Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义。疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。 Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。可用荧光分光光度计或荧光酶标仪读数，Ex/Em=480nm/520nm。 产品优势 相比传统的方法，如紫外吸光法（A260）、探针杂交法、Hoechst33258染料法等，PicogreendsDNAQuantitationReagent定量具有以下优势： ①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品； ②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性； ③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。 ④易于使用 只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。 ⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。 测定微量的DNA残留（如疫苗生产）；对DNA样品进行精确定量 运输和保存方法 室温运输。4℃避光干燥保存，有效期6个月。 检测步骤【以双链DNA定量检测试剂盒为例】 1、2 g/ml的CalfthymusDNAstandard浓缩液的配制 用1 TE对CalfthymusDNAstandard(100 g/ml)进行50倍稀释，即向30 lCalfthymusDNAstandard加入1.47ml1 TE混匀即可。 2、标准曲线的制备 ①比色皿体系检测（2ml） a、按照表1向一次性微量比色皿中加入TE和2 g/mlCalfthymusDNAstandard，随后加入1mlPicoGreen定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1 TE缓冲液为blank。【注】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。 表1比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表 b、于荧光仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=480nm/520nm。 【注】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。 c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值，对DNA浓度和荧光值做标准曲线。 ②微孔板体系检测（200 l） a、按照表2向96孔板中加入TE和2 g/mlCalfthymusDNAstandard，随后加入100 lPicoGreen定量试剂，混匀后，于室温避光孵育2-5min，并以1 TE缓冲液为blank。【注】：确信不要在样品中引入气泡，轻轻地弹微量检测皿的外部，可以驱散气泡。 表2酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表 b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值，Ex/Em=480nm/520nm。 【注】：为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内，应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致；为了减少光漂白，应保持所有样品的检测时间一致。 c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值，对DNA浓度和荧光值做标准曲线。 PicogreendsDNAAssayKit双链DNA（dsDNA）定量检测试剂盒
