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NEB/NEBuilder® HiFi DNA Assembly Master Mix/E2621S/10 reactions
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Description:
NEBuilderHiFiDNAAssemblyMasterMixwasdevelopedtoimprovetheefficiencyandaccuracyofDNAassembly.ThismethodallowsforseamlessassemblyofmultipleDNAfragments,regardlessoffragmentlengthorendcompatibility.Thismethodhasbeenusedtoassembleeithersingle-strandedoligonucleotidesordifferentsizesofDNAfragmentswithvariedoverlaps(15–80bp).IthasutilityforthesyntheticBIOLOGycommunity,aswellasthoseinterestedinone-stepcloningofmultiplefragmentsduetoitseaseofuse,flexibilityandsimplemaster-mixformat.Thereactionincludesdifferentenzymesthatworktogetherinthesamebuffer(seeFigure1):
- Theexonucleasecreatessingle-stranded3´overhangsthatfacilitatetheannealingoffragmentsthatsharecomplementarityatoneend(theoverlapregion)
- Thepolymerasefillsingapswithineachannealedfragment
- TheDNAligasesealsnicksintheassembledDNA
NEBuilderHiFiDNAAssemblykitsareavailableinvariousformats:withNEB5-alphacompetentcells(CloningKit,NEB#E5520),asabundlewithNEB10-betacompetentcells(BundleforLargeFragments,NEB#E2623)andwithoutcompetentcells(MasterMix,NEB#E2621).NEB5-alphacompetentcellscellsareexcellentforroutineassembliesof15kborless.NEBrecommendsNEB10-betaCompetentE.coli(HighEfficiency,NEB#C3019)orNEB10-betaElectrocompetentE.coli(NEB#C3020)forassemblieslargerthan15kb.Iftheassembledgenescontainrepetitivesequences,NEBStableCompetentE.coli(NEB#C3040)shouldbeused.
NEBuilderhasbeenusedinvariousapplications,including:
- Site-directedmutagenesis
- ConstructionofansgRNA-Cas9expressionvector|Animation
- Assemblyoflinearyeastexpressioncassettes
ForhelpdesigningyourprimersforusewithNEBuilder,pleaseviewourprimerdesignvideo.
NEBGibsonAssembly
ViewadditionalperformancedatacomparedtoNEBGibsonAssembly
ViewadditionalperformancedatacomparedtoIn-FusionHD
 | ComparisonofDNAAssemblyReactionTypes |
KitComponents
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| NEBuilder®High-FidelityMasterMix | -20 | |
| NEBuilder®PositiveControl | -20 | 2X |
Notes:
ToensurethesuccessfulassemblyandsubsequenttransformationofassembledDNAs,NEBrecommendsthefollowing:DNA:PCRproductpurificationisnotnecessaryifthetotalvolumeofallPCRproductsis20%orlessoftheassemblyreactionvolume.HighervolumesofPCRproductsmayreducetheefficiencyofhigh-fidelityDNAassemblyandtransformationduetotheelevatedcarryoveramountsofPCRreactionbufferandunusedprimerspresentinthePCRproduct.ColumnpurificationofPCRproductsmayincreasetheefficiencyofbothhigh-fidelityDNAassemblyandtransformationby2–10foldandishighlyrecommendedwhenperformingassembliesofthreeormorePCRfragmentsorassemblinglongerthan5kbfragments.PurifiedDNAforassemblycanbedissolvedinddH2O(Milli-Q®waterorequivalentispreferable),TEorotherdilutionbuffers.Insert:Whendirectlyassemblingfragmentsintoacloningvector,theconcentrationofassemblyfragmentsshouldbeatleast2timeshigherthantheconcentrationofvector.Forassemblyof4ormorefragmentsintoavector,werecommendusinganequimolarratiooffragments.Transformation:NEB5-alphaCompetentE.coli(HighEfficiency,NEB#C2987)providedwiththeNEBuilderHiFiDNAAssemblyCloningKitarerecommendedforuseforassembledproductsoflessthan15kb.ItisalsopossIBLetouseotherNEBcompetentE.colistrains,withtheexceptionofBL21,BL21(DE3),Lemo21(DE3),Nico(DE3),andSHuffle®.WhenusingcompetentE.colifromavendorotherthanNEB,wehavebeendecreasedrobustnessoftransformationwithhigh-fidelityDNAassembledproducts.Electroporation:Electroporationcanincreasetransformationefficiencybyseverallogs.WhenusingtheNEBuilderHiFIDNAAssemblyMasterMix,use1μloftheassembledproductforelectroporation,andplatemultipledilutions.ShouldyourequiretheuseofElectrocompetentcells,pleaseusethe"ElectrocompetentCellsTransformationProtocol"Biology:SomeDNAstructures,includinginvertedandtandemrepeats,areselectedagainstbyE.coli.SomerecombinantproteinsarenotwelltoleratedbyE.coliandcanresultinpoortransformationorsmallcolonies.蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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2019-08-29
