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5.2.2乙二醛/DMSO变性琼脂糖凝胶电泳

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在微酸的条件下，乙二醛的两个乙醛基与鸟苷的亚氨基相互作用形成环状化合物，抑制了链间 Watson-Crick 键的形成，使 RNA不能形成稳定的二级结构,它在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率与其大小的对数成正比。试剂、试剂盒10XBPTE 电泳缓冲液二甲基亚砜（DMSO)去离子乙二醛乙一醛反府混合液上样缓冲液仪器、耗材水平电泳装置实验步骤(一）村料与设备1)10XBPTE 电泳缓冲液：100 mmol/LPIPES，300 mmol/LTris，lOmmol/LEDTA(pH8.0)2) 二甲基亚砜（DMSO)3) 去离子乙二醛4) 乙一醛反府混合液：6 mlDMSO,2 ml 去离子乙二醛,2 mL10XBPTE 电泳缓冲液，0.6 ml80% 甘油,0.2 ml 溴化乙锭（10 mg/ml)5) 上样缓冲液:50% 甘油.10 mmol/L 磷酸钠 (PH7.0),0.25% 溴酚蓝，0.25% 二甲苯青6) 水平电泳装置(二）操作方法1) 制备凝胶：用 1XBPTE 电泳缓冲液配制 1.2% 的琼脂糖凝胶2) 电泳：向 1〜2ulRNA 样品 (总共 10ug）中加入 10ul 乙二醛反应混合液，55℃ 保温lh，冰浴 10 min, 离心，加入 1〜2ul 上样缓冲液，立即上样电泳，用 1XBPTE 作电泳缓冲液，在 60℃ 恒压下电泳，当溴酚蓝迁移至 1/2〜2/3 时，停止电泳。3) 观察结果：在紫外灯下观察结果

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发布于： 2018-08-03 阅读（201）

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