size from fresh, frozen, or dried plant tissue samples rich in polysaccharides, polyphenols or having a lower DNA content. Up to 50 mg wet tissue can be processed in less than 1 hour. The system combines the reversible nucleic acid-binding properties of the HiBind® matrix with the speed and versatility of spin column technology to eliminate polysaccharides, phenolic compounds, and enzyme inhibitors from plant tissue lysates. Purified DNA is suitable for PCR, restriction digestion, and hybridization applications.

This procedure relies on the well-established properties of the cationic detergent, cetyltrimethyl ammonium bromide (CTAB), in conjunction with the unique binding system to increase yields and provide high-quality DNA. The system eliminates the need for chloroform extractions traditionally associated with CTAB based lysis methods. Samples are homogenized and lysed in a high salt buffer containing CTAB and binding conditions are adjusted and DNA is purified using a HiBind® DNA Mini Columns. Salts, proteins, and other contaminants are removed to yield high-quality genomic DNA suitable for downstream applications such as endonuclease digestion, thermal cycle amplification, and hybridization applications.

  • Rapid – Homogenizer Columns allow for faster processing
  • Versatile – Reliable results from a variety of sample types
  • Safe – No organic extractions
  • High-quality – Purified DNA suitable for most applications

Specifications

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

FeaturesSpecifications
Starting AmountUp to 50 mg wet tissue
Starting MaterialFresh, frozen, or dried plant tissue samples rich in polysaccharides, polyphenols, or those having a lower DNA content
Elution Volume50-100 μL
TechnologyHiBind® DNA Mini Column
Processing ModeManual
Throughput1-24
NoteCTAB lysis

Kit Components

ItemAvailable Separately
HiBind® DNA Mini ColumnsView Product
Homogenizer Mini ColumnsView Product
2 mL Collection TubesView Product
CSPL BufferView Product
Proteinase K SolutionView Product
RBB BufferView Product
XP2 BufferView Product
HBC BufferView Product
DNA Wash BufferView Product
Elution BufferView Product

Protocol and Resources

Product Documentation & Literature

PROTOCOL

D2411 E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit

SDS

D2411 SDS

SALES SHEET

APPLICATION NOTE

Rapid, High Performance and Cost-Effective Plant DNA Extractions

Product Data

DNA yields from various plant types are significantly hgiher using E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit than using a competing product.

Figure 1. Comparison of DNA yield from multiple crops. 40-50 mg of respective fresh leaf tissue was extracted in triplicate according to manufacturer’s recommended protocols and eluted in 100 µL. DNA analyzed with fluorescent DNA-based quantification method. Total yield was divided by total tissue amount to show ng of DNA per mg of leaf tissue.

DNA purified using E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit has less PCR inhibitors than using a competing product.

Figure 2. qPCR comparison from corn samples. Real-time PCR with corn-specific primers was performed on triplicates of undiluted, 10-fold and 100-fold dilutions of DNA. DNA was isolated using Omega Bio-tek’s E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit and a comparable column-based kit from Company Q. Omega Bio-tek’s kit not only has significantly higher yields but also less qPCR inhibition when compared to that of Company Q’s.

DNA Yield and Quality from Potato Leaf and Corn Leaf Powder

Figure 3. Genomic DNA was purified from either 50 mg potato leaf or 30 mg corn leaf powder with the E.Z.N.A. Plant DNA DS Kit. DNA concentration determined by optical density measurements with NanoDrop® 2000c. Total elution volume was 100 µL.

High Molecular Weight Genomic DNA

Figure 4. Genomic DNA was purified from 50 mg potato leaf with the E.Z.N.A. Plant DNA DS Kit.  5 µL eluate DNA was analyzed on a 1% Agarose gel.

