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| 实验方法原理 | 流式细胞仪(FCM)是八十年代集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已广泛应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。 活细胞免疫荧光技术是用于FCM检测的标本准备，染色后也能在荧光显微镜下进行观察，在某些实验条件下，活细胞免疫荧光染色后的特异性和敏感性要优于滴片固定的常规间接免疫荧光的结果。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 细胞悬液 试剂、试剂盒 | 羊抗鼠荧光标记物、DPBS、洗涤液、固定液、甲醛、葡萄糖、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾 仪器、耗材 | 玻璃管、离心管、荧光显微镜、离心机 实验步骤 | 制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10％FCS RPMI1640调整细胞浓度为5×106～1×107／ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl)的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl1∶20(用DPBS 稀释)灭活正常兔血清 ↓4℃30min 用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右1000rpm×5min ↓ 弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠(或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇 ↓ 4℃30min 用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右1000rpm×5min ↓ 加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察， 视细胞浓度加入100～500μl固定液) ↓ FCM检测或制片后荧光显微镜下观察(标本在试管中可保存5～7天) 注意事项 | |
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发布于 ： 2021-08-07
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