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| 实验方法原理 | 当“三明治”结构中的滤纸浸透缓冲液时，半干印迹转移设备能将蛋白质从凝胶转移到膜上。和槽式印迹转移设备相比，半干印迹只用较少的缓冲液；因为电极板靠得很近，故转移时只要求较低的电压。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 含有蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 | 转移缓冲液 仪器、耗材 | 印迹纸支持性纤维素膜或PVDF膜电源半干转移设备 实验步骤 | 1.测量SDS-PAGE凝胶的尺寸，将转移膜与6层印迹纸剪切成与凝胶同样大小。 2.用水湿润膜或用甲醇湿润PVDF膜，缓慢操作，以避免膜不平整或在膜下产生气泡。 3.将湿润的膜转移到盛有转移缓冲液的平皿中，让其在缓冲液中平衡5min。 4.将印迹纸、膜与凝胶排列成「三明治」状，要避免产生气泡，因为气泡会阻止蛋白质的转移。最好按照以下方法操作： （1）印迹纸和B吴要用转移缓冲液湿润，滚动玻璃棒来赶走气泡。 （2）将转移膜放在印迹纸表面。 （3）将凝胶放在膜上，注意一开始应将凝胶放在准确的位置，在膜上移动凝胶通常可能引起污迹；滚动玻璃棒除去膜与凝胶之间的气泡。 （4）再用缓冲液湿润三层印迹纸，将其放在凝胶上，滚动玻璃棒以赶走气泡。 （5）将电极连接好。 在电泳期间，蛋白质将从负极（黑色）迁移到正极（红色）。 5.按照操作说明所建议的时间与电流进行转膜。 6.转膜完成后，关掉电源，去掉盖子。 7.取出转移膜，去掉印迹纸，用软铅笔标记膜对着凝胶的一面。 不能用钢笔或记号笔，因为墨水会溶解在膜的转移缓冲液中。 8.对印迹膜进行染色处理（参见方案17~20)，或将膜干燥保存在两层印迹纸之间，置于暗处。 保存的膜在染色前，应用水重新湿润硝酸纤维素薄膜或用甲醇湿润PVDF膜。 |
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发布于 ： 2021-09-05
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