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NEB/NEB® 5-alpha Competent E. coli (Subcloning Efficiency)/C2988J/6 x 0.4 ml/tube
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Description:
ChemicallycompetentE.colicellssuitableforsubcloningefficiencytransformations,suchasplasmidtransformationorroutinesubcloning(e.g,.insertinga1kbfragmentintoa2kbvector).Theefficiencyofthesecellsisnotsufficientlyhighformostothercloningapplications.Forthat,werecommendNEB®5-alphaCompetentE.coli(HighEfficiency)(NEB#C2987)whichhas1,000-foldhighertransformationefficiency.Highlights
- ActivityofnonspecificendonucleaseI(endA1)eliminatedforhighestqualityplasmidpreparations
- Transformationefficiency>1x106cfu/µgpUC19DNA
- EfficienttransformationofunmethylatedDNAderivedfromPCR,CDNAandmanyothersources(hsdR)
- ReducedrecombinationofclonedDNA(recA1)
- ResistancetophageT1(fhuA2)
- Suitableforblue/whitescreeningbyα-complementationoftheβ-galactosidasegene
- K12Strain
- DH5α™derivative
- Freeofanimalproducts
Genotype
fhuA2Δ(argF-lacZ)U169phoAglnV44Φ80Δ(lacZ)M15gyrA96recA1relA1endA1thi-1hsdR17蚂蚁淘电商平台
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价； 报价单与合同可以直接在线生成或打印；就像在京东购物一样， 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购，订单详情会告诉您所有进程。
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2021-09-07
多元实时 PCR 时，在一个反应管中加入不同标记的成对引物，从而可以同时分析多个不同的基因。在许多反应中，用 JOE 标记看家基因对模板定量，用 FAM 标记目的基因,证明 LUX 引物非常有效。在标准的多元体系中，使用的引物浓度和加入的体积与进行一元反应时相同，如下。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2018-11-27
IMMUNOSTEP公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2021-09-05
许多真核生物的基因所包含的 DNA，远非单个重组子所能容纳得了的。对于大多数染色体来说，更是如此。因此，必须构建一套重叠的 DNA 克隆，这些克隆的 DNA 按次序排列能形成叠连序列（叠连群），可以涵盖一个很大的基因或目的区域。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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2018-12-26
Easy Subcloningby Michael KoelleSubcloning should be easy and fast, and work every time. The following protocols minimize the number of manipulations required 查看更多
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2018-11-27
ImmunoChemistry Technologies公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2018-08-07
尽管整合性转化的频率很低，但可以通过与整合位点同源的克隆化基因内的限制性位点将质粒线性化以提高转化效率。得到的整合体含有完整的质粒，两侧为基因的完整拷贝。 查看更多
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2021-08-01
TA克隆 系统由Invitrogen公司（San Diego，CA）发展而来的商业性试剂盒，它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点（MCS）中。 查看更多
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2021-07-22
PCR扩增产物的克隆可以：（1）获得目的DNA片段；（2）用于原核表达的研究；（3）广泛应用于分子生物学相关研究。 查看更多
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2021-08-24
当有大量的样本，多个微卫星标记需要分型时，需要本单元描述的分型方法。例如，用全基因缉的方法做一个疾病的连锁分析研究，需要在 500 个个体里检测 300 个标记，这样就要 150000 次基因分型。本单元描述的技术是用 Perkin-Elmer 的自动 DAN 测序系统，但也可以修改用于其他的自动荧光测序系统。 查看更多
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2018-12-26
The following protocol is designed for subcloning inserts (I) from one vector into another vector (V). The inserts can be anywhere from 30 bp to 8 kb (possibly 查看更多
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2018-11-28
Athena Enzyme Systems公司产品介绍【代理商代购现货】 查看更多
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2021-09-13
本单元所讲的是用来诊断营养不良基因缺失的一种多重 PCR 方法。许多缺失末端能被确定，依据翻译可读框的结果来预测疾病（如 DMD 与 BMD) 的严重程度。 查看更多
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常见问题
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克隆基因总克隆不出,为什么 123
鬼鬼令尊丶囧傤2017-11-01
高等物基组克隆完整基 真核物与原核物启同且真核物基通间隔基即外显内含相间排列真核物完整基直接转入肠杆菌没用相应启能启mRNA转录且内含能确剪切