pRSV-rev载体病毒克隆载体是由深圳市伟通生物公司代理或销售的Addgene品牌的试剂，产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的pRSV-rev载体病毒克隆载体试剂销售服务商之一，在深圳等地方销售pRSV-rev载体病毒克隆载体试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pRSV-rev载体病毒克隆载体仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的pRSV-rev载体病毒克隆载体产品 查看更多
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2021-08-20
不一样的无缝克隆，仅需三步即可完成基因克隆！，Lucigen提供全新、高效快速的基因克隆方法，无需DNA纯化以及连接酶、重组酶的作用，只需三步即可完成 查看更多
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2021-09-01
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的cDNA克隆载体构建等一站式服务供应信息，浏览与cDNA克隆载体构建等一站式服务相关的产品或在搜索更多与cDNA克隆载体构建等一站式服务相关的内容。 查看更多
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2019-01-12
克隆载体的准备实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物，其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位... 查看更多
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2021-08-03
【正品直销，售后保障】（多片段连接一步搞定克隆试剂盒）ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit是由南京诺唯赞生物科技有限公司代理或销售的Vazyme品牌的试剂，产品来源于江苏南京。南京诺唯赞生物科技有限公司是中国最权威的【正品直销，售后保障】（多片段连接一步搞定克隆试剂盒）ClonExpress MultiS One Step Cloning Kit试剂销售服务商之一，在南京等地方销售【正品直销，售后保障】（多片段连接一步搞定克隆试剂盒）ClonExpress Mul 查看更多
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2019-09-25
北京义翘神州科技有限公司(Sino Biological Inc.)在发布的大鼠 HERPUD1 基因 ORF cDNA clone (克隆载体)供应信息，浏览与大鼠 HERPUD1 基因 ORF cDNA clone (克隆载体)相关的产品或在搜索更多与大鼠 HERPUD1 基因 ORF cDNA clone (克隆载体)相关的内容。 查看更多
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2019-05-16
服务名称：Subclon Vector Construction Services 查看更多
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2021-07-29
诊断试剂盒是指能对人体体液、血液等反映人体健康状况的物质作出定性、定量的检测。... 查看更多
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2021-08-18
上海翊圣生物科技有限公司在发布的Hieff CloneTM Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆试剂盒供应信息，浏览与Hieff CloneTM Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆试剂盒相关的产品或在搜索更多与Hieff CloneTM Plus One Step Cloning Kit一步法快速克隆试剂盒相关的内容。 查看更多
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2021-07-21
本文对传统的PCR产物克隆方法进行简要介绍，然后针对目前市场上的克隆试剂盒类的产品进行介绍，对于选购提供一定的指导。 查看更多
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2021-09-09
中美泰和生物技术（北京）有限公司在发布的超好用的无缝克隆试剂盒-一步定向克隆多个片段至任何位点-CloneSmarter品牌—中美泰和独家代理供应信息，浏览与超好用的无缝克隆试剂盒-一步定向克隆多个片段至任何位点-CloneSmarter品牌—中美泰和独家代理相关的产品或在搜索更多与超好用的无缝克隆试剂盒-一步定向克隆多个片段至任何位点-CloneSmarter品牌—中美泰和独家代理相关的内容。 查看更多
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2019-02-15
上海研谨生物科技有限公司在发布的pBM19-B Simple 快速克隆试剂盒供应信息，浏览与pBM19-B Simple 快速克隆试剂盒相关的产品或在搜索更多与pBM19-B Simple 快速克隆试剂盒相关的内容。 查看更多
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常见问题
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商品咨询
美旅箱包123
pnurqwqpws2021-08-21
1．检验医诊断试剂
作检验医实验室诊断试剂,单克隆抗体其特异性强、纯度高、均性等优点,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫析、免疫组化流式细胞仪等技术.并且单克隆抗体应用,程度促进商品化试剂盒发展.目前,应用单克隆抗体制作商品化试剂盒广泛应用于：
①病原微物抗原、抗体检测；
②肿瘤抗原检测；
③免疫细胞及其亚群检测；
④激素测定；
⑤细胞测定.
单克隆抗体抗原识别,与克隆抗体同.同试剂盒使用单克隆抗体同,识别抗原位点同,导致检测结定差异.,标准化问题需要进步研究.
2．蛋白质提纯
单克隆抗体亲层析重要配体.单克隆抗体吸附惰性固相基质（Speharose 2B、4B、6B等）,并制备层析柱.品流经层析柱,待离抗原与固相单克隆抗体发特异性结合,其余能与结合.层析柱充洗脱,改变洗脱液离强度或pH,欲离抗原与抗体解离,收集洗脱液便欲纯化抗原.
作检验医实验室诊断试剂,单克隆抗体其特异性强、纯度高、均性等优点,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫析、免疫组化流式细胞仪等技术.并且单克隆抗体应用,程度促进商品化试剂盒发展.目前,应用单克隆抗体制作商品化试剂盒广泛应用于：
①病原微物抗原、抗体检测；
②肿瘤抗原检测；
③免疫细胞及其亚群检测；
④激素测定；
⑤细胞测定.