DNA extracted using E.Z.N.A.® Plant DNA DS Kit is inhibitor free

Figure 5. Genomic DNA was extracted from 50 mg potato leaf and 30 mg corn lead powder using the E.Z.N.A. Plant DNA DS Kit . 2 µL of Eluted DNA was diluted 10- and 100-fold and used as a template in a 20 µL SYBR® qPCR reaction. C: inhibitor-free control; T: gDNA samples. The Ct values increased by only 3 cycles per 10-fold dilution, which demonstrates that the template DNA in free of inhibitors

Publications

View Publications
  • Duccio Migliorini, Luisa Ghelardini, Elena Tondini, Nicola Luchi, Alberto Santini The potential of symptomless potted plants for carrying invasive soilborne plant pathogens
  • Paulo Gouveia, Margarida Teixeira Santos, José Eduardo Eiras-Dias, Gustavo Nolasco Five phylogenetic groups identified in the coat protein gene of grapevine leafroll-associated virus 3 obtained from Portuguese grapevine varities
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现在看来是一个很古老的话题似的,其实前年8月我写这篇文章的时候相关的文献都找不到几篇的。忽如一夜春风来,铺天盖地的RNAi文章出现。现在看来有点简单,但仍不失为我当年呕血之作。只是肿瘤发表周期太慢而已。
(题外话)
谨以此文献给可爱的小海豚,祝暑假在家,在海边玩儿得开心!
      RNA干扰和肿瘤基因治疗
摘要:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指双链RNA诱导细胞内特定基因转录后沉默现象,它在肿瘤基因治疗中具有十分重要的作用。本文介绍了RNAi现象的发现、形成机理及其在肿瘤基因治疗中的应用现状及前景。
关键词:RNA干扰 肿瘤 基因治疗
Abstract:RNAinterferenceisaphenomenonthatds-RNAs(double-strandedRNA)inducespecificgeneposttranscriptionalsilencingincells.ItsuggeststhatRNAinterferencemayplayanimportantroleintumorgenetherapy.ThisarticleistointroducehowRNAinterferencewasfound, formedaswellasitspotentialapplicationinthetumorgenetherapyfield.
Keywords:RNAinterference  tumorgenetherapy
1RNAi现象的发现
1990年,来自美国的Napoli[1]和荷兰的Krol[2]分别报将外源性紫色色素合成基因查尔酮合酶(ChalconeSynthase,CHS)基因转入矮牵牛,试图产生出更深的紫色牵牛花,结果却发现花色素甙的合成发生了阻塞,大部分转基因植物开出了颜色斑驳或白色的花。检查白色花发现CHS基因mRNA的同步表达没有改变,而mRNA的转录比野生型减少50倍。导入基因和内源性基因均发生失活,这种现象被称为共抑制(co-suppression)。随后多个植物学家亦在不同转基因植物中发现类似现象。与此同时,意大利Macino[3]领导的实验室将外源性类胡萝卜素基因albino-3导入红色面包霉菌(Neurosporacrassa),发现约30%转化细胞的内源性的albino-3也受到了抑制,这种现象被他们称为静息作用(quelling)。
不仅植物和真菌如此,科学家们还在线虫发现类似的现象。1995年美国的Guo等[4]用反义RNA技术阻断线虫(CaenorhaBDitiselegans)par-1基因的表达以破坏线虫胚胎发育的对称性。结果发现不仅反义RNA能阻断par-1的表达,正义链RNA亦能抑制par-1的表达。他们将其称为RNA干扰。这种现象直到3年以后才得到解释。1998年Fire和Mello[5]公布了他们的实验结果,他们将少量双链RNA(dsRNA)注入线虫,发现内源性基因的mRNA发生特异性裂解。这种只需几分子外源dsRNA就能完全阻断特异内源基因表达的RNA干扰技术又被他们称为转录后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)。紧接着这种现象在果蝇、拟南芥菜、水螅、涡虫、斑马鱼等较多真核生物中得到证实。
RNA干扰技术研究得最为广泛最为深入的是哺乳类动物。德国科学家Elbashir等[6]用核糖核酸酶III从长链dsRNA切取到21或22个核苷酸(nt)的小干扰RNA双倍体(smallinterferingRNAduplexes,siRNA),将其转入不同的哺乳动物细胞系,能观察到内源性和外源性基因的特异性表达抑制。随后他们又用21-ntsiRNA成功特异性抑制哺乳动物细胞系的16个基因表达,并将这种技术和沉默基因敲除(knockoutofmurinegenes)技术进行比较,证实siRNA干扰技术能更准确、快捷地确定特定基因在生物发育和生长中的功能[7]。他们认为,21-ntsiRNA二倍体技术可能会在哺乳动物细胞基因功能的研究中发挥更大的作用,并有可能被用来进行特异性的基因治疗。荷兰科学家Brummelkamp等[8]则采用一种pSUPER质粒作为载体,这种载体带有一个H1-RNA启动子,克隆入载体的序列转录出来的RNA形成发卡状结构(smallhairpinRNAs,shRNAs),在体内加工后形成类似siRNA分子,能引发基因沉默。这种载体对能够在瞬时转染和稳定转染的哺乳动物细胞中持续表达siRNA,引发更为持久的基因沉默。

