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innovagen/Apelin 13, Pyr1, A11 peptide/5 mg/SP-5138-5
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innovagen/Apelin 13, Pyr1, A11 peptide/5 mg/SP-5138-5
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innovagen
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SP-5138-5
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NameApelin 13, Pyr1, A11
Sequence(Pyr)RPRLSHKGPAPF-NH2
3-letter-codePyr - Arg - Pro - Arg - Leu - Ser - His - Lys - Gly - Pro - Ala - Pro - Phe -NH2
C-terminusAmide
NotesMet 11 is replaced by an Alanine (Ala).
Molecular weight1472.72

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2021-09-10
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1. 成熟的序列优化技术,配合 HEK293T 改良细胞系,最大程度激发表达潜能,常规瞬时转染小试产量在 10~200mg/L。2. 经过优化的稳定表达株,产量高达 4.5g/L,可提供,亦提供 50 L 以内的发酵生产服务。 产品编号载体名称载体骨架说明纯化方案AVH-1101pAZ-V5-hCH-IgG1Human IgG1 重链恒定区Protein A / GAVH-1102pAZ-V5-hCH-IgG2Human IgG2 重链恒定区Protein A / GAVH-1103pAZ-V5-hCH 查看更多>
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2021-09-09
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各位前辈:
我们用大肠杆菌中表达的重组蛋白,免疫兔子后获得了抗血清,虽然可以有效的识别重组蛋白,但是westernblot分析组织/细胞中的天然蛋白时背景很杂,做免疫组化效果也很差。
不知道有什么方法可以将重组蛋白的多克隆抗体纯化一下,提高其特异性?

多谢指教!

无论是保存还是运输,请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果,如果保存得当,Immunetech(苏州杰恩生物)的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。

1.收到抗体和重组蛋白后的操作

收到抗体和重组蛋白后(大部分抗体和重组蛋白是溶液态),请务必在4℃,12000rpm,离心3分钟,再打开管盖进行分装、溶解和保存(如果抗体和重组蛋白体积小于50µl,请延长离心时间至5分钟,以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来,干粉状态的同样适用)。Immunetech的抗体和重组蛋白使用特制的储存管,只有在12000rpm离心3分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来(即使是在10000rpm离心也会离心不完全,导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象)。请详细阅读说明书,并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。

2.抗体和重组蛋白的长期保存

对于Immunetech(苏州杰恩生物)大部分抗体和重组蛋白,比较合适的保存方式是:抗体分装后保存在-20℃,重组蛋白分装后保存在-80℃。

(1)分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。

(2)分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10µl每份。因为分装体积越小,抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。

(3)复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来。

(4)抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完,4℃保存尽量不要超过1天。

(5)绝对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中,将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层,避免温度变化造成反复冻融。

3.抗体和重组蛋白的短期保存

大部分Immunetech(苏州杰恩生物)的抗体和重组蛋白收到后4℃短暂保存1~2周,对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用(1~2周内),推荐在4℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体和重组蛋白。

4.抗体和重组蛋白的运输条件

一般的运输过程需要1~2周的时间,所以是在低温4℃的条件下来完成的。4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的,为了分装就需要解冻,这就多了一次冻融的过程),所以运输过程中一般避免干冰运输。

5.抗体和重组蛋白的稳定性

(1)抗体的稳定性是自然界长期进化的结果,抗体是免疫系统中最重要的分子之一,其稳定性是自然进化筛选的结果,在众多物种中,抗体分子形成了保守而稳定的结构。

(2)抗体的高Tm值,在室温下,甚至短时间温度达到50~60℃,抗体分子都能维持正确折叠,保持其应有的活性。

(3)抗体和重组蛋白的纯度。Immunetech采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术,确保抗体和重组蛋白产品的高纯度,保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。

(4)抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失,高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。Immunetech大部分抗体和重组蛋白浓度为1mg/ml,抗体和重组蛋白纯度高,特异性好,效价更高。

6.重组蛋白的特性

Immunetech(苏州杰恩生物)的重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式,原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态,真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存,这样使得重组蛋白非常稳定,在-80℃条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解,其中溶解的方法非常关键,因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意,这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。