单克隆抗体抗原识别,与克隆抗体同.同试剂盒使用单克隆抗体同,识别抗原位点同,导致检测结定差异.,标准化问题需要进步研究.
2．蛋白质提纯
单克隆抗体亲层析重要配体.单克隆抗体吸附惰性固相基质（Speharose 2B、4B、6B等）,并制备层析柱.品流经层析柱,待离抗原与固相单克隆抗体发特异性结合,其余能与结合.层析柱充洗脱,改变洗脱液离强度或pH,欲离抗原与抗体解离,收集洗脱液便欲纯化抗原.
单克隆抗体的制备(详细材料)123
晓风3942017-11-08
1.蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液（超50倍量v/v）充溶胀室温其灌入直径2.5 cm 玻璃层析柱用Tris缓冲液使其平衡
2.腹水浓稀释于3倍体积Tris缓冲液1~5 ml/min 速度于蛋白A-Sepharose柱用Tris缓冲液洗柱直至所未结合蛋白都洗脱采用A280监测
3.依用2~3倍柱床体积柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白洗脱蛋白直接接入装缓冲液管缓冲液体积应所收集蛋白体积1/4
4.采用ELISA检测抗原特异性MAb
5.超滤器浓缩所离单克隆抗体1~5mg/ml所用超滤膜XM50单克隆抗体存于-20℃
2.腹水浓稀释于3倍体积Tris缓冲液1~5 ml/min 速度于蛋白A-Sepharose柱用Tris缓冲液洗柱直至所未结合蛋白都洗脱采用A280监测
3.依用2~3倍柱床体积柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白洗脱蛋白直接接入装缓冲液管缓冲液体积应所收集蛋白体积1/4
4.采用ELISA检测抗原特异性MAb
5.超滤器浓缩所离单克隆抗体1~5mg/ml所用超滤膜XM50单克隆抗体存于-20℃
【资源】价格低廉FISH探针 医学 基础 论坛学术科研...123
junlin722021-08-05
国内有没有生产FISH探针试剂盒？如果国内没有，国外有哪几家公司生产？我需要VEGF、P16、SURVIVIN的探针
武汉生物制品研究所 研究院 湖北省人民政府门户网站123
幽灵军团小姻2021-08-13
用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞) （2002）
康赛宁（注射用A群链球菌）（1999）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体（1999）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒 （1990） 吸附细胞百白破联合疫苗(三等奖)（2007）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(三等奖)（2001） 牛精浆纯化神经周围神经再影响(三等奖)（1997）
伤寒Vi糖菌苗(二等奖)（1996）
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(三等奖)（1995）
HLA单克隆抗体诊断试剂盒研制(三等奖)（1991）
抗T淋巴细胞及其亚群单克隆抗体研究(二等奖)（1990） 狂犬病疫苗评价(二等奖)（2008）
及亚洲区狂犬病毒流行病研究(三等奖)（2005）
抗乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）Fab噬菌体抗体库构建、筛选及鉴定(三等奖)（2005）
检测纤维连接蛋白双抗体ELISA夹建立及试剂盒研制(三等奖)（1997）
淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒研制应用(三等奖)（1996）
血源性抗狂犬病免疫球蛋白(三等奖)（1996）
狂犬病毒疫苗株（5aG）糖蛋白基克隆测序表达(三等奖)（1995）
单克隆APAAP试剂盒(三等奖)（1993）
痘苗病毒载体狂犬病毒基工程疫苗毒种研究(三等奖)（1993）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(二等奖)（1992）
快速乙肝表面抗原酶标试剂盒试制(三等奖)（1992） 单克隆APAAP试剂盒(三等奖)（1995）
新菌抗癌剂1号(等奖)（1992）
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(三等奖)（1992）
梅毒诊断用RPR纸片试剂(二等奖) （1990） 冻干用狂犬病疫苗 (等奖)（2007）
静脉注射用SARS免疫球蛋白(三等奖)（2006）
用狂犬病纯化疫苗（VERO细胞）（二等奖）（2003）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(二等奖)（2001）