国家自然科学基金资助项目,批准号30170961
*Tel:(020)61643265,Fax:(020)61643265,E-mail:zjxrx@163.net
2RNAi的形成机理
  RNAi如何引发基因沉默?其形成机理目前尚不完全清楚。最初Hamilton等[9]发现在发生共抑制植物中发现一些约25个碱基的RNA,这些RNA与沉默基因的正义链和反义链互补,这为揭示RNAi机理提供了重要线索。接着Zamore等[10]发现外源性的dsRNA在果蝇细胞内被切割为约21-23碱基对的双链片段。随后一些与RNAi相关的酶被发现,其中最重要的是dsRNA特异性核酸内切酶(dsRNA-specificendonuclease,DICER),推测该酶具有RNaseⅢ类核酶的性质。目前一般认为可能是dsRNA进入胞体内后可激活RNA核酸酶如DICER,在其作用下形成21-23碱基对的siRNA,siRNA解链或其它原因形成RNA诱导基因沉默复合体(RNA-inducedsilencingcomplex,RISC),这些RISC可专一性地与靶向的mRNA特异性结合,在RNA依赖性RNA多聚酶(RNA-dependentRNApolymerase,RdRP)作用下可形成新的dsRNA,新的dsRNA又被DICER识别而被切断形成siRNA,如此逐级放大式的作用形成大量新的siRNA,使RNAi作用在短时间内有效地抑制mRNA的表达[11]。而不少科学家设计的克隆入特定序列的载体转入靶细胞后能持续表达shRNAs,经修饰后形成siRNA,或者直接将siRNA注入靶细胞,作用原理基本一致。
3 RNAi在肿瘤基因治疗中的应用
目前认为RNAi是一种古老的自我防御的进化机制。它的主要作用是防御病毒感染和维持基因组中转座子的稳定。随着对RNAi机理的进一步研究,发现它是一种非常有用的研究工具。现已逐步用于研究基因的功能和了解生物的发育,它比在基因编码区加入选择性标记的基因敲除技术更优越。由于RNAi的技术操作的可行性和致基因沉默特性,已经有学者考虑将其引入肿瘤的基因治疗。
肿瘤基因治疗按其原理可常规性地分为细胞因子基因治疗、抑癌基因治疗、反义核酸治疗、自杀基因治疗、抗肿瘤血管生成治疗,而RNAi技术的提出只有短短5年时间,实验性应用于治疗肿瘤只有不到2年时间,但已取得不少令人振奋的结果。RNAi理论上有望成为一种新的肿瘤基因治疗方案。
德国学者Wilda等[12]在应用RNAi治疗白血病方面做出了有益的试尝。他们针对M-BCR/ABL基因设计出21-ntdsRNA,并将其转入白血病细胞系K562,通过实时PCR定量和westernblot检测,发现细胞中不能检测到M-BCR/ABLmRNA和M-BCR/ABL癌蛋白,还能观察到强烈的细胞凋亡现象。实验结果提示利用dsRNA转导能抑制内源性M-BCR/ABL基因mRNA表达,降低细胞恶性型,甚至导致细胞凋亡。随后日本学者Cioca等[13]报道他们设计针对c-raf和bcl-2基因的dsRNA转入髓样白血病细胞系HL-60、U937、THP-1和K562,发现转染后细胞系c-raf和bcl-2基因表达raf-1和bcl-2蛋白明显降低;针对c-raf基因的RNAi作用阻止TPA诱导单细胞分化出现;联合针对c-raf和bcl-2的RNAi能诱导HL-60、U937和THP-1细胞系的凋亡,并增强了其对依托泊甙和柔红霉素的敏感性。作者认为联合针对c-raf和bcl-2的RNAi能克服白血病瘤细胞对化疗药物的抵抗作用,可能为肿瘤治疗提供一条新途径。
