医疗器械第三类经营范围是什么啊?
| 试剂、试剂盒 | ddH20Vent缓冲液VentDNA聚合酶dNTP质粒DNAPCR引物 仪器、耗材 | 琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备热循环仪 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液、溶液和试剂 ddH20 2.酶和酶缓冲液 10XVent缓冲液 VentDNA聚合酶 3.核酸和寡核苷酸 dNTP，各20mmol/L PCR引物，可以与基因组DNA文库克隆位点两侧的载体序列退火 质粒DNA(见下面第1步） 4.特殊设备 琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备，包括溴化乙锭(见第5步） 热循环仪 二、方法 1.在细菌中扩增后，用基因组文库制备的质粒DNA建立下列反应。 10~50ng的质粒DNA 50pmol的各引物 5ul的10XVent缓冲液 dATP、dCTP、dTTP和dGTP,各0.5ul 1U的VentDNA聚合酶 用ddH20定容至50ul 对下面的每种质粒载体应该分别进行反应： 表达载体，没有文库DNA插入 基因组DNA文库的混合物 少量DNA,由基因组DNA文库的单个细菌克隆制备 2.在一个热循环仪中，94°C将混合物预热20s。 3.按下面的参数进行30轮PCR循环。 94°C15s 55°C10s(或用引物的合适退火温度） 72°C40s 将最后一次循环的延伸时间延长至60s。 4.冷却至4C。 5.取25ul的各反应产物，跑4%的琼脂糖凝胶电泳，并用溴化乙锭染色分析（SambrookandRussell2001) 三、分析 在图26-6所示的例子中，对文库混合物进行PCR分析，其中用的引物是PmlⅠ位点的侧翼序列，结果显示，文库中含有目的大小的插入片段，但有大量的原始载体的污染[图26-6(a),第2泳道]。从文库中选择单个克隆进行PCR分析，验证了用文库混合物做模板的结果，显示文库中的原始载体大约占40%[所分析的24个克隆中有10个，图26-6(a),第3~26泳道]。为了提高文库的质量，用PmlⅠ酶消化文库，然后在细菌中重新进行扩增，以减少原始载体的污染。对文库混合物进行PCR分析显示，用PmlⅠ消化后，无插入的环状载体的污染大大减少了[图26-6(b),第2泳道和第3泳道]。用PmlⅠ消化又重新在细菌中扩增后，在文库中随机选择单个克隆进行PCR分析，证实无插入DNA的出现频率比原始文库大大降低[20个克隆中有0个，小于5%，图26-6(b),第4~23泳道]，并且克隆中含有预计大小的插入片段。对基因组片段文库中的克隆进行DNA序列分析显示，文库中含有预计大小的人类基因组DNA片段（数据没有列出）。因此，PCR提供了一个快速、敏感和方便的方法，来分析原始的和改善过的文库。  |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-06
阅读（242）
▍
相关分类
▍
相关文章
International Furan Chemicals B.v.进口数据及联系方式
研究发现肿瘤血管新生的新分子标记Apj资讯
oz biosciencesoz biosciences|产品资讯
PCR扩增产物的克隆——平端连接法
重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 实验方法
抗透明带抗体（ZP）ELISA试剂盒_BIOSERV，抗透明带 ...
小鼠可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒科研专用
大鼠基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP8)ELISA试剂盒说明书
Alexa Fluor 488标记的兔抗鸡IgG_上海士锋生物科技有限公司
PCR扩增产物的克隆一TA克隆法_克隆基因_克隆和表达_分子类_蚂...
聚丙烯酰胺凝胶电泳分析斯氏狸殖吸虫幼虫和成虫抗原下载_在线...
多元实时 PCR 实验 经验交流列表
▍
相关问答