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(三等奖)（2001）
伤寒Vi糖菌苗(二等奖)（1997）
牛精浆纯化神经周围神经再影响(二等奖)（1995）
新菌抗癌剂1号(三等奖)（1995）
淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒研制应用(三等奖)（1995）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(三等奖)（1994）
乙肝三系统单抗杂交瘤细胞株建立及乙肝诊断试剂两半研制(二等奖)（1992）
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(二等奖)（1991）
梅毒诊断用RPR纸片试剂(三等奖)（1991）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(二等奖)（1990）
冻干含钙凝血酶研究(二等奖)（1990）
湖北省科技推广奖
吸附精制百白破(细胞百咳)联合疫苗推广项目(二等奖) （2004）
湖北省卫厅医药卫科技进步奖
胶体金探针试剂(二等奖)(1995）
同伤寒菌苗接种体反应血清效观察(三等奖)（1995）
单克隆APAAP试剂盒(三等奖)（1995）
抗纤维蛋白质及其降解产物单克隆抗体(二等奖)（1995）
抗淋巴细胞球蛋白杂抗体吸收工艺改进研究(三等奖)（1993）
血吸虫虫卵抗体快速诊断用酶标试剂盒(三等奖)（1993）
单克隆(鼠)PAP试剂研制(等奖)（1993）
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(等奖)（1990）
梅毒诊断用RPR纸片试剂(二等奖)（1990）
十三种（套）临床化试剂盒(二等奖)（1990）
武汉优秀十科技创新
新型疫苗研究及产业化发 （2006） SARS病毒灭疫苗临床前研究 （2006）
吸附精制百白破(细胞百咳)联合疫苗推广应用 （2006）
百白破乙肝四联疫苗（2006）
冻干用狂犬病疫苗（2006）
狂犬病免疫球蛋白（2006）
乙型肝炎免疫球蛋白（2006）
武汉市科技进步奖
百白破乙肝四联疫苗(等奖)（2007）
冻干用狂犬病疫苗(二等奖)（2006）
精制单份乙型脑炎减毒疫苗 (二等奖)（2005）
麻疹、腮腺炎二联减毒疫苗 (三等奖) （2004）
用狂犬病纯化疫苗（VERO细胞）（等奖）（2003）
1.0ml/剂用狂犬病纯化疫苗获武汉市2002度优秀新产品、新技术技术创新先进表彰（2002）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(等奖)（2000）
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(二等奖)（2000）
检测纤维连接蛋白双抗体ELISA夹建立及试剂盒研制(三等奖)（1997）
伤寒Vi糖菌苗(三等奖)（1996）
抗咳喘片研制应用(三等奖)（1993）
血清培养液(三等奖)（1992）
武汉市发明奖
安全类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物(三等奖)（2001）
抗咳喘片研制应用(二等奖)（1992）图" class="ikqb_img_alink">
康赛宁（注射用A群链球菌）（1999）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体（1999）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒 （1990） 吸附细胞百白破联合疫苗(三等奖)（2007）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(三等奖)（2001） 牛精浆纯化神经周围神经再影响(三等奖)（1997）
伤寒Vi糖菌苗(二等奖)（1996）
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(三等奖)（1995）
HLA单克隆抗体诊断试剂盒研制(三等奖)（1991）
抗T淋巴细胞及其亚群单克隆抗体研究(二等奖)（1990） 狂犬病疫苗评价(二等奖)（2008）
及亚洲区狂犬病毒流行病研究(三等奖)（2005）
抗乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）Fab噬菌体抗体库构建、筛选及鉴定(三等奖)（2005）
检测纤维连接蛋白双抗体ELISA夹建立及试剂盒研制(三等奖)（1997）
淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒研制应用(三等奖)（1996）
血源性抗狂犬病免疫球蛋白(三等奖)（1996）