【求助】克隆基因要转到真核作表达,模板的选择问题, ,希望大家多多...123
无双蛛蛛2021-08-30
大家好，小人是一只小小菜鸟，做实验遇到了很大的问题，希望大家伸出友爱之手，帮帮痛苦中的我
我要克隆一个基因，这个基因有3个外显子，然后和质粒相连，重组载体，转到真核细胞中做表达，我用基因组DNA做模板，请问这么做可以吗，有人做过类似的实验吗？
请大家帮帮忙，本人毕业在即，谢谢大家
我要克隆一个基因，这个基因有3个外显子，然后和质粒相连，重组载体，转到真核细胞中做表达，我用基因组DNA做模板，请问这么做可以吗，有人做过类似的实验吗？
请大家帮帮忙，本人毕业在即，谢谢大家
【求助】如何克隆启动子 经验共享 123
drcrc2021-08-24
打算克隆某个基因的启动子，基因5‘端上游基因组序列，在pubmed里能查到。
是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了？
是不是只要从细胞里面提取基因组DNA,然后按照pubmed上的5端上游序列做一个PCR就可以了？
DNA拓扑异构酶概述123
0864181662017-11-07
依托泊苷，抑制有丝分裂，属于细胞周期特异性药物，使细胞分裂停止于S期或G2期，此方案应先用VP-16，后顺铂:VP-16的作用靶点是DNA拓扑异构酶Ⅱ。顺铂属于细胞周期非特异性药物
【原创】荧光原位杂交(FISH)探针的制备及其应用 核酸基因技术 丁香 ...123
issacfish2021-08-22
最近有一些战友对荧光原位杂交技术比较感兴趣，我整理了相关资料和自己的心得，和大家交流一下。不妥之处，请大家指出，共同讨论学习。
内容发布在蚂蚁淘和螺旋网上，有兴趣的战友也可以去那里看一下。
内容分三部分：
一、概述
1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征
2、染色体异常常见的类型
3、染色体异常的检测方法
二、荧光原位杂交及其探针
1、荧光原位杂交的原理
2、荧光原位杂交的探针
三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交（按试验流程介绍）
:D
FISH.pdf(1237.91k)
内容发布在蚂蚁淘和螺旋网上，有兴趣的战友也可以去那里看一下。
内容分三部分：
一、概述
1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征
2、染色体异常常见的类型
3、染色体异常的检测方法
二、荧光原位杂交及其探针
1、荧光原位杂交的原理
2、荧光原位杂交的探针
三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交（按试验流程介绍）
:D
FISH.pdf(1237.91k)
2011年7月03179生物化学(三)自考真题及答案自考生网123
huangrrxx2021-08-20
[题目]JTopoisomeraseI-DNAcomplexescontributetoarsenictrioxide-inducedapoptosis.
[日期]BiolChem.2004Jun3
[作者]SordetO,LiaoZ,LiuH,AntonyS,StevensEV,KohlhagenG,FuH,PommierY.
[单位]NCI,NIH,Bethesda,MD20892.
[摘要]TopoisomeraseIisanessentialenzymethatrelaxesDNAsupercoilingbyformingcovalentDNAcleavagecomplexes,whicharenormallytransient.TopoisomeraseI-DNAcomplexescanbetrappedbyanticancerdrugs(camptothecins),aswellasbyendogenousandexogenousDNAlesions.Weshowherethatarsenictrioxide(apotentinducerofapoptosisthatinducestheintracellularaccumulationofreactiveoxygenspeciesandtargetsmitochondria)inducescellulartopoisomeraseIcleavagecomplexes.Bcl-2overexpressionandquenchingofreactiveoxygenspecies,whichpreventarsenictrioxide-inducedapoptosis,alsopreventtheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes,whereasenhancementofreactiveoxygenspeciesaccumulationpromotesthesecomplexes.Thecaspaseinhibitor,z-VADpartiallypreventsarsenictrioxide-inducedtopoisomeraseI-DNAcomplexesandapoptosis,suggestingthatactivatedcaspasesfurthermaintainintracellularlevelsofreactiveoxygenspeciesthatinducetheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes.DownregulationoftopoisomeraseIexpressiondecreasesarsenictrioxide-inducedapoptoticDNAfragmentation.Thus,weproposethatarsenictrioxideinducestopoisomeraseI-DNAcomplexesthatparticipateinchromatinfragmentationandprogrammedcelldeathduringapoptosis.
[翻译]拓扑异构酶I是一种很重要的酶，可以作用于DNA,与之形成短暂的DNA共价物，使DNA超螺旋结构解开。抗癌药物如喜树碱，以及内源性和外源性的DNA损伤剂可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物形成。我们研究发现三氧化二砷（细胞凋亡诱导剂，能诱导细胞内活性氧和线粒体增多）可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物的形成Bcl-2表达增加和活性氧的消失提示Bcl-2可以预防三氧化二砷引起的细胞凋亡以及防止拓扑异构酶I–DNA复合物形成，z-VAD不仅是caspases的抑制剂，也可以防止拓扑异构酶I–DNA复合物的形成，他的作用说明拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很有可能是通过激活caspases导致细胞内活性氧的含量进一步升高。拓扑异构酶I表达下调会降低三氧化二砷诱导的细胞小体的生成，因此，我们推测三氧化二砷诱导的拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很可能导致染色体的断裂和程序化细胞死亡。
[点评]一直以来，我们发现三氧化二砷可以用来治疗白血病，但对于它为什么能用来治疗白血病我们一直不太清楚它的机制，对于三氧化二砷的毒理研究目前是热点。希望通过本摘要的翻译，引起大家对毒物的机制研究的兴趣。
[日期]BiolChem.2004Jun3
[作者]SordetO,LiaoZ,LiuH,AntonyS,StevensEV,KohlhagenG,FuH,PommierY.
