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实验方法原理MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA,未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变,然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳,凝胶扫描观察分析结果。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 在50μl体系中,DNA(2~5μg)经NaOH(终浓度值0.2mol/L)在37℃变性10Min。

2. 对于ng级别的人基因组DNA,在进行修饰前加入2μg蛙鱼精DNA为载体

3. 加入30μl刚配制好的10mmo/L氢醌与520/1的40.5%亚硫酸氢钠混匀。

4. 然后用石蜡油隔绝空气的条件下,避光在50%温育16h。

5. 修饰后的DNA过WizerdDNA纯化柱,用50/1L水洗脱。

6. 室温下用NaOH(终浓度为0.3mol/L)修饰5min,之后用乙醇沉淀。

7. DNA溶于20μl水中,立即使用或在-20℃保存。
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