| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 523/617 |
| MW | 883.98 |
| CAS# | N/A |
| Solvent | DMSO |
| Storage | F/D/L |
| Category | SuperiorLabelingDyes mFluor™DyesandKits |
| Related | Generalproteins LabelingviaAminoGroups BiochemicalAssays |
| Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
1. Prepareproteinstocksolution(SolutionA):
a. Mix100µLofareactionbuffer(e.g.,1Msodiumcarbonatesolutionor1MphosphatebufferwithpH~9.0)with900µLofthetargetproteinsolution(e.g.antibody,proteinconcentration>2mg/mlifpossible)togive1mLproteinlabelingstocksolution.
b. Note1:ThepHoftheproteinsolution(SolutionA)shouldbe8.5±0.5.IfthepHoftheproteinsolutionislowerthan8.0,adjustthepHtotherangeof8.0-9.0using1Msodiumbicarbonatesolutionor1MpH9.0phosphatebuffer.
c. Note2:Theproteinshouldbedissolvedin1Xphosphatebufferedsaline(PBS),pH7.2-7.4.IftheproteinisdissolvedinTrisorglycinebuffer,itmustbedialyzedagainst1XPBS,pH7.2-7.4,toremovefreeaminesorammoniumsalts(suchasammoniumsulfateandammoniumacetate)thatarewidelyusedforproteinprecipitation.
d. Note3:ImpureantibodiesorantibodiesstABIlizedwithbovineserumalbumin(BSA)orgelatinwillnotbelabeledwell.Thepresenceofsodiumazideorthimerosalmightalsointerferewiththeconjugationreaction.Sodiumazideorthimerosalcanberemovedbydialysisorspincolumnforoptimallabelingresults.
e. Note4:Theconjugationefficiencyissignificantlyreducediftheproteinconcentrationislessthan2mg/mL.Foroptimallabelingefficiencythefinalproteinconcentrationrangeof2-10mg/mLisrecommended.
2. Preparedyestocksolution(SolutionB):
a. AddanhydrousDMSOintothevialofmFluor™dyeSEtomakea10-20mMstocksolution.Mixwellbypipettingorvortex.
b. Note:Preparethedyestocksolution(SolutionB)beforestartingtheconjugation.Usepromptly.Extendedstorageofthedyestocksolutionmayreducethedyeactivity.SolutionBcanbestoredinfreezerfortwoweekswhenkeptfromlightandmoisture.Avoidfreeze-thawcycles.
3. Determinetheoptimaldye/proteinratio(optional):
a. Note:Eachproteinrequiresdistinctdye/proteinratio,whichalsodependsonthepropertiesofdyes.Overlabelingofaproteincoulddetrimentallyaffectsitsbindingaffinitywhiletheproteinconjugatesoflowdye/proteinratiogivesreducedsensitivity.Werecommendyouexperimentallydeterminethebestdye/proteinratiobyrepeatingSteps4and5usingaserialdifferentamountoflabelingdyesolutions.Ingeneral4-6dyes/proteinarerecommendedformostofdye-proteinconjugates.
b. Use10:1molarratioofSolutionB(dye)/SolutionA(protein)asthestartingpoint:Add5µlofthedyestocksolution(SolutionB,assumingthedyestocksolutionis10mM)intothevialoftheproteinsolution(95µlofSolutionA)witheffectiveshaking.Theconcentrationoftheproteinis~0.05mMassumingtheproteinconcentrationis10mg/mLandthemolecularweightoftheproteinis~200KD.
i. Note:TheconcentrationoftheDMSOintheproteinsolutionshouldbe<10%
c. Runconjugationreaction(seeStep4below).
d. Repeat#3.2withthemolarratiosofSolutionB/SolutionAat5:1;15:1and20:1respectively.
e. Purifythedesiredconjugatesusingpremadespincolumns.
f. Calculatethedye/proteinratio(DOS)fortheabove4conjugates(seenextpage).
g. Runyourfunctionaltestsoftheabove4conjugatestodeterminethebestdye/proteinratiotoscaleupyourlabelingreaction.
