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NEB/NEB® Golden Gate Assembly Mix/E1600S/15 reactions
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Description:
TheNEBGoldenGateAssemblyMixcontainsanoptimizedmixofBsaIandT4DNALigase.Togethertheseenzymes,alongwithahighlyoptimizedbuffer,candirecttheassemblyofmultipleinserts/modulesusingtheGoldenGateapproach.AlsoprovidedisthepGGAdestinationplasmid,whichprovidesabackboneforyourassembly,andfeaturesconvenientrestrictionenzymesitesforsubcloning,andhasT7/SP6promotersequencestoenableinvitrotranscription.TheefficientandseamlessassemblyofDNAfragments,commonlyreferredtoasGoldenGateassembly(1,2),hasitsoriginsin1996,whenforthefirsttimeitwasshownthatmultipleinsertscouldbeassembledintoavectorbackboneusingonlythesequential(3)orsimultaneous(4)activitiesofasingletypeIISrestrictionenzymeandT4DNAligase.
TypeIISrestrictionenzymesbindtotheirrecognitionsitesbutcuttheDNAdownstreamfromthatsiteatapositional,notsequence-specific,cutsite.Thus,asingleTypeIISrestrictionenzymecanbeusedtogenerateDNAfragmentswithuniqueoverhangs.Asanexample,BsaIhasarecognitionsiteofGGTCTC(N1/N5),wheretheGGTCTCrepresentstherecognition/bindingsite,andtheN1/N5indicatesthecutsiteisonebasedownstreamonthetopstrand,andfivebasesdownstreamonthebottomstrand.Assemblyofdigestedfragmentsproceedsthroughannealingofcomplementaryfourbaseoverhangsonadjacentfragments.ThedigestedfragmentsandthefinalassemblynolongercontainType IISrestrictionenzymerecognitionsites,sonofurthercuttingispossIBLe.Theassemblyproductaccumulateswithtime.
Whileparticularlyusefulformulti-fragmentassembliessuchasTranscriptionActivatorLikeEffectors(TALEs)(5)andTALEsfusedtoaFokInucleasecatalyticdomain(TALENs)(6),theGoldenGatemethodcanalsobeusedforcloningofsingleinserts. TolearnmoreabouttheGoldenGateAssemblyworkflow,watchthisvideotutorial.
TohelpselectthebestDNAassemblymethodforyourneeds,pleaseuseourSyntheticBIOLOGy/DNAAssemblySelectionChart.
AssemblyreactionsweresetupusingeitherpreclonedinsertsorPCRampliconsdirectly.Reactionconditionsweresetupaccordingtomanufacturer,andareshownabove.Twoseparateexperimentsareshownforeachreactiontype.
KitComponents
Thefollowingreagentsaresuppliedwiththisproduct:
| Storeat(°C) | Concentration | |
| NEB®GoldenGateBuffer | -20 | 10X |
| NEB®GoldenGateAssemblyMix | -20 | |
| pGGADestinationPlasmid | -20 |
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