狂犬病毒疫苗株（5aG）糖蛋白基克隆测序表达(三等奖)（1995）
单克隆APAAP试剂盒(三等奖)（1993）
痘苗病毒载体狂犬病毒基工程疫苗毒种研究(三等奖)（1993）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(二等奖)（1992）
快速乙肝表面抗原酶标试剂盒试制(三等奖)（1992） 单克隆APAAP试剂盒(三等奖)（1995）
新菌抗癌剂1号(等奖)（1992）
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(三等奖)（1992）
梅毒诊断用RPR纸片试剂(二等奖) （1990） 冻干用狂犬病疫苗 (等奖)（2007）
静脉注射用SARS免疫球蛋白(三等奖)（2006）
用狂犬病纯化疫苗（VERO细胞）（二等奖）（2003）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(二等奖)（2001）
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(三等奖)（2001）
伤寒Vi糖菌苗(二等奖)（1997）
牛精浆纯化神经周围神经再影响(二等奖)（1995）
新菌抗癌剂1号(三等奖)（1995）
淋球菌培养基、氧化酶试纸及奈瑟氏菌快速糖试验试剂盒研制应用(三等奖)（1995）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(三等奖)（1994）
乙肝三系统单抗杂交瘤细胞株建立及乙肝诊断试剂两半研制(二等奖)（1992）
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(二等奖)（1991）
梅毒诊断用RPR纸片试剂(三等奖)（1991）
快速乙肝表面抗原全血凝集诊断试剂盒(二等奖)（1990）
冻干含钙凝血酶研究(二等奖)（1990）
湖北省科技推广奖
吸附精制百白破(细胞百咳)联合疫苗推广项目(二等奖) （2004）
湖北省卫厅医药卫科技进步奖
胶体金探针试剂(二等奖)(1995）
同伤寒菌苗接种体反应血清效观察(三等奖)（1995）
单克隆APAAP试剂盒(三等奖)（1995）
抗纤维蛋白质及其降解产物单克隆抗体(二等奖)（1995）
抗淋巴细胞球蛋白杂抗体吸收工艺改进研究(三等奖)（1993）
血吸虫虫卵抗体快速诊断用酶标试剂盒(三等奖)（1993）
单克隆(鼠)PAP试剂研制(等奖)（1993）
A、B、C群脑膜炎奈瑟氏菌糖单抗及ABC群混合价诊断试剂研究(等奖)（1990）
梅毒诊断用RPR纸片试剂(二等奖)（1990）
十三种（套）临床化试剂盒(二等奖)（1990）
武汉优秀十科技创新
新型疫苗研究及产业化发 （2006） SARS病毒灭疫苗临床前研究 （2006）
吸附精制百白破(细胞百咳)联合疫苗推广应用 （2006）
百白破乙肝四联疫苗（2006）
冻干用狂犬病疫苗（2006）
狂犬病免疫球蛋白（2006）
乙型肝炎免疫球蛋白（2006）
武汉市科技进步奖
百白破乙肝四联疫苗(等奖)（2007）
冻干用狂犬病疫苗(二等奖)（2006）
精制单份乙型脑炎减毒疫苗 (二等奖)（2005）
麻疹、腮腺炎二联减毒疫苗 (三等奖) （2004）
用狂犬病纯化疫苗（VERO细胞）（等奖）（2003）
1.0ml/剂用狂犬病纯化疫苗获武汉市2002度优秀新产品、新技术技术创新先进表彰（2002）
注射用鼠抗T淋巴细胞CD3抗原单克隆抗体(等奖)（2000）
吸附精制百咳菌苗、白喉、破伤风类毒素混合制剂研制(二等奖)（2000）
检测纤维连接蛋白双抗体ELISA夹建立及试剂盒研制(三等奖)（1997）
伤寒Vi糖菌苗(三等奖)（1996）
抗咳喘片研制应用(三等奖)（1993）
血清培养液(三等奖)（1992）
武汉市发明奖
安全类免疫缺陷病毒抗体阳性血清替代物(三等奖)（2001）
抗咳喘片研制应用(二等奖)（1992）图" class="ikqb_img_alink">
病毒的复制周期步骤是什么?123
2017-12-02
病毒的复制过程叫做复制周期。其大致可分为连续的五个阶段:吸附、侵入、脱壳、病毒大分子的合成、病毒的装配与释放。
详见：http://zhidao.baidu.com/question/1831844001436785260.html?fr=iks&word=%B2%A1%B6%BE%B5%C4%B8%B4%D6%C6%D6%DC%C6%DA%B5%C4%B9%FD%B3%CC%3F&ie=gbk
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cloneez pcr克隆试剂盒怎么样123
纯洁的小伤vn72021-09-06
我没用产品我直都用
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未知基因克隆策略及进展123
