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实验方法原理吖啶橙(AcridineOringe:AO)是一种常用荧光染料,用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色,快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小,配成2×10-4~1×10-4可用于直接染色观察法更好。
实验材料
试剂、试剂盒
实验步骤
1. 用盖片单层培养细胞,从瓶中取出后速用温Hanks液漂洗3~5秒,以去除培养基血清(于此步可进行直接染色观察活细胞);

2. 投入95%酒精或醋酸/甲醇固定15~30分钟,微干(盖片边缘接触滤纸);

3. 1%醋酸作用30秒;

4. 1×10-4吖啶橙染30秒或1分钟;

5. 0.1MCaCl2处理30秒~2分钟;

6. PBS漂洗3次,每次数秒;

7. PBS封片,荧光显微镜下直接观察并拍照。
注意事项
1. 观察中应随时填加PBS以避免标本干涸:如用油浸镜观察,需再覆以大盖片盖在附有细胞盖片上(细胞面朝上),用无荧光性油浸观察。

2. 标本在95%酒精中能保
存数日后仍可观察,如退色,再用AO染色。镜下观察,DNA呈翠绿色,RNA呈火红色。
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