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公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-08-30
货号：M10101-0005-2 查看更多
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2019-06-25
可被单一限制酶切割用作克隆载体的λ噬菌体DNA的制备实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。在某些情况下，制备好的 λ 噬菌体 DNA 经限制酶的简单消化即可用于克隆。但只有... 查看更多
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2021-09-05
pLOX-CW-CRE载体病毒克隆载体是由深圳市伟通生物公司代理或销售的伟通生物品牌的试剂，产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的pLOX-CW-CRE载体病毒克隆载体试剂销售服务商之一，在深圳等地方销售pLOX-CW-CRE载体病毒克隆载体试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pLOX-CW-CRE载体病毒克隆载体仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的pLOX-CW-CRE载体病毒克隆载体产品 查看更多
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2021-07-31
FastaTM一步法克隆试剂盒; FastaTM多片段一步法克隆试剂盒如果您无法正常浏览邮件，请点击此处观看内容！若您不希望收到此类邮件，请点击退订。 FastaTM一步法克隆试剂盒 产品名称规格货号 价格（元） FastaTM One Step Cloning Kit50 rxnFOSC-50 800 非连接依赖型的快速克隆技术 • 简单、快速、高效，... 查看更多
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2021-09-01
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的cDNA克隆载体构建等一站式服务供应信息，浏览与cDNA克隆载体构建等一站式服务相关的产品或在搜索更多与cDNA克隆载体构建等一站式服务相关的内容。 查看更多
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2021-09-04
pLVX-Tight-Puro载体病毒克隆载体是由深圳市伟通生物公司代理或销售的Clontech品牌的试剂，产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的pLVX-Tight-Puro载体病毒克隆载体试剂销售服务商之一，在深圳等地方销售pLVX-Tight-Puro载体病毒克隆载体试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业pLVX-Tight-Puro载体病毒克隆载体仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的pLVX-Tight-Puro载体病毒克隆载体产品 查看更多
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近岸蛋白质科技有限公司在发布的NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒试用装供应信息，浏览与NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒试用装相关的产品或在搜索更多与NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒试用装相关的内容。 查看更多
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零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒是由上海前尘生物科技有限公司代理或销售的Yeasen品牌的试剂，产品来源于Yeasen。上海前尘生物科技有限公司是中国最权威的零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒试剂销售服务商之一，在浦东新区等地方销售零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒产品 查看更多
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2019-02-10
RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体病毒克隆载体是由深圳市伟通生物公司代理或销售的Clontech品牌的试剂，产品来源于国外。深圳市伟通生物公司是中国最权威的RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体病毒克隆载体试剂销售服务商之一，在深圳等地方销售RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体病毒克隆载体试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业RNAi-ReadypSIREN-Retr 查看更多
