
We offer two kits for helper virus-free preparation of AAV2 particles for genome editing with Cas9: the AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System and the AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free System. These kits simultaneously deliver expression cassettes for Cas9 and a user-defined single guide RNA (sgRNA) to mammalian cells. Cas9 sequences are derived from either Streptococcus pyogenes (the CRISPR/Cas9 systems) or Staphylococcus aureus (the CRISPR/SaCas9 systems).
We offer two kits for helper virus-free preparation of AAV2 particles for genome editing with Cas9: the AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System and the AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free System. These kits simultaneously deliver expression cassettes for Cas9 and a user-defined single guide RNA (sgRNA) to mammalian cells. Cas9 sequences are derived from either Streptococcus pyogenes (the CRISPR/Cas9 systems) or Staphylococcus aureus (the CRISPR/SaCas9 systems).
The use of an AAV system allows for efficient genome modification in a wide variety of mammalian cells in vitro, with the CRISPR/Cas9 system using two AAV vectors to deliver the larger S. pyogenes Cas9 (SpCas9), while the CRISPR/SaCas9 system delivers everything in a single vector due to the smaller size of the SaCas9 gene. sgRNAs can be cloned directly into the prelinearized pAAV-Guide-it-Down or pAAV-Guide-it-1 plasmids in a single step. High-titer AAV2 particles can be prepared without a helper virus by simply transfecting HEK 293T cells with the included plasmids. Both the AAVpro CRISPR/Cas9 Helper Free System (Cat. # 632608) and the AAVpro CRISPR/SaCas9 Helper Free System (Cat. # 632619) are complete systems, containing all the reagents necessary to clone sgRNAs and prepare AAV particles. AAV Extraction Solution is also included for efficient AAV2 viral particle isolation. Please note that SpCas9 and SaCas9 can have different targeting efficiencies even when used on the same region of the genome—refer to Image Data (via the Details arrow in the product table below) for more information.
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2) 克隆技术使用使倾向于量繁殖现种群利用价值体,按自规律促进整种群优胜劣汰.意义说,克隆技术干扰自进化程.