种种迹象表明,用RNAi技术特异性抑制瘤细胞癌基因的表达能在肿瘤基因治疗中扮演重要作用,但怎样将dsRNA导入靶细胞则成为一个难题。显然采用短链dsRNA比长链dsRNA具有很大技术上的可行性,用细胞注射方式转入外源基因在临床基因治疗中是不合适的。Brummelkamp等[14]在构建pSUPER质粒载体的基础上,构建了带有H1-RNA启动子的逆转录病毒载体,设计针对K-RAS(V12)基因的小基因片段,克隆入载体后转至多种人癌细胞系,能持续表达siRNA,观察发现K-RAS(V12)基因被特异性抑制表达,肿瘤细胞恶性型明显降低。作者认为利用病毒载体导入siRNA用于肿瘤特异性基因治疗可抑制癌细胞的致瘤表型。
随着RNAi技术在肿瘤基因治疗中的试尝不断增多,有必要将其与其它基因治疗方法进行比较。日本学者Aoki等[15]将RNAi技术和反义核酸技术应用于人癌细胞系进行了比较。他们选取人肝癌细胞系和胰癌细胞系作为靶细胞,分别选取外源性的虫荧光素酶基因和内源性的c-raf基因作为靶基因,采用阳离子脂质体和一种他们研制的瘤细胞靶向性肽链作为载体,分别采用RNAi技术和反义核酸技术对靶基因进行干扰。结果提示RNAi技术比反义核酸技术能更有效地抑制人癌细胞系中靶基因的表达,作者认为RNAi技术可能成为一种更新、更有效的基因治疗途径。
RNAi技术可以采用长链dsRNA,也可以采用短链siRNA,还可以用带启动子的载体转入可以表达核内不均一RNA(heteronuclearRNA,hnRNA)的基因片段。hnRNA技术是指siRNA并非由外源dsRNA直接导入,而是利用带启动子的载体将能表达siRNA的基因导入细胞,在细胞内自行合成siRNA,从而发挥干扰作用。目前认为最持久、稳定沉默靶基因的办法就是hnRNA技术。然而怎样根据靶基因序列寻找最佳干扰位点并设计能转录出hnRNA的基因片段是一个新挑战。有报道只有不到50%的短序列能针对特异基因形成RISC,而只有不到10%能产生特异效果,一位澳大利亚学者Benitec的专利技术能找到针对人类特定基因的最佳干扰位点并设计出带启动子终止子的一段呈反向互补回文结构的DNA序列,利用载体转入靶细胞后即可转录出发卡状mRNA,发挥其干扰作用,其网址为http://www.benitec.com.au/gene-silencing.htm。美国著名RNA产品公司Ambion提供网上在线设计工具,可以用来更快、更有效地寻找最佳干扰位点,网址为http://www.ambion.com/techlib/misc/。目前一般认为,选取的21nt-RNAs应取自靶基因,其5’端应以AA开头,应用Blast到EST基因库搜索,确认靶向性基因是唯一的,siRNA序列GC含量最好在40-55%。
总之,随着人们对RNAi技术认识的更加深刻,RNAi技术将更广泛地用于肿瘤的治疗。将RNAi技术和其它基因治疗方法结合而设计针对肿瘤的治疗方案,将产生不可估量的潜力,必将探索出一条攻克恶性肿瘤的新路。
 