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2021-07-29
诊断试剂盒是指能对人体体液、血液等反映人体健康状况的物质作出定性、定量的检测。... 查看更多
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货号：290-66501 查看更多
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2019-07-12
北京拜尔迪生物技术有限公司在发布的pUC18克隆载体供应信息，浏览与pUC18克隆载体相关的产品或在搜索更多与pUC18克隆载体相关的内容。 查看更多
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【资源】价格低廉FISH探针 医学 基础 论坛学术科研...123
junlin722021-08-05
国内有没有生产FISH探针试剂盒？如果国内没有，国外有哪几家公司生产？我需要VEGF、P16、SURVIVIN的探针
基因克隆载体.ppt123
xjy05392021-09-04
用限制性核酸内切酶切割目基载体再用dna连接酶其连接
丁香客/whsky:病毒蚀斑克隆出现问题求助 采用6孔板接毒后,铺上低...123
whsky2013-09-30
采用6孔板接毒后，铺上低溶解度琼脂糖，第二天就出来了这些病变，正常细胞没有出现这种现象。
按说空斑应该出现多个，但我的六孔板中一个空最多也就出现了2个空斑，也不像文献报道的那样规则，而且很大！
由于没有做梯度稀释，会不会是接毒量过大造成的啊？请大侠指点，万分感谢！
兔抗NFκB p65抗体北京品牌:百奥莱博北京123
钡咕2017-11-10
楼主
兔抗nf-κp65克隆抗体试剂
价格1元每盒
知道真
希望帮、
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价格1元每盒
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希望帮、
为什么HIV要逆转录成DNA再表达?123
小汐生日快乐帿2021-08-18
三类,使自身Rna注入体细胞、调控蛋白.T细胞浆细胞能细菌暴露或泌抗体使细菌形沉淀进吞噬细胞消化结构蛋白.2-9控制前病毒表达每条RNA约9LTR间序列编码至少9蛋白,通逆转录酶逆转录DNA. HIV特异性染效应T细胞、二道放线已经灭. 病毒基组两条相同链RNA,注入自身RNA才能激逆转录程含顺式调控序列, LTR）两端末端重复序列（long terminal repeats,复制再转录指导合蛋白质. HIV逆转录通侵入效应T细胞.8kb淋巴细胞能直接杀死细菌.细菌能第,直接杀死细菌吞噬细胞已证明LTR启增强并含负调控区. 效应T细胞通激染细胞内溶酶体释放水解酶使细胞裂解
PCR反应试剂盒(2000bp) 20T 当日可发品牌:卡诺斯湖北123
秋严是神′骱﹏2021-08-23
PCR反应试剂盒(2000bp) 试剂盒般都楼主查询看哈
...的反转录buffer用完了,可以用其他反转录试剂盒里面的buffer吗...123
之玮4dX嶑2021-09-03
用克隆片段试剂叫缝克隆试剂盒楼提同科物操作简单快速效率高
微量样本miRNA和总RNA提取试剂盒217084性能参数,报价/价格,...123
__韓曉軒6J2017-11-10
本试剂盒采用高效、专结合核酸离吸附柱独特缓冲系统,种同类型微量品快速提取总RNA.本试剂盒特别加入Carrier,体系轻松捕获微量核酸,具便快捷、产量高、重复性特点.30-40钟内即完反应,提取总RNA纯度极高,没DNA蛋白质污染,用于RT-PCR、Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase保护析克隆明白查询药智网答满意请您采纳谢谢
不含逆转录酶的病毒有哪些?123
2017-12-02
求教：网找逆转录病毒哪些病毒含逆转录酶呢举几种类病毒名称
人白细胞介素10(hIL10)cDNA克隆与表达的研究123
安诺瑞康2021-09-13
白细胞介素10（IL-10）是一种由多种细胞亚群产生的重要免疫调节因子。
早期研究显示，其主要生物功能为限制炎症反应及调节多种免疫细胞的分化和增殖，例如：T细胞、B细胞、NK细胞、
抗原呈递细胞、肥大细胞、粒细胞等。近来研究结果提示，IL-10也可以介导免疫反应的激活，有助于清除感染及非感染
颗粒且只产生轻微的炎症反应。大量的研究，包括患者IL-10的表达分析、体外实验及动物实验表明，IL-10与自身免疫
性疾病、炎症、肿瘤等疾病的发生、发展关系密切。临床试验主要集中于RA、炎症性肠病、银屑病、器官移植和丙型肝
炎等。虽然试验结果各不相同，但是使我们对IL-10在免疫反应中的作用的认识更加深入，同时也预示IL-10可以成为一
种治疗药物。目前，我国还没有重组基因工程IL-10药物上市，而且在探索如何高效表达具有生物活性rhIL-10的研究尚
处于起步阶段。本研究建立在国内外IL-10重组基因工程研究基础上，拟克隆人IL-10基因，通过原核、真核两种表达系