3) 克隆技术种昂贵技术,需要量金钱物专业士参与,失败率非高.莉277实验唯.虽现发展更先进技术,功率能达2-3%.
4) 转基物提高疾病传染风险.例,产药物牛奶牛染病毒,种病毒能通牛奶染病
5) 克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制.克隆技术引起争论核能否允许发育初期类胚胎进行遗传操作.伦理家所能接受.
6) 克隆技术用创造超,或拥健壮体格却智力低.且,克隆技术能够类效运用,男性失遗传意义.
7) 克隆技术家庭关系带影响巨.由父亲DNA克隆孩看作父亲双胞胎兄弟,延迟几十已.难设想,发现自另外完全复制品,(或)受
我认克隆程度促进类科技文化发展同我应该看克隆仍存许弊端克隆能类作贡献能效繁殖高附加值牲畜挽救珍稀物研究癌物研究免疫研究寿命低估作用类欲望并容易满足克隆物功类自想克隆目前看克隆并利于类发展相反克隆所引起诸基变种等问题都应该引起类重视
想要克隆克隆研制没潜未比说克隆否健全安全远看给我整类物种安全没危害我现清楚克隆理意义全部健全社意义健全没传统意义父亲没传统意义母亲异类异类社相处候给理反环境点
类独二事情拼搏克隆世界独二
要良份总统克隆真杀乱克隆类克隆认识够充足所损益东西复制要考虑问题比:原体办克隆品所看待位……
我同意克隆发展讨论位克隆能否诞或残品刻我暂让问题与科脱钩面情与伦理我姑且判定克隆与异或何度自平凡
或父母谁或父母呢谁抚养呢谁谁投注真诚情克隆命比球任何命都要值钱所科家都竭尽全力挽救命理家任何情绪异趋若鹜至于恐惧孤独注定能享谁嫁哪异性发自内整摆布实验品肯定些借机扬名作秀或者由科家做主克隆双配婚姻先具备实验性质于于克隆说情比母更没保证
难发现克隆作除拥掉定语称谓外切与社、伦理、情关享受都与缘
1. 克隆研究风险性
目前物体细胞克隆技术存着难预测消除技术风险已经伦理层面反克隆重要科依据 克隆存着较风险性 论科家普通公众始终都物克隆技术发展现况类比克隆研究发展前景并作进步推论逻辑基础即目前物克隆实验仍处于初始阶段克隆技术熟物克隆实验现高失败率、高风险、使用量重组卵细胞、量畸形代及发排斥现象等问题现克隆研究仅仅通某项物克隆功案判断克隆技术普遍行性错误至少严谨科家认要物(绵羊)克隆实验技术经验应用类体身并非件容易事情种熟技术硬要作用于体克隆程充满各式各危险例英胚胎家威尔莫特认理由考虑由扎沃斯安蒂诺等宣布克隆实验同高失败率试图进行物克隆并且现或者预见未没行技术检查物胚胎所基组发育状态保证植入宫内胚胎否能够发育至于畸形或使代孕母体安全受严重威胁
另外海召2002际类基组科院副院陈竺院士指早站反克隆培育克隆羊英科家专家清楚目前技术离克隆远……克隆羊莉功经历277克隆羊实验失败波折怪胎、畸形层穷幕克隆重演谁277条命夭折负责克隆物发现存早衰现象尚解释顾切匆忙进行克隆能酿错陈竺院士言论看物克隆情况类比未克隆情况外科家反复莉羊情况观照克隆技术发展说明领域没更经验证据说明问题实质技术风险
2.克隆行违背社伦理
于自社克隆行伦理层面指责科界能于衷受影响科家发表类似观点世界医协主席恩克•阿科尔西20018月8发表声明指克隆技术用于类自悖于类价值、伦理道德原则代表世界医协坚决反克隆实验计划〔5〕另外角度威尔莫特媒体说:试想我妻与我复制‘我’三起产极寻关系我三每尤其复制‘我’都十尴尬必须坚决反克隆
科家伦理家、社家家能伦理、社等层面克隆问题展系统、溯根求源式理析作现实社员克隆问题必着与其社员相似觉科界社伦理层面反克隆研究
3.克隆行违背科道德
(1)科道德与科技工作者社职责
道德属于种社意识定社条件调整间行规范准则总恩格斯曾经指:每阶段甚至每行业都各各道德〔7〕我知道古希波克拉底誓言(the Hippocratic Oath)作医师团体职业誓约书要求业者:应尽自知识与能力医治病越医疗行并坚守品性与道德规范科技术研究、发应用程同要求遵守定道德原则
2. 现代科技术社功能越越强社渗透越越广泛越能引起更社、伦理律等问题科技工作者社责任比前显更加突重要科科、科考虑效用或利益 等说已经合宜科技工作者必须应该追求何种知识、所追求知识应置于何种位及何应用些知识等系列问题做理性析判断些问题早引起科界重视19557月15包括玻恩、海森堡居夫内52位诺贝尔奖获者《迈瑙宣言》针科技术社价值反思说:我愉快贡献我切科服务我相信科通向类幸福路我怀着惊恐情看:科向类提供自杀手段
再克隆技术能失败科研究者公认物克隆实验看克隆物种率低利羊克隆实验277胚胎融合仅仅莉功率0.36%许幸降克隆牛快死于脏异、尿毒症或呼吸困难克隆物部体表现理或免疫缺陷血液含氧量浓度低于;胸腺、脾、淋巴腺发育等
现许科研究者已经始克隆类进行克隆技术种失败能性放任失败克隆伤害克隆失败怪婴诞看幕幕让寒类克隆罪证命践踏毫疑问研究犯罪任何理性支持项杀主要代价研究更怕种研究结给类带更犯罪灾难种让类走向灭亡技术进步
1) 克隆减少遗传变异通克隆产体具同遗传基同疾病敏性种疾病毁灭整由克隆产群体
克隆物遗传全等种特定病毒或其疾病染带灾难 设想家牛群都同克隆产物种并严重病毒能毁灭全畜牧业
2) 克隆技术使用使倾向于量繁殖现种群利用价值体按自规律促进整种群优胜劣汰意义说克隆技术干扰自进化程.