liqin10132021-09-11
各位大哥大姐，大家好！
现在小弟碰见一个难题，我想克隆一个基因，但是我在NCBI一检索，发现别人只发表了这个基因的DNA全长，但是，CDNA没有发表，也没有发表文章，想请问下，在不知道CDNA的情况下，请问我应该如何做这个基因的克隆？？？（全基因组也不知道,其他生物没有这种基因）
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【求助】最近用stratagene点突变试剂盒作定点突变,老是长不出克隆,...123
wangxiaoguang2021-08-24
逆转录酶需要_完美作业网_www.wanmeila.com123
Shine_former2021-09-08
病毒DNA注入宿主细胞所需酶类都DNA指导利用宿主细胞原料合
乙型肝炎病毒dna荧光定量结果:乘以10的8次方检 123
yiguojun1232017-12-02
结提示：病毒复制跃（属于108）体内病毒量102000000于检测限100传染性强
建议：做肝功能检查再结合肝功能情况遵医嘱进行抗病毒治疗
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病毒复制循环可分为哪几个阶段?各个阶段的主要过程是什么? 123
岩情89jS2017-12-02
（一）吸附(adsorption):病毒表面接触蛋白 ---- 细胞表面受体
吸附（Adsorption）是指病毒附着于敏感细胞的表面，它是感染的起始期。细胞与病毒相互作用最初是偶然碰撞和静电作用，这是可逆的联结。随后的特异性吸附是非常重要的，根据这一点可确定许多病毒的宿主范围，不吸附就不能引起感染。
脊髓灰质炎病毒的细胞表面受体是免疫球蛋白超家族，在非灵长类细胞上没有发现此受体，而猴肾细胞、 Hela细胞和人二倍体纤维母细胞上有它的受体，故脊髓来质炎病毒能感染人体鼻、咽、肠和脊髓前角细胞，引起脊髓灰质炎（小儿麻痹）。
水磨石病毒的细胞表面受体是含唾液酸（N-乙酰神经氨酸）的糖蛋白，它与流感病毒表面的血凝素剌突（受体连结蛋白）有特殊的亲和力，如用神经氨酸酶破坏该受体，则流感病毒不再吸附这种细胞。
此外，HIV受体为CD4；鼻病毒的受体为细胞粘附分子-1（1CAM-1）；EB病毒的受体为补体受体-2（CR-2）。病毒吸附也受离子强度、pH、温度等环境条件的影响。研究病毒的吸附过程对了解受体组成、功能、致病机理以及探讨抗病毒治疗有重要意义。
（二）穿入(penetration):膜融合；病毒胞饮等
穿入（Penetration）是指病毒核酸或感染性核衣壳穿过细胞进入胞浆，开始病毒感染的细胞内期。
主要有三种方式：（1）融合 (Fusion)，在细胞膜表面病毒囊膜与细胞膜融合，病毒的核衣壳进入胞浆。副粘病毒以融合方式进入，如麻疹病毒、腮腺炎病毒囊膜上有融合蛋白，带有一段疏水氨基酸，介导细胞膜与病毒囊膜的融合。（2）胞饮 (Viropexis)，由于细胞膜内陷整个病毒被吞饮入胞内形成囊泡。胞饮是病毒穿入的常见方式，也是哺乳动物细胞本身具有一种摄取各种营养物质和激素的方式。当病毒与受体结合后，在细胞膜的特殊区域与病毒病毒一起内陷形成膜性囊泡，此时病毒在胞浆中仍被胞膜覆盖。某些囊膜病毒，如流感病毒借助病毒的血凝素（HA）完成脂膜间的融合，囊泡内低Ph环境使HA蛋白的三维结构发生变化，从而介导病毒囊膜与囊泡膜的融合，病毒核衣壳进入胞浆。（3）直接进入，某些无囊膜病毒，如脊髓灰质炎病毒与受体接角后，衣壳蛋白的多肽构形发生变化并对蛋白水解酶敏感，病毒核酸可直接穿越细胞膜到细胞浆中，而大部分蛋白衣壳仍留在胞膜外，这种进入的方式较为少见。
（三）脱壳(uncoating):细胞溶酶体酶； 病毒脱壳酶
穿入和脱壳是边续的过程，失去病毒体的完整性被称为“脱壳 (Uncoating)”。脱壳到出现新的感染病毒之间叫“隐蔽期”。经胞饮进入细胞的病毒，衣壳可被吞噬体中的溶酶体酶降解而去除。有的病毒，如脊髓灰质炎病毒，在吸附穿入细胞的过程中病毒的RNA释放到胞浆中。而痘苗病毒当其复杂的核心结构进入胞浆中后，随之病毒体多聚酶活化，合成病毒脱壳所需要的酶，完成脱壳。
（四）生物合成(biosynthesis):病毒核酸复制； 病毒蛋白质合成
DNA病毒和RNA病毒在复制机理有区别，但复制的结果都是合成核酸分子和蛋白质衣壳，然后装配成新的有感染性的病毒。一个复制周期大约需6～8小时。
1. 双股DNA病毒的复制----多数DNA病毒为双股DNA。
双股DNA病毒，如单纯疹病毒和腺病毒在宿主细胞核内的RNA聚合酶作用下，从病毒DNA上转录病毒mRNA，然后转移到胞浆核糖体上，指导合成蛋白质。
1) 病毒基因的mRNA转录（早期转录）: 病毒本身含有RNA聚合酶，可在胞浆中转录mRNA。mRNA有二种：早期m RNA，主要合成复制病毒DNA所需的酶及调控蛋白等，如依赖DNA的DNA聚合酶，脱氧胸腺嘧啶激酶等，称为早期蛋白；