4. Runconjugationreaction:
a. Addtheappropriateamountofdyestocksolution(SolutionB)intothevialoftheproteinsolution(SolutionA)witheffectiveshaking.
b. Note:ThebestmolarratioofSolutionB/SolutionisdeterminedfromStep3.6.IfStep3isskipped,werecommendtouse10:1molarratioofSolutionB(dye)/SolutionA(protein).
c. Continuetorotateorshakethereactionmixtureatroomtemperaturefor30-60minutes.
5. Purifytheconjugation
a. Thefollowingprotocolisanexampleofdye-proteinconjugatepurificationbyusingaSephadexG-25column.
b. PrepareSephadexG-25columnaccordingtothemanufactureinstruction.
c. Loadthereactionmixture(directlyfromStep4)tothetopoftheSephadexG-25column.
d. AddPBS(pH7.2-7.4)assoonasthesamplerunsjustbelowthetopresinsurface.
e. AddmorePBS(pH7.2-7.4)tothedesiredsampletocompletethecolumnpurification.Combinethefractionsthatcontainthedesireddye-proteinconjugate.
Note1:Forimmediateuse,thedye-proteinconjugateneedbedilutedwithstainingbuffer,andaliquotedformultipleuses.
Note2:Forlongertermstorage,dye-proteinconjugatesolutionneedbeconcentratedorfreezedried(seebelow).
| References&Citations |  CitationExplorer |
DeepSequencingAnalysisoftheEha-RegulatedTranscriptomeofEdwardsiellatardaFollowingAcidification
Authors:DGao,NLiu,YLi,YZhang,GLiu
Journal:Metabolomics(LosAngel)(2017):2153--0769
Suramininhibitscullin-RINGE3ubiquitinligases
Authors:KennethWu,RobertAChong,QingYu,JinBai,DonaldESpratt,KevinChing,ChanLee,HaibinMiao,IngerTappin,JerardHurwitz
Journal:ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences(2016):E2011--E2018
GlycosaminoglycanmimicrybyCOAMreducesmelanomagrowththroughchemokineinductionandfunction
Authors:HelenePiccard,NeleBerghmans,EvaKorpos,ChrisDillen,IlseVanAelst,SandraLi,ErikMartens,SandraLiekens,SamNoppen,JoVanDamme
Journal:InternationalJournalofCancer(2012):E425--E436
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
1）我们提供反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；2）我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。3）我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；4）我们致力于开发用于信号转导研究的试剂；5）我们提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品，同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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荧光燃料使用的问题有两个：
一个就是迁移性，使用时要严格控制用量，以避免产生迁移现象；
二是荧光染料使用有一个极限值，如果超量使用，导致荧光线被吸收，使吸收和发光成叠所致。
我想用共聚焦观察间期染色体，用涂染探针，有一个问题很困扰我，我想涂染完染色后用DAPI复染细胞核，但是目前哈尔滨的共聚焦都没有紫外激发光，不能激发DAPI，我怎么才能实现，用红色涂一条染色体，用绿色涂另一条，用DAPI蓝色染核，同时成像呢，所说的双光子显微镜可以么？我实在很迷惑，求求版主别再删我的帖子，尽管我现在只是一个索取者，还不能给大家提供有用的信息，但是相信有一天会为大家做贡献的，谢谢了
希望同路人多多交流啊!