[单位]NCI,NIH,Bethesda,MD20892.
[摘要]TopoisomeraseIisanessentialenzymethatrelaxesDNAsupercoilingbyformingcovalentDNAcleavagecomplexes,whicharenormallytransient.TopoisomeraseI-DNAcomplexescanbetrappedbyanticancerdrugs(camptothecins),aswellasbyendogenousandexogenousDNAlesions.Weshowherethatarsenictrioxide(apotentinducerofapoptosisthatinducestheintracellularaccumulationofreactiveoxygenspeciesandtargetsmitochondria)inducescellulartopoisomeraseIcleavagecomplexes.Bcl-2overexpressionandquenchingofreactiveoxygenspecies,whichpreventarsenictrioxide-inducedapoptosis,alsopreventtheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes,whereasenhancementofreactiveoxygenspeciesaccumulationpromotesthesecomplexes.Thecaspaseinhibitor,z-VADpartiallypreventsarsenictrioxide-inducedtopoisomeraseI-DNAcomplexesandapoptosis,suggestingthatactivatedcaspasesfurthermaintainintracellularlevelsofreactiveoxygenspeciesthatinducetheformationoftopoisomeraseI-DNAcomplexes.DownregulationoftopoisomeraseIexpressiondecreasesarsenictrioxide-inducedapoptoticDNAfragmentation.Thus,weproposethatarsenictrioxideinducestopoisomeraseI-DNAcomplexesthatparticipateinchromatinfragmentationandprogrammedcelldeathduringapoptosis.
[翻译]拓扑异构酶I是一种很重要的酶，可以作用于DNA,与之形成短暂的DNA共价物，使DNA超螺旋结构解开。抗癌药物如喜树碱，以及内源性和外源性的DNA损伤剂可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物形成。我们研究发现三氧化二砷（细胞凋亡诱导剂，能诱导细胞内活性氧和线粒体增多）可诱导拓扑异构酶I–DNA复合物的形成Bcl-2表达增加和活性氧的消失提示Bcl-2可以预防三氧化二砷引起的细胞凋亡以及防止拓扑异构酶I–DNA复合物形成，z-VAD不仅是caspases的抑制剂，也可以防止拓扑异构酶I–DNA复合物的形成，他的作用说明拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很有可能是通过激活caspases导致细胞内活性氧的含量进一步升高。拓扑异构酶I表达下调会降低三氧化二砷诱导的细胞小体的生成，因此，我们推测三氧化二砷诱导的拓扑异构酶I–DNA复合物的形成很可能导致染色体的断裂和程序化细胞死亡。
[点评]一直以来，我们发现三氧化二砷可以用来治疗白血病，但对于它为什么能用来治疗白血病我们一直不太清楚它的机制，对于三氧化二砷的毒理研究目前是热点。希望通过本摘要的翻译，引起大家对毒物的机制研究的兴趣。
【求助】请问有人用过链霉素抗性的质粒来克隆基因,表达蛋白吗？_...123
mofatuzi2021-08-21
链霉素抗性的载体好用吗？和氨卞，卡纳（pet32a,28a）比怎样？用来表达蛋白效率高吗？
我想用一个链霉素抗性的载体pCDFDuet™和一个卡纳pet28a或者氨卞pet32a的载体共转化入表达菌株rosetta。有什么可能的问题吗？
我想用一个链霉素抗性的载体pCDFDuet™和一个卡纳pet28a或者氨卞pet32a的载体共转化入表达菌株rosetta。有什么可能的问题吗？
第九章目的基因的克隆 123
aisqz2021-08-02
目基克隆利用单基副本行pcr凝胶电泳色谱琼脂糖凝胶电泳质粒等
目基表达基工程叙述~
目基表达基工程叙述~
苏州大学医学院到底怎么样123
wjy_09122021-09-03
最近克隆了一个基因，想对其进行染色体定位，由于种种原因，自己实验室难以尽快完成实验。浙大有几位高年级师兄师姐都是到苏州做的，我想联系苏州大学医学院同行，帮助提供点负责人联系信息，本人将感激不尽！先谢了。
我的信箱：wjy_0912@hotmail.com
我的信箱：wjy_0912@hotmail.com
克隆新基因(cDNA)的几种常用方法123
2021-08-10
何鉴定克隆新基调亡相关基
【求助】我这样克隆基因是否可以写进文章中 PCR技术讨论版...123
实验狂人20132013-12-10
基因克隆的流程 实验方法123
罪恶王冠4dN2017-11-07
选择目基,并设计相应引物；
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
用引物PCR扩增目基片段；
选择合适（抗性标记、酶切位点等）克隆载体（保真扩增）,并PCR片段连接入克隆载体；（般用Taq酶PCR产物末尾自带A,Solution 1作用与两端各带T线性T载体直接相连）
连接产物转化入受态肠杆菌,使含抗素培养基扩增；
肠杆菌提取质粒（即前面连接产物）,酶切鉴定测序鉴定均误目基片段切并与新表达载体连接,再转化入肠杆菌扩增,再提质粒,即想要目基片段克隆.
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