统表达IL-10蛋白，奠定重组基因工程研制人IL-10的基础。主要研究结果如下：一、依据Genbank中人类IL-10序列设计
一对特异性引物，应用RT-PCR技术，从LPS刺激的外周血单个核细胞中成功地克隆出hIL-10成熟肽编码序列，并将之克
隆入pGEM-T载体，构建出中间载体<WP=91>pGEM-T-hIL-10，转化入大肠杆菌JM109中，经酶切鉴定及序列测定与
分析，与GenBank中发表的（NM000572.2）hIL-10成熟肽编码序列完全一致。为hIL-10基因的表达研究奠定了基
础。二、从中间载体pGEM-T-hIL-10中将hIL-10成熟肽编码序列酶切回收，定向克隆至原核表达载体pET-28a(+)的T7
启动子下游，成功地构建了原核表达载体pET-28a(+)-hIL-10，将表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)pLyss中获得表达
菌株，经IPTG的诱导获得较高表达，表达蛋白以包涵体形式存在。经薄层扫描确定目的蛋白表达量占菌体总蛋白的
28.7%。Westernblotting分析结果显示，表达产物与抗hIL-10单克隆抗体呈特异性阳性反应。产物经固相金属离子亲
和层析方法初步纯化，并在柱上应用浓度递减的尿素缓冲液对产物进行复性。活性研究结果表明，复性产物具有抑制
LPS刺激的外周血单核细胞表达MHCⅡ分子的活性。三、为了进一步获得高活性、高表达、适用于产业化生产的rhIL-
10，本研究选择应用酵母表达系统对hIL-10进行表达。应用PCR方法从pGEM-T-hIL-10扩增出hIL-10成熟肽编码序
列，并在其上下游分别引入EcoRI和BaxⅠ两个酶切位点，通过定向克隆成功地构建出分泌型酵母表达载体pPICZαA-
rhIL-10。采用电穿孔技术将表达单位转化入酵母菌P.pastorisX-33中，通过提取酵母基因组进行PCR鉴定以及
MD/MM营养表型筛选，初步筛选出10株可表达具有hIL-10活性的酵母菌。小量发酵培养表达菌株，以0.5%甲醇诱导
96小时，培养上清中蛋白经硫酸铵沉淀后，经SDS-PAGE、薄层扫描显示rhIL-10约占样品蛋白总量的10%。产物经固
相金属离子亲和层析方法初步纯化，纯度达94%。活性研究结果显示酵母表达的分泌型rhIL-10具有较原核表达产物更高
的活性。
全长ORF克隆常见问题解答123
快乐分享2021-09-07
由cDNA全长怎么得到DNA全长? 分子生物 PCR相关 论坛...123
liuhua2021-09-05
mRNA模板经反转录酶催化体外反转录cDNA步骤应该与DNA复制程类似需要原料mRNA模板四脱氧核糖核苷酸逆转录酶能量注意：获DNA片段含非编码区序列专业答).构建cDNA文库：物细胞总mRNA模板用反转录酶合互补双链cDNA接载体转入宿主建立基文库cDNA文库1、mRNA提取及其完整性确定1）总RNA提取RNA提取：APGC或NP-40或应用试剂盒提取总RNA2）mRNA离高等真核物mRNA3'端均poly(A)尾总RNA通寡聚（DT）纤维柱离mRNA或利用磁珠制备纯mRNA某些情况裂解细胞用蔗糖梯度制备mRNA-核糖体复合物作提取mRNA替换途径3）mRNA纯化①按照总mRNA进行级主要用琼脂糖凝胶电泳蔗糖密度梯度离进行级；②聚核糖体免疫纯化利用抗体纯化合目肽4）mRNA完整性确定确定mRNA完整性三种：①直接检测mRNA；②测定mRNA转译能力；③检测总mRNA指导合cDNA第链能力2、cDNA合克隆1）cDNA第链合用亲层析mRNA根据mRNA3'端poly(A)尾结构原理用12~20核苷酸oligo（dT）与纯化mRNA混合oligo（dT）与poly(A)结合作反转录酶引物反转录反应产物条RNA-DNA杂交链oligo（dT）结合mRNA3'端合全cDNA需要反转录酶mRNA端移另端种全合难达尤其mRNA链建立种随机引物合cDNA随机引物种度6~10核苷酸由4种碱基随机组DNA片段与oligo（dT）仅与mRNA3'端结合同mRNA同位点结合随机引物合产物RNA-DNA杂交体cDNA克隆载体前必须种杂交体RNA转变DNA链即形双链DNA2）.双链cDNA合合cDNA第二条链两种种利用cDNA第链3'末端现发夹环特征种发夹结构反转录酶第链末端返折并且进行复制第链结合cDNA第二链提供用引物用种合双链cDNA端发夹环用单链特异S1核酸酶切S1核酸酶处理修剪cDNA顺序使cDNA丢失mRNA5'端部顺序另种用肠杆菌RNaseH进行修饰RNaseH能识别RNA-DNA杂交并其RNA切割短片段些RNA短片段仍与cDNA第链结合新合DNA所取代新合DNA存切口用DNA连接酶些切口连接起形条完整DNA链RNaseH优于S1核酸酶能获包括mRNA5'端全部或绝部更顺序cDNA3）cDNA重组载体合cDNA与载体DNA进行连接般3种：①借助于末端转移酶3'-OH端合均聚物能力双链cDNA线性化载体DNA3'-OH端别加均聚核苷酸链；②双链cDNA线性化载体DNA别用Klenow片段进行末端补平用T4DNA连接酶进行齐连接形重组体；③通粘性末端连接4）.转化重组载体DNA定条件转化入肠杆菌形携带质粒菌株同重组DNA含同cDNA基整转化含自mRNA群体各种cDNA基转化群体构该mRNA全部遗传信息cDNA基文库5）.目cDNA克隆鉴定用于cDNA文库筛选鉴定目cDNA主要3种：①核酸杂交②免疫杂交检测③cDNA同胞选择
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