然后是碱性荧光染料，造纸厂用来增加纸的亮度。
直接和分散的荧光黄，印染厂用来增加棉质和化纤面料的艳度
随着免疫荧光技术的不断发展，荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前，市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(Biotium,USA);AlexaFluor®系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。
一、CFTM系列染料的核心对比AlexaFluor®系列具有以下几点优势：
1、新型罗丹明核心
罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。因此很多AlexaFluor®染料具有罗丹明核心结构，但是，传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸至远红外区域甚至是更具挑战性的近红外区域，而且生物偶联后其水溶性并不理想。Biotium科学家发现从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的新型化学方法。该方法被有效的应用于CF染料的产品中，尤其是远红外CF染料，而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐光性极好。
2、特异性高的近红外染料
近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多，大滴的染料常会导致染料水溶性低、染料聚合体多、荧光量子产量差等问题。为了解决这些问题，许多商用的近红外染料比如AlexaFluor®、DyLight®dyes和IRDyes®近红外染料，在制备时吸附了大量的带负电荷的磺化基团，其磺化作用可以在一定程度上会提高染料的溶解性和荧光性，但这样也带来了另一些更加严重的问题，经这种染料标记的生物耦联物的非特异性结合。Biotium的科学家用**性的方法设计出近红外染料CF，在避免引入大量负电荷的情况下，极大的保证了染料优异的理化特性。Biotium近红外的CF染料以花青或罗丹明染料为核心结构，该核心结构的特殊化学修饰限制了染料的分子内位移，从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。因此，近红外CF染料比其他近红外染料荧光强度更高，光稳定性好。最重要的是，在免疫印迹实验上应用近红外CF染料标记蛋白质样品相对于其他商业用近红外染料制备的抗体偶联物，最大限度的提高了信噪比。
3、优异的标记效率
生物偶联后的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终致染料结合效率低下。像AlexaFluor®dyes,DyLight™dyesandIRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。所有Biotium的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型，这比大部分AlexaFluor染料的SE更耐水解。总体来说，CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率，提供给用户更好的使用价值。
二、选择方案：
1、蓝色（350-450nm处激发）
CF350、AlexaFluor350、AMCA等----亮蓝和紫外光激发。
CF350是类似于AlexaFluor350和传统荧光染料AMCA的蓝色荧光染料，CF350的荧光强度高于AlexaFluor350、AMCA，吸附在蛋白上的荧光超过50%，水溶性更好，耐光性非常优秀亮，更容易与现有的绿色荧光基团区分。
CF405S/CF405M、AlexaFluor405----近乎完美的匹配蓝色二极管激光器。
CF405S/CF405M、AlexaFluor405与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm;谱线的蓝色二极管激光器完美的匹配。在流式细胞仪上的分析结果显示CF405S/CF405M荧光信号强度高于AlexaFluor405染料1.7倍。
2、绿色（488nm处激发）
CF488A、AlexaFluor488、FITC、FAM、DyLight488、Cy2等----针对488nm氩离子激光器的绿色荧光染料。
以上染料其标记的抗体蛋白适用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪，流式细胞仪的FL1通道检测，或者可用于荧光显微镜技术。
CF488A最低限度的带电量降低了与抗体耦联物的非特异性结合，在红色通道溢出少于AlexaFluor488，耐光性好、水溶性好和pH不敏感，良好的稳定性和活性染料的标记率。
AlexaFluor488在较宽的PH值范围内保持稳定（PH4~10）；
FITC激发波长488nm，最大发射波长525nm，缺点：荧光强度易受PH值影响，PH值降低时其荧光强度减弱。
3、橙红色（543-555nm处激发）
CF543、AlexaFluor546、ATTO550,Cy3,DyLight549,Rhodamine(TRITC)匹配543nm的橙色荧光染料；