2）病毒核酸复制：子代病毒DNA的合成是以亲代DNA为模板，按核酸半保留形式复制子代双股DNA。DNA复制出现在结构蛋白合成之前。
3）晚期转录: 晚期mRNA和晚期翻译:晚期蛋白 --- 衣壳蛋白, 包膜蛋白
晚期mRNA ，在病毒DNA复制之后出现，主要指导合成病毒的结构蛋白，称为晚期蛋白。
2. 单股RNA病毒的复制----RNA病毒核酸多为单股，病毒全部遗传信息均含在RNA中。
又可分为：
病毒RNA的碱基序列与mRNA完全相同者，称为正链RNA病毒。
病毒RNA碱基序列与mRNA互补者，称为负链RNA病毒。
逆转录病毒又称RNA肿瘤病毒 (Oncornavirus) ，病毒体含有单股正链RNA、依赖RNA的DNA多聚酶（逆转录酶）和 tRNA。
(1) 正链RNA病毒的复制 以脊髓灰质炎病毒为例，侵入的RNA直接附着于宿主细胞核糖体上，翻译出大分子蛋白，并迅速被蛋白水解酶降解为结构蛋白和非结构蛋白，如依赖RNA的RNA聚合酶。在这种酶的作用下，以亲代RNA为模板形成一双链结构，称“复制型（Replicative form）”。再从互补的负链复制出多股子代正链RNA，这种由一条完整的负链和正在生长中的多股正链组成的结构，秒“复制中间体(Replicative intermediate) ”。新的子代RNA分子在复制环中有三种功能：为进一步合成复制型起模板作用；继续起mRNA作用；构成感染性病毒RNA。
(2) 负链RNA病毒的复制 流感病毒、副流感病毒、狂犬病毒和腮腺炎病毒等有囊膜病毒属于这一范畴。病毒体中含有RNA的RNA聚合酶，从侵入链转录出mRNA，翻译出病毒结构蛋白和酶，同时又可做为模板，在依赖RNA的RNA聚合酶作用下合成子代负链RNA。
(3) 逆转录病毒（Retrovirus）复制过程 分二个阶段：第一阶段，病毒核时进入胞浆后，以RNA为模板，在依赖RNA的DNA多聚酶和tRNA引物的作用下，合成负链DNA（即RNA：DNA），正链RNA被降解，进而以负链DNA为模板形成双股DNA（即DNA：DNA），转入细胞核内，整合成宿主DNA中，成为前病毒。第二阶段，前病毒DNA转录出病毒mRNA，翻译出病毒蛋白质。同样从前病毒DNA转录出病毒RNA，在胞浆内装配，以出芽方式释放。被感染的细胞仍持续分裂将前病毒传递至子代细胞。
(五) 装配与释放:
DNA病毒 (多数核内装配)；RNA病毒(多数胞浆内装配)
包膜病毒 (出芽释放)；无包膜病毒(破胞释放)
新合成的病毒核酸和病毒结构蛋白在感染细胞内组合成病毒颗粒的过程称为装配（Assembly），而从细胞内转移到细胞外的过程为释放(Release)。大多数DNA病毒，在核内复制DNA，在胞浆内合成蛋白质，转入核内装配成熟。而痘苗病毒其全部成份及装配均在胞浆内完成。RNA病毒多在胞浆内复制核酸及合成蛋白。感染后6个小时，一个细胞可产生多达10，000个病毒颗粒。
病毒装配成熟后释放的方式有：（1）宿主细胞裂解，病毒释放到周围环境中，见于无囊膜病毒，如腺病毒、脊髓灰质炎病毒等；（2）以出芽的方式释放，见于有囊膜病毒，如疱疹病毒在核膜上获得囊膜，流感病毒在细胞膜上获得囊膜而成熟，然后以出芽方式释放出成熟病毒。也可通过细胞间桥或细胞融合邻近的细胞。
吸附（Adsorption）是指病毒附着于敏感细胞的表面，它是感染的起始期。细胞与病毒相互作用最初是偶然碰撞和静电作用，这是可逆的联结。随后的特异性吸附是非常重要的，根据这一点可确定许多病毒的宿主范围，不吸附就不能引起感染。
脊髓灰质炎病毒的细胞表面受体是免疫球蛋白超家族，在非灵长类细胞上没有发现此受体，而猴肾细胞、 Hela细胞和人二倍体纤维母细胞上有它的受体，故脊髓来质炎病毒能感染人体鼻、咽、肠和脊髓前角细胞，引起脊髓灰质炎（小儿麻痹）。
水磨石病毒的细胞表面受体是含唾液酸（N-乙酰神经氨酸）的糖蛋白，它与流感病毒表面的血凝素剌突（受体连结蛋白）有特殊的亲和力，如用神经氨酸酶破坏该受体，则流感病毒不再吸附这种细胞。
此外，HIV受体为CD4；鼻病毒的受体为细胞粘附分子-1（1CAM-1）；EB病毒的受体为补体受体-2（CR-2）。病毒吸附也受离子强度、pH、温度等环境条件的影响。研究病毒的吸附过程对了解受体组成、功能、致病机理以及探讨抗病毒治疗有重要意义。
（二）穿入(penetration):膜融合；病毒胞饮等
穿入（Penetration）是指病毒核酸或感染性核衣壳穿过细胞进入胞浆，开始病毒感染的细胞内期。
主要有三种方式：（1）融合 (Fusion)，在细胞膜表面病毒囊膜与细胞膜融合，病毒的核衣壳进入胞浆。副粘病毒以融合方式进入，如麻疹病毒、腮腺炎病毒囊膜上有融合蛋白，带有一段疏水氨基酸，介导细胞膜与病毒囊膜的融合。（2）胞饮 (Viropexis)，由于细胞膜内陷整个病毒被吞饮入胞内形成囊泡。胞饮是病毒穿入的常见方式，也是哺乳动物细胞本身具有一种摄取各种营养物质和激素的方式。当病毒与受体结合后，在细胞膜的特殊区域与病毒病毒一起内陷形成膜性囊泡，此时病毒在胞浆中仍被胞膜覆盖。某些囊膜病毒，如流感病毒借助病毒的血凝素（HA）完成脂膜间的融合，囊泡内低Ph环境使HA蛋白的三维结构发生变化，从而介导病毒囊膜与囊泡膜的融合，病毒核衣壳进入胞浆。（3）直接进入，某些无囊膜病毒，如脊髓灰质炎病毒与受体接角后，衣壳蛋白的多肽构形发生变化并对蛋白水解酶敏感，病毒核酸可直接穿越细胞膜到细胞浆中，而大部分蛋白衣壳仍留在胞膜外，这种进入的方式较为少见。
