B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白的检查实验_直接免疫荧光法
| 实验方法原理 | SmIg是B细胞的抗原识别受体，也是B细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B淋巴细胞。 | ||||||||||
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| 实验材料 | ICR小鼠 试剂、试剂盒 | 异硫氰酸荧光素（FITC）标记的兔抗小鼠Ig抗体Hank's液 仪器、耗材 | 台式离心机离心管吸管移液管 实验步骤 | 1. 采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6mlHank"s液的平皿中，用100目钢网研磨，混匀。从中吸取1ml细胞悬液放入一试管中，加满Hank"s液，离心1000rpm，10分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1ml容积，即为约1×107/ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1×107/ml的细胞悬液0.4ml加Hank"s液3.6ml，即为1×106/ml的细胞悬液。 2. 取2ml离心管两只，各加入1×106/ml的细胞悬液1ml，用台式离心机离心2000rpm，3分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100μl，另一支不加抗体作对照，置4℃冰箱30分钟。 3. 取出离心管，用Hank"s液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。 注意事项 | 一、在滴片前要彻底去除游离的抗体，以避免假阳性结果。  其他 | 一、实验结果 荧光显微镜观察，落射激发光下SmIg阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数，共计数200～300个淋巴细胞，算出其中SmIg阳性细胞的百分数。 |
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发布于 ： 2021-08-01
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