Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) is ahematopoietic growth factor produced by endothelial cells,monocytes, fibroblasts, and T cells. GM-CSF stimulates theproduction of neutrophilic granulocytes, macrophages, and mixedgranulocyte-macrophage colonies from bone marrow cells. GM-CSF promotes immune system development and regulatesneutrophil function during infection.
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如要膜蛋白保持原来的结构应采用:非离子型去垢剂.
去垢剂作为添加剂生长蛋白质晶体是一项很有用的技术。非离子和两性离子结晶剂在膜蛋白结晶中已经得到很好应用,目前已经变成常规的实验手段。去垢剂在一些可溶蛋白中也起到了一定的作用,提高了晶体的质量和结果的可重复性 ,促进了单晶的生长, 但具体的影响机制尚不明确。其可能原因是去垢剂的引入使结晶液滴中的蛋白分子更具有亲水性,使溶液中同质蛋白质分子增加。向左转|向右转
表面活性剂:通常由一个极性头和一个非极性尾组成,用于去除难溶于水的污渍
漂白剂:通常含次氯酸盐成分,原理为其氧化性
稀盐酸:用于去除碱性的污渍,如马桶中的结块
碳酸钠溶液:用于去除油渍,其原理为酯在碱溶液中水解,参见皂化反应
我要做的两个目的蛋白,分子量一个是140的,另一个是36,内参用的GAPDH。这几天刚刚要做小鼠组织的蛋白,就把新提取的组织蛋白和之前做过的细胞蛋白一起上了,细胞和组织的各上了3个孔。
电泳转膜孵育等条件都是以前做成熟的
之后显影,细胞蛋白的,两个目的和内参都出得挺好;但是小鼠的组织蛋白只有分子量140的那个显出条带了,36的那个显出来的像一片水渍一样,斑片状的黑,内参有时也这样、有时干脆什么都不显。不知道这是什么原因...按说细胞同样的蛋白做出来,WB的各个步骤应该不会有太大问题的。
有点怀疑蛋白提取的不好,我提组织蛋白的的操作是在冰上进行的,裂解液也加有PMSF,用BCA法测得的蛋白浓度大概也有3~5mg/ml。
在这里求助各位高手~望给我指点一下~不胜感激啊!
我打算用HPLC分离已经初步纯化的蛋白,大小40kd到200kd,机器是安捷伦1200.
目前只有C18的柱子,用来分环肽。
如果分比较大的蛋白,有什么效果相对好的柱子,请推荐一下。
在网上见到有人说C18也可以试着分析大蛋白,不知道会不会堵,洗不下来?

