
Properties:
Related Categories | 15 mL, 21 x 70 mm, Amber glass vials, Analytical/Chromatography, Precleaned Sampling Vials, Screw Thread Vials (7-22 mL), |
material | PTFE septum face |
PTFE/silicone septa (thickness: 0.125") | |
amber glass vial | |
black polypropylene cap | |
silicone septum body | |
feature | closure type black polypropylene hole cap |
closure type screw top vial |
Description:
General description
Each of the vials is cleaned according to US EPA Protocol B: The cleaning procedure is as follows:
1. Wash containers in hot water using laboratory grade non-phosphate detergent.
2. Rinse three times with copious amounts of tap water to remove detergent.
3. Rinse three times with ASTM Type I organic-free water.
4. Oven-dry containers.
5. Allow containers to cool to room temperature in an enclosed contaminant-free environment.
6. Cap the containers.
After being cleaned these vials are assembled with the following materials: Type 1 borosilicate glass, PTFE/silicone septa, and a polypropylene cap. The vials are available in either clear or amber glass. All of the vials are packaged with an open top cap and a tan/white PTFE/silicone septa.
The package of vials is shrink wrapped after cleaning to make sure that the vials arrive to you as clean as possible.
The 2-22mL vials are supplied with a Certificate of Conformity and a package of l00 labels.
Other Notes
The 2-22 mL vials are supplied with a Certificate of Conformity and a package of 100 labels.
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我要做的两个目的蛋白,分子量一个是140的,另一个是36,内参用的GAPDH。这几天刚刚要做小鼠组织的蛋白,就把新提取的组织蛋白和之前做过的细胞蛋白一起上了,细胞和组织的各上了3个孔。
电泳转膜孵育等条件都是以前做成熟的
之后显影,细胞蛋白的,两个目的和内参都出得挺好;但是小鼠的组织蛋白只有分子量140的那个显出条带了,36的那个显出来的像一片水渍一样,斑片状的黑,内参有时也这样、有时干脆什么都不显。不知道这是什么原因...按说细胞同样的蛋白做出来,WB的各个步骤应该不会有太大问题的。
有点怀疑蛋白提取的不好,我提组织蛋白的的操作是在冰上进行的,裂解液也加有PMSF,用BCA法测得的蛋白浓度大概也有3~5mg/ml。
在这里求助各位高手~望给我指点一下~不胜感激啊!
分子式:C14H22O(C2H4O)n
用途:Triton X-100是一种比较温和的去垢剂(表面活性剂或称界面活性剂),常作为添加剂使蛋白保持稳定,尤其是膜蛋白.
性质:
1.Triton X-100对细菌等微生物没有杀伤作用.
2.Triton X-100在紫外波段下有光吸收(lambda max = 275 nm and 283 nm in methanol),因此,当缓冲液中存在Triton X-100时不能通过测定280nm光吸收来进行蛋白定量.
3.Triton X-100常与CHAPS等zwitterionic 去垢剂一起使用来纯化膜蛋白,使膜蛋白保持其天然构象.
4.Triton X-100可以提高真核细胞细胞膜的通透性,因此在Immunostaining时常使用含 0.1%-0.5%Triton X-100的PBS或TBS.
5.Triton X-100非常稳定,密封避光 +2 to +8℃条件下可以长期保存.
6.Triton X-100是透明,略显粘稠,稍微发黄的液体.
7.Triton X-100的密度为1.07 g/ml,pH6.0-8.0(5%的溶液).
8.Triton X-100可以高压灭菌.
9.用Triton X-100来裂解细胞时,0.1% Triton X-100就足够了,不过,达到0.5%时也没问题.
10.蛋白酶K在含1% Triton X-100的溶液中依然保持活性.
11.可以使用Amberlite hydrophobic XAD resins and Rezorian A161 cartridges 来去除Triton X-100 .
去垢剂(又称表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质,一般具有乳化、分散、和增溶作用,可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型,中性去垢剂在蛋白提取中应用的较多.
中性去垢剂又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用.一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类,如PEG200;多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司盘类和吐温类;聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄泽类、平平加类;聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌.中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去;也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白,不必先除去去垢剂.
如要膜蛋白保持原来的结构应采用:非离子型去垢剂.
RAW细胞,6孔板,RIPA提取蛋白(提前加好PMAF),每孔100uLRIPA,冰上用tip倒过来刮细胞,放置15min,12000gX15min离心,取上清。做WB时,沸水煮5min,胶冻样物质还是存在。
操作过程中发现离心后还是有胶冻样物质,和上清混在一起无法分开,严重的时候基本上全是胶冻样物质。
这个胶冻样物质应该是DNA,园友提供的方法为用超声碎裂器,但是我们实验室没有。请问还有别的方法可以使用么?


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