克隆技术导致基复制威胁基性保持物演化现逆向颠倒程即由复杂走向简单物存极利
3) 克隆技术种昂贵技术需要量金钱物专业士参与失败率非高莉277实验唯虽现发展更先进技术功率能达2-3%
失败率高达95%至98%其途夭折胚胎畸形导致短命事实世界各牛、羊、猪鼠克隆实验平均功率2%,2%解决克隆物早衰现象
克隆源物细胞必定带已经化基些基影响克隆物寿命呢种担已经证实论克隆羊利培育克隆物都同程度表现早衰特征说明物细胞遗传物质同殖细胞遗传物质毕竟存质量差别
4) 转基物提高疾病传染风险例产药物牛奶牛染病毒种病毒能通牛奶染病
5) 克隆技术应用于体导致代遗传性状工控制克隆技术引起争论核能否允许发育初期类胚胎进行遗传操作伦理家所能接受
6) 克隆技术用创造超或拥健壮体格却智力低且克隆技术能够类效运用男性失遗传意义
康赛宁(注射用A群链球菌)(1999)
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(1999)
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒 (1990) 吸附细胞百白破联合疫苗(三等奖)(2007)
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(三等奖)(2001) 牛精浆纯化神经周围神经再影响(三等奖)(1997)
伤寒Vi糖菌苗(二等奖)(1996)
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(三等奖)(1995)
HLA单克隆抗体诊断试剂盒研制(三等奖)(1991)
抗T淋巴细胞及其亚群单克隆抗体研究(二等奖)(1990) 狂犬病疫苗评价(二等奖)(2008)
及亚洲区狂犬病毒流行病研究(三等奖)(2005)
抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)Fab噬菌体抗体库构建、筛选及鉴定(三等奖)(2005)
检测纤维连接蛋白双抗体ELISA夹建立及试剂盒研制(三等奖)(1997)
淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒研制应用(三等奖)(1996)
血源性抗狂犬病免疫球蛋白(三等奖)(1996)
狂犬病毒疫苗株(5aG)糖蛋白基克隆测序表达(三等奖)(1995)
单克隆APAAP试剂盒(三等奖)(1993)
痘苗病毒载体狂犬病毒基工程疫苗毒种研究(三等奖)(1993)
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(二等奖)(1992)
快速乙肝表面抗原酶标试剂盒试制(三等奖)(1992) 单克隆APAAP试剂盒(三等奖)(1995)
新菌抗癌剂1号(等奖)(1992)
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(三等奖)(1992)
梅毒诊断用RPR纸片试剂(二等奖) (1990) 冻干用狂犬病疫苗 (等奖)(2007)
静脉注射用SARS免疫球蛋白(三等奖)(2006)
用狂犬病纯化疫苗(VERO细胞)(二等奖)(2003)
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(二等奖)(2001)
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(三等奖)(2001)
伤寒Vi糖菌苗(二等奖)(1997)
牛精浆纯化神经周围神经再影响(二等奖)(1995)
新菌抗癌剂1号(三等奖)(1995)
淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒研制应用(三等奖)(1995)
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(三等奖)(1994)
乙肝三系统单抗杂交瘤细胞株建立及乙肝诊断试剂两半研制(二等奖)(1992)
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(二等奖)(1991)
梅毒诊断用RPR纸片试剂(三等奖)(1991)
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(二等奖)(1990)
冻干含钙凝血酶研究(二等奖)(1990)
湖北省科技推广奖
吸附精制百白破(细胞百咳)联合疫苗推广项目(二等奖) (2004)
湖北省卫厅医药卫科技进步奖
胶体金探针试剂(二等奖)(1995)
同伤寒菌苗接种体反应血清效观察(三等奖)(1995)
单克隆APAAP试剂盒(三等奖)(1995)
抗纤维蛋白质及其降解产物单克隆抗体(二等奖)(1995)
抗淋巴细胞球蛋白杂抗体吸收工艺改进研究(三等奖)(1993)
血吸虫虫卵抗体快速诊断用酶标试剂盒(三等奖)(1993)
单克隆(鼠)PAP试剂研制(等奖)(1993)
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(等奖)(1990)
梅毒诊断用RPR纸片试剂(二等奖)(1990)
十三种(套)临床化试剂盒(二等奖)(1990)
武汉优秀十科技创新
新型疫苗研究及产业化发 (2006) SARS病毒灭疫苗临床前研究 (2006)
吸附精制百白破(细胞百咳)联合疫苗推广应用 (2006)
百白破乙肝四联疫苗(2006)
冻干用狂犬病疫苗(2006)
狂犬病免疫球蛋白(2006)
乙型肝炎免疫球蛋白(2006)
武汉市科技进步奖
百白破乙肝四联疫苗(等奖)(2007)
冻干用狂犬病疫苗(二等奖)(2006)
精制单份乙型脑炎减毒疫苗 (二等奖)(2005)
麻疹、腮腺炎二联减毒疫苗 (三等奖) (2004)
用狂犬病纯化疫苗(VERO细胞)(等奖)(2003)
1.0ml/剂用狂犬病纯化疫苗获武汉市2002度优秀新产品、新技术技术创新先进表彰(2002)
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(等奖)(2000)
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(二等奖)(2000)
检测纤维连接蛋白双抗体ELISA夹建立及试剂盒研制(三等奖)(1997)
伤寒Vi糖菌苗(三等奖)(1996)
抗咳喘片研制应用(三等奖)(1993)
血清培养液(三等奖)(1992)
武汉市发明奖
安全类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物(三等奖)(2001)
抗咳喘片研制应用(二等奖)(1992)图" class="ikqb_img_alink">
现在小弟碰见一个难题,我想克隆一个基因,但是我在NCBI一检索,发现别人只发表了这个基因的DNA全长,但是,CDNA没有发表,也没有发表文章,想请问下,在不知道CDNA的情况下,请问我应该如何做这个基因的克隆???(全基因组也不知道,其他生物没有这种基因)