（三）脱壳(uncoating):细胞溶酶体酶； 病毒脱壳酶
穿入和脱壳是边续的过程，失去病毒体的完整性被称为“脱壳 (Uncoating)”。脱壳到出现新的感染病毒之间叫“隐蔽期”。经胞饮进入细胞的病毒，衣壳可被吞噬体中的溶酶体酶降解而去除。有的病毒，如脊髓灰质炎病毒，在吸附穿入细胞的过程中病毒的RNA释放到胞浆中。而痘苗病毒当其复杂的核心结构进入胞浆中后，随之病毒体多聚酶活化，合成病毒脱壳所需要的酶，完成脱壳。
（四）生物合成(biosynthesis):病毒核酸复制； 病毒蛋白质合成
DNA病毒和RNA病毒在复制机理有区别，但复制的结果都是合成核酸分子和蛋白质衣壳，然后装配成新的有感染性的病毒。一个复制周期大约需6～8小时。
1. 双股DNA病毒的复制----多数DNA病毒为双股DNA。
双股DNA病毒，如单纯疹病毒和腺病毒在宿主细胞核内的RNA聚合酶作用下，从病毒DNA上转录病毒mRNA，然后转移到胞浆核糖体上，指导合成蛋白质。
1) 病毒基因的mRNA转录（早期转录）: 病毒本身含有RNA聚合酶，可在胞浆中转录mRNA。mRNA有二种：早期m RNA，主要合成复制病毒DNA所需的酶及调控蛋白等，如依赖DNA的DNA聚合酶，脱氧胸腺嘧啶激酶等，称为早期蛋白；
2）病毒核酸复制：子代病毒DNA的合成是以亲代DNA为模板，按核酸半保留形式复制子代双股DNA。DNA复制出现在结构蛋白合成之前。
3）晚期转录: 晚期mRNA和晚期翻译:晚期蛋白 --- 衣壳蛋白, 包膜蛋白
晚期mRNA ，在病毒DNA复制之后出现，主要指导合成病毒的结构蛋白，称为晚期蛋白。
2. 单股RNA病毒的复制----RNA病毒核酸多为单股，病毒全部遗传信息均含在RNA中。
又可分为：
病毒RNA的碱基序列与mRNA完全相同者，称为正链RNA病毒。
病毒RNA碱基序列与mRNA互补者，称为负链RNA病毒。
逆转录病毒又称RNA肿瘤病毒 (Oncornavirus) ，病毒体含有单股正链RNA、依赖RNA的DNA多聚酶（逆转录酶）和 tRNA。
(1) 正链RNA病毒的复制 以脊髓灰质炎病毒为例，侵入的RNA直接附着于宿主细胞核糖体上，翻译出大分子蛋白，并迅速被蛋白水解酶降解为结构蛋白和非结构蛋白，如依赖RNA的RNA聚合酶。在这种酶的作用下，以亲代RNA为模板形成一双链结构，称“复制型（Replicative form）”。再从互补的负链复制出多股子代正链RNA，这种由一条完整的负链和正在生长中的多股正链组成的结构，秒“复制中间体(Replicative intermediate) ”。新的子代RNA分子在复制环中有三种功能：为进一步合成复制型起模板作用；继续起mRNA作用；构成感染性病毒RNA。
(2) 负链RNA病毒的复制 流感病毒、副流感病毒、狂犬病毒和腮腺炎病毒等有囊膜病毒属于这一范畴。病毒体中含有RNA的RNA聚合酶，从侵入链转录出mRNA，翻译出病毒结构蛋白和酶，同时又可做为模板，在依赖RNA的RNA聚合酶作用下合成子代负链RNA。
(3) 逆转录病毒（Retrovirus）复制过程 分二个阶段：第一阶段，病毒核时进入胞浆后，以RNA为模板，在依赖RNA的DNA多聚酶和tRNA引物的作用下，合成负链DNA（即RNA：DNA），正链RNA被降解，进而以负链DNA为模板形成双股DNA（即DNA：DNA），转入细胞核内，整合成宿主DNA中，成为前病毒。第二阶段，前病毒DNA转录出病毒mRNA，翻译出病毒蛋白质。同样从前病毒DNA转录出病毒RNA，在胞浆内装配，以出芽方式释放。被感染的细胞仍持续分裂将前病毒传递至子代细胞。
(五) 装配与释放:
DNA病毒 (多数核内装配)；RNA病毒(多数胞浆内装配)
包膜病毒 (出芽释放)；无包膜病毒(破胞释放)
新合成的病毒核酸和病毒结构蛋白在感染细胞内组合成病毒颗粒的过程称为装配（Assembly），而从细胞内转移到细胞外的过程为释放(Release)。大多数DNA病毒，在核内复制DNA，在胞浆内合成蛋白质，转入核内装配成熟。而痘苗病毒其全部成份及装配均在胞浆内完成。RNA病毒多在胞浆内复制核酸及合成蛋白。感染后6个小时，一个细胞可产生多达10，000个病毒颗粒。
病毒装配成熟后释放的方式有：（1）宿主细胞裂解，病毒释放到周围环境中，见于无囊膜病毒，如腺病毒、脊髓灰质炎病毒等；（2）以出芽的方式释放，见于有囊膜病毒，如疱疹病毒在核膜上获得囊膜，流感病毒在细胞膜上获得囊膜而成熟，然后以出芽方式释放出成熟病毒。也可通过细胞间桥或细胞融合邻近的细胞。
关于克隆的优缺点请说明优或缺点,并说明理由,_123
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