CF™543荧光条带明亮，耐光，水溶性好，确保了CF543染料与抗体的耦联物保持优异的水溶性，为该波段最亮的橙色荧光染料。例如：同等的标记程度下，CF543标记的羊抗鼠IgG抗体的亮度高于用AlexaFluor546标记的2~10倍。
CF555、AlexaFluor555、Tetramethylrhodamine(TAMRA)等匹配Cy3滤光片的橙色荧光染料。
4、红色（568-594nm处激发）
CF568、AlexaFluor®568,ATTO565,RhodamineRed等568nm处红色荧光染料。
CF568染料耐光性最好；高效水溶性；比AlexaFluor568标记的抗体亮度更亮。
CF594、AlexaFluor®594,ATTO™594,DyLight™594,TexasRed等最亮红色荧光染料。
CF594由于其高量子产量和优异的水溶性而比AlexaFluor594明亮2~4倍。同时CF594对光极其稳定，使它能被理想地应用于诸如共聚焦显微镜和单分子显像条件苛刻的应用中去。
5、远红外（620-660nm处激发）
CF620R、LightCyclerRed640等620nm处。
CF™620R是以红色荧光染料罗若丹（rhodamine）为基础的远红外的荧光染料，该染料有高荧光亮度和极度的耐光性。它的吸收和发射光谱为617和639nm，该染料能被用于荧光能量共振转移中高能量的接收者，或者在激发和发射窗口能和该染料的光谱特性匹配的条件下，被应用于多色检测中的最高荧光量采集。染料的卓越的水溶性有利于生物耦合在水介质中，更好的保持耦联物的生物特异性结合。
CF633、AlexaFluor633,AlexaFluor647,Cy5,DyLight633,DyLight649等633/635nm激光线的最佳染料荧光染料。
CF633染料的优点：当被633nm氦氖激光或635nm红色二极管激光激发时，产生最亮的抗体耦联物，光稳定性远高于AlexaFluor647，高效的水溶性。
CF640、AlexaFluor647,ATTO647N,Cy5,DyLight649等远红外荧光染料。
CF640R的优点：以红色染料罗丹明（rhodamine）为基础，吸收和发射峰类似Cy5、AlexaFluor647；但以罗丹明（rhodamine）为基础的红色染料CF640R它最大的优点就是对光稳定性，Cy5和AlexaFluor647以花青素为基础，因此有着和花青素一样的特点即耐光性较差。极好的亮度和耐光性使CF™640R被理想的用于共聚焦显微镜和单分子成像等条件苛刻的检测中。
CF647、AlexaFluor647,ATTO647N,DyLight649等远红外荧光染料。
以花青素为基础的远红外荧光染料CF647比Cy5、AlexaFluor647明亮。
CF660、AlexaFluor®660,Allophycocyanin(APC)等介于远红外近红外之间的荧光染料。
6、近红外（680-790nm处激发）
CF680R/680、AlexaFluor680,Cy5.5,IRDye680等近红外荧光染料。
CF680是高水溶性的以花青素为基础的染料，分子量大约为3000。该染料标记抗体极佳，发出最亮的荧光和在免疫染色光谱相似的染料中产生最高的信噪比。
CF680R分子量约为900，更适合标记核酸或者相对小的生物分子。CF680R是新型的以罗丹明（rhodamine）为基础的高荧光亮度,极度耐光性染料，这使它可被理想地用于共聚焦显微镜，单分子成像等条件要求苛刻的应用中。
CF750、CF™770andCF™790等近红外荧光染料。
CF750、CF770、CF790是领域内真正具有突破性的长波长的新型染料代表。其他近红外染由于受到染料聚集和稳定性差等因素的影响而导致荧光亮度有限。基于Biotium科学家研制的新型分子工程技术，近红外CF染料克服了这些问题。即使在633nm被激发，CF750也会比APC-AlexaFluor750拥有足够的亮度来在流式细胞仪检测中带来更好的信噪比，而且不存在串联染料的低稳定性等问题。另外，近红外CF染料高度水溶性，没有会增加抗体耦联物非特异性结合的过剩的负电荷，也代表了该产品的优秀性能。
荧光增白剂是一种荧光染料，也是一种复杂的有机化合物，其特性就是能产生蓝色荧光，可使肉眼看到的物质很白。
测试面膜是否含有荧光增白剂，打开面膜的包装，然后放到“ZF-C型三用紫外分析仪”下，使用紫外光照射面膜，看其是否会发出亮蓝色光，如果有，说明面膜上含有荧光剂。 如果没有紫外分析仪，可以用紫外手电筒，紫外验钞机/笔等。
含荧光剂的面膜在紫外光照射下，显现出非常大面积的亮蓝色。稍微接触面膜液体，就会粘附上荧光剂成分，拿了面膜的手，也有荧光。用清水冲洗手3遍后， 手上的荧光剂在紫外光照射下依然发出强烈的亮蓝色光，几乎没有洗掉。改用洗手液清洗3遍，照射后手上也发出蓝光，只是比清水的效果略好一些。用洗面奶清洗，与洗手液的效果差不多，都无法彻底清洗掉残留在手上的荧光...
荧光剂对人体的危害：
荧光剂不像一般化学成分那样容易被分解，而是在人体内蓄积，产生许多有害的作用，大大削减人体免疫力；荧光剂与伤口外的蛋白质结合，还会阻碍伤口的愈合；荧光剂能使人体细胞出现变异性倾向，其毒性累积在肝脏或其他重要**，会成为潜在的致癌因素。造成血液系统受损：化学物质容易污染人体血液，虽然血液具有一定的自净能力，微量的有害物质进入其中，会被稀释、分解、吸附和排出，但长期、大量的有毒物质倾注而入，必致其发生质的变化；进入血液循环，会破坏红细胞的细胞膜，引起溶血现象。
