实验室通风柜排气系统介绍_「山东业创实验设备」
| 实验方法原理 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 细胞生长于含培养液的15mLFalcon管中 试剂、试剂盒 | PBSPFA固定液 仪器、耗材 | 多聚L-赖氨酸包被的载玻片 实验步骤 | 1)细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机在4℃以800g离心5min(用于淋巴细胞）。吸去培养液并以4℃的PBS重悬细胞。 离心机转速依细胞类型进行调整，但必须低转速离心，以防止损伤细胞。除非特别说明，否则所有离心步骤均在此条件下进行。 2)离心，吸去PBS，以1〜2mL2%PFA固定液，或2%PFA固定液/0.1%Triton×-100重悬细胞，置冰上固定30min。 3)离心、吸去固定液，用15mL4℃的PBS重悬细胞，放置5min,再用PBS进行第二次洗涤。使用大体积缓冲液可以减少洗涤次数。 4)第一抗体在4℃用微量离心机以13500g离心2min。250μL抗体足够用于5×106细胞。 5)离心细胞，吸去PBS，重悬细胞于第一抗体中，置4℃温育1h。 6)用4℃的PBS稀释细胞和抗体至15mL。 7)离心，吸去PBS，以4℃的PBS重悬细胞，重复1次。 8)第二抗体4℃用微量离心机以13500g离心2min。5×106细胞用250μL抗体就足够。 9)吸去PBS，以第二抗体重悬细胞，4℃温育lh。重复步骤6及步骤7。 10)除非立即观察细胞，否则在进行细胞最后浓缩的下一步操作之前应以铝箔包裹离心管并冷藏。 11)离心细胞并以少量PBS重悬（勿用水），将细胞悬液滴于多聚L-赖氨酸覆层的载玻片上，加上盖玻片，尽可能马上观察结果。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-06
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