参考文献
1NapoliC,LemieuxC,JorgensenR.IntroductionofaChimericChalconeSynthaseGeneintoPetuniaResultsinReversIBLeCo-SuppressionofHomologousGenesintrans.PlantCell.1990;2(4):279-289
2vanderKrolA,MurL,BeldM,etal.Flavonoidgenesinpetunia:additionofalimitednumberofgenecopiesmayleadtoasuppressionofgeneexpression.PlantCell.1990;2(4):291-299
3RomanoN,MacinoG.Quelling:transientinactivationofgeneexpressioninNeurosporacrassabytransformationwithhomologoussequences.MolMicrobiol.1992;6(22):3343-3353
4GuoS,KemphuesK.par-1,agenerequiredforestablishingpolarityinC.elegansembryos,encodesaputativeSer/Thrkinasethatisasymmetricallydistributed.Cell.1995;81(4):611-620
5FireA,XuS,MontgomeryM,etal.Potentandspecificgeneticinterferencebydouble-strandedRNAinCaenorhabditiselegans.Nature.1998;391(6669):806-811
6ElbashirS,HarborthJ,LendeckelW,etal.Duplexesof21-nucleotideRNAsmediateRNAinterferenceinculturedmammaliancells.Nature.2001;411(6836):494-498
7HarborthJ,ElbashirS,BechertK,etal.IdentificationofessentialgenesinculturedmammaliancellsusingsmallinterferingRNAs.JCellSci.2001;114(Pt24):4557-4565
8BrummelkampT,BernardsR,AgamiR.AsystemforstableexpressionofshortinterferingRNAsinmammaliancells.Science.2002;296(5567):550-553
9HamiltonA,BaulcombeD.AspeciesofsmallantisenseRNAinposttranscriptionalgenesilencinginplants.Science.1999;286(5441):950-952
10ZamoreP,TuschlT,SharpP,etal.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell.2000;101(1):25-33
11SijenT,FleenorJ,SimmerF,etal.OntheroleofRNAamplificationindsRNA-triggeredgenesilencing.Cell.2001;107(4):465-476
12WildaM,FuchsU,WossmannW,etal.KillingofleukemiccellswithaBCR/ABLfusiongenebyRNAinterference(RNAi).Oncogene.2002;21(37):5716-5724
13CiocaD,AokiY,KiyosawaK.RNAinterferenceisafunctionalpathwaywiththerapeuticpotentialinhumanmyeloidleukemiacelllines.CancerGeneTher.2003;10(2):125-133
14BrummelkampT,BernardsR,AgamiR.StablesuppressionoftumOrigenicitybyvirus-mediatedRNAinterference.CancerCell.2002;2(3):243-247
15AokiY,CiocaD,OidairaH,etal.RNAinterferencemaybemorepotentthanantisenseRNAinhumancancercelllines.ClinExpPharmacolPhysiol.2003;30(1):96-102
现际各权威性命科杂志制定明确要求些要基本两命名系统相致综合起规定:

肠杆菌其细菌: 基座命名统用斜体用三英文缩写字母表示表型第字母写用体基型三字母都写用斜体肩符号用表示野型、突变型、抗性或敏性Gal+表示表型半乳糖野型或原养型Gal-或Gal表示表型半乳糖突变型或缺陷型;gal+表示基型半乳糖野型gal-或gal表示基型半乳糖突变型;AmpR表示表型氨基苄青霉素抗性AmpS表示表型氨基苄青霉素敏性ampR表示基型氨基苄青霉素抗性ampS表示基型氨基苄青霉素敏性基位点基座位名称用写写字母表示同位点lac Z于特定突变型离前顺序编号表示编号要写gal K32

酵母: 三字母表明基功能数字表示同基座啤酒酵母基GAL4 CDC28; 蛋白质:GAL4, CDC28非洲粟酒酵母基 gal4, cdc2; 蛋白质:Gal4, Cdc2

线虫: 用三写字母表示突变表型存基座用连字符接数字表示例基unc-86, ced-9; 蛋白UNC-86; CCED-9

蝇: 突变表型描述由1-4字母表示例基white(w ), tailless ( tll ), hedgehog ( hh ); 蛋白White, Tailless, Hedgehog

植物: 虽没惯用适用于所植物数用1-3写字母表示Arabidopsis基用蝇命名需要用写字母例基AGAMOUS(AG)蛋白 AGAMOUS

脊椎物: 般1-4写字母数字表示其基功能例基sey, myc, 蛋白 Sey, Myc

类: 脊椎物需写例基 MYC、ENO1蛋白MYC、ENO1于基产物命名前没统规定现基本都统用体或全部写或第字母写Gal或GAL
肺癌见肺原发性恶性肿瘤
靶向药物目前先进用于治疗癌症药物靶向药物针肿瘤细胞特基发能够高度特异性识别杀灭肿瘤细胞具效、副作用较特点尤其适合体质较差肺癌患者
靶向治疗肺癌治疗前需要做基突变检查根据基情况决定否适合该种治疗肺癌基突变检查目前主要针
EGFR、KRASALK等靶标明确肿瘤药物敏性检查结助于相应靶向治疗药物选择药效异
基突变检查结阴性患者适合采用靶向治疗说明肺癌由基突变造能外界原所致辐射、防腐剂、免疫力低等等
基突变检查阴性肺癌患者没服用易瑞沙特罗凯必要且易瑞沙特罗凯目前际公认针非细胞性肺癌靶向药物没同类药物替代种情况应酌情考虑化疗
基因组DNA分子发生的突然的、可遗传的变异现象(gene mutation)。从分子水平上看,基因突变是指基因在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变。基因虽然十分稳定,能在细胞分裂时精确地复制自己,但这种稳定性是相对的。在一定的条件下基因也可以从原来的存在形式突然改变成另一种新的存在形式,就是在一个位点上,突然出现了一个新基因,代替了原有基因,这个基因叫做突变基因。于是后代的表现中也就突然地出现祖先从未有的新性状。
基因突变是生物进化的重要因素之一,所以研究基因突变除了本身的理论意义以外还有广泛的生物学意义。基因突变为遗传学研究提供突变型,为育种工作提供素材,所以它还有科学研究和生产上的实际意义。
但是一般基因突变会产生不利的影响,被淘汰或是死亡,但有极少数会使物种增强适应性。有害的多,有利的少。
对人来说,基因突变可能导致癌症。
嘿嘿说喜欢却喜欢像我吃都辣椒基变异辣椒食用油基变异豆喜欢吃点却喜欢吃怕吃身体所要异我认基变异毕竟没现现象
相关疾病:乳腺癌肿瘤盲《美国医学会杂志肿瘤学》(JAMAOncology)发表的一项最新研究结果显示,如果转移乳腺癌阳...
基因突变是好是坏?__123
我的山好2021-08-05
请问基突变事坏事我已经搜索我要答案请要做所用复制工作请知道朋友告诉我谢谢
基因突变不一定是不可遗传变异,而不是一定不能遗传,这点请注意

主要分两种情况
1 如果是在受精卵分裂时发生的突变,就有可能是可遗传的,因为全身的细胞都是由受精卵发育来的
2 如果是已经差不多成形的胎儿 以及之后的整个生命过程中突变则又可分3种情况
A 发生在体细胞的突变这种是不可遗传的
B 发生在生殖细胞的突变如果那个突变了的生殖细胞成功地与对方结合形成受精卵的话那么就把突变遗传下去了;如果那个突变的生殖细胞没有被"用到"那也就没有遗传下去
C如果是体细胞发生的基因突变只能在本体体现,而只有生殖细胞的基因突变才有可能遗传给下一代
总的的来说就是基因突变在配子或性染色体中可遗传给后代,而发生在体细胞中不会遗传给后代
希望对你有所帮助,望采纳O(∩_∩)O谢谢~
基因突变的危害123
home月上柳梢2021-08-06
涉及碱基突变缺失、重复、移码突变等基突变具逆性,向性,害性重复性等基突变自突变工诱发
基突变
根据基突变机体影响程度列几种情况:
1.变异轻微机体产察觉效应进化观点看种突变称性突变
2.造体物化组遗传差异差异般体并影响例血清蛋白类型、ABO血型、HLA类型及各种同工酶型某种情况发严重例同血型间输血同HLA型间同种移植产排斥反应等
3.能给体育能力存带定处例HbS突变基杂合比HbA纯合更能抗恶性疟疾利于体存
4.产遗传易性(genetic susceptibility).由于遗传素影响、或由于某种遗传缺陷、使其代理代谢具容易发某些疾病特性癌症、糖尿病、精神病、高血压、发性硬化症等
5.引起遗传性疾病导致体育能力降低寿命缩短包括基突变致蛋白质异病及遗传酶病据估计类50000结构基基座位处于杂合状态占18%健康至少带5-6处于杂合状态害突变些突变纯合状态产害
6.致死突变造死胎、自流产或夭折等展开

CRISPR导致基因突变”论战持续升温

作者:来源:科技日报


近日,《自然·方法》发表文章《体内CRISPR—Cas9编辑引发的不可预测基因突变》,称基因编辑工具CRISPR可能引起基因组内大量基因突变。全球很多实验室正要将CRISPR—Cas9用于人类疾病的相关基因治疗研究,有的甚至已开始用于临床试验,这时候说它可能造成大规模基因突变,着实让人惊讶。

然而剧情很快反转。几天前,两家基因编辑公司Editas药物和Intellia制药的科学家们分别写信给《自然》杂志编辑部,认为这一论文的结论完全错误,要求将该论文撤稿,并从科技文献中删除。

论文只是“读者来函”,暂无撤稿决定

对于这篇引起巨大争议的稿件,《自然》科研新闻发言人(以下称《自然》)在接受科技日报记者采访时表示,这只是一篇读者来函。读者来函栏目有时会刊登科研共同体感兴趣的涉及科研方法的短篇文章,其中可能包含新的研究数据。这篇文章在发表之前已经经过同行评审,至于撤稿,“眼下尚无法做进一步的评论”。

有业内学者告诉科技日报记者,读者来函的宗旨就是能及时分享一些有用的信息,一般选题都会比较新颖、时效,但与其他类型的文章相比,研究的系统性确实不够,但因为经过了同行评审,还是有一定的学术价值。

《自然》表示,这篇文章刊出后他们已经收到了一些来信,他们打算在经过适当技术评审之后将相关来信发表出来。因为基因编辑是一个快速兴起的科研领域,所以关注度高。《自然》希望通过展示实验和数据,让这一领域的研究不断深入。

实验设计与数据存在问题?

“这篇论文确实存在一些问题”,中科院一位不愿透露姓名的研究员在接受科技日报记者采访时表示。

在他看来,基因编辑领域,脱靶确实是一个问题,但这篇文章的实验设计、获得的数据以及结论都不够科学,不是单纯的脱靶这么简单。整个实验只涉及了三只小鼠,两个处理的小鼠和一个未处理的对照小鼠,整个实验只基于一个sgRNA数据,只显示一个SNV的数据,这些数量都是严重不足的,动物数量和分组上的问题也连带导致后期数据等诸多不合理之处。

Editas的首席技术官维克·梅尔与哈佛大学教授乔治·丘吉尔等的联合声明中也强调,在进行科学问题的重现性和可靠性研究时,数据不充分可能会成为阻碍。

中科院上海神经科学研究所研究员杨辉和他的博士研究生唐骋亦撰文点评该文,表示实验中为了制取CRISPR-Cas9编辑的小鼠,采用了向受精卵当中共注Cas9蛋白以及sgRNA质粒的方法是“非主流”的设计,蛋白溶剂可能具有一定毒性,可能会影响整个系统的稳定性。

科研和市场绑定可能产生新的问题

值得一提的是,不少国内的民众对基因公司就科学问题态度如此激烈表示不解,更有很多网友表示,“企业这么强烈表达反对意见肯定是因为论文的观点损害了自己的利益”。

中科院微生物所研究员娄春波向科技日报表示,这样激烈地质疑某些实验结果的现象其实是科学研究的常态。另外,由于国外著名期刊非常强调实验结果的创新性和吸引眼球的公共媒体性,也会助长一些实验结果被作者过度解读。

另一方面,在他看来,此次两家企业相关科学家的反应确实有些过激,但公众不必特别在意,毕竟Cas9系统基因编辑的脱靶效应是相关研究的痛点。他说,这些质疑言论产生的新闻效应对华尔街股民的影响应该会很大,但对科学研究的影响应该微乎其微。真正的学术争论需要更长的时间,因为要积累足够正反两方面的实验证据。

“实际上,美国科研—技术—资本—市场,这个完美的价值链背后也有很多脆弱的地方,也存在很多值得深入研究的问题,尤其是在中国这类准备超越美国范式的国家”,娄春波说。



应该:基突变发体细胞通性殖传给代.更确切些!
基突变代影响
①基突变发体细胞丝裂程通性殖传给代,通性繁殖传给代.
②基突变发精或卵细胞形减数裂程能通通性殖传给代.
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