(1)原核细胞表达的重组蛋白。Immunetech大肠杆菌表达的冻干重组蛋白,已经从包涵体中提纯,添加了蛋白保护剂,使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可,复溶冻干蛋白100µg,用86µl的超纯水,轻轻摇晃使蛋白溶解,再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解,一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。

(2)真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译,还要进行翻译后的加工,使得蛋白质的空间折叠方式维持正常,所以重组蛋白必须在真核细胞中进行,如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子,对翻译后的蛋白质进行加工,这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存,保持了其良好的活性和稳定性。

(3)重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类,多元醇,聚合物,表面活性剂,某些蛋白和氨基酸等。我们通常加8%(质量比体积)的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集,甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。


托珠单抗是一种重组人源化抗人白介素6(IL-6)受体单克隆抗体,由中国仓鼠卵巢(CHO)细胞通过DNA重组技术制得。
  分子式:C6428H9976N1720O2018S42 (仅多肽部分)
  分子量:144 985 Da (仅多肽部分)
  辅料包括:蔗糖、聚山梨酯80、十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠和注射用水。
  【性状】:澄清至半透明的无色至淡黄色液体。
  参考资料:http://baike.baidu.com/view/10489361.htm
用益赛普医疗类风湿2个月了,疗效不赖的,今天发现益赛普盒子上有“重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白”,这个组成是什么,是否有人能不能通俗的讲解下,谢谢。说明上这样解释的,也搞不懂啊【通用名】注射用重组人II型肿瘤坏死因子受体-抗体融合...
可以
详细原因细胞生物学产品专家齐氏生物整理如下:
目前,多种表达系统均可实现重组抗体的异源表达,但是抗体药物的产业化制备,始终以动物细胞大规模培养工艺为主。1986年首个治疗性抗体OKT3TM上市之初,动物细胞表达水平普遍不足100mg/L。经过近三十年间发展,业内用于重组抗体生产的动物细胞培养工艺,无论细胞培养密度,还是抗体表达水平均提高五十倍以上。流加培养工艺中细胞密度可达1~2×107 cell/mL,日均产量200mg/L/day以上(最高可达700mg/L/D),最终收液的容积产率可达3-5g/L(最高达13g/L),培养体积可至20,000L(Lonza, Portsmouth/NH—facility);灌注培养工艺中细胞密度可达2×108cell/ml,抗体容积产率最高达25~40g/L(Percivia公司XD?灌注系统)。以上行业技术水平的飞速提升,既源于上游细胞系构建技术的突破,也得益于细胞大规模培养工艺的日臻成熟。尤其是后者综合培养基开发,工艺优化,结合新型生物反应器的使用,实现了动物细胞的高密度、高表达培养,满足了临床上对于抗体药物“公斤级”产能的需求。

动物细胞的体外培养,涉及生物反应器的物理参数(温度、pH、DO、DCO2等)、培养基的营养成分(葡萄糖、谷氨酰胺、氨基酸、维生素等)的消耗,以及自身代谢产物(乳酸、氨、重组蛋白等)的积累与生理生化参数(细胞密度、活性,能荷等)的变化。作为重组抗体生产的“细胞工厂”,上述过程参数的改变会直接影响生产细胞系的活性与重组抗体的收率。比如:当乳酸(58 mM)、渗透压(382 mOsm/kg)、氨(5.1 mM)参数超过其相应的阈值,细胞活性和抗体产量均会明显下降。目前,业内已经对于细胞培养过程参数进行了深入的研究,在动物细胞大规模培养中下述参数的控制也已成定式
随着组学技术的发展与应用,目前的细胞培养工艺开发,已经从简单的工艺参数优化,进入系统的组学研究深度,生产细胞的代谢网络与重组抗体合成机制日益清晰。对于生产细胞系在不同工艺条件下抗体产量的差异,已经能够从基因组、蛋白组、代谢组等不同层次进行分析、解释。这就为今后大规模细胞培养工艺开发提供了新的线索。同时,业内随着“QbD”理念的深入,越来越多的“过程分析技术”(Process analytical technologies)开始应用于细胞培养过程,旨在通过加强关键过程参数的监控来确保蛋白药物的最终质量。如:培养基检测、培养过程监控、多批次数据分析等。未来基于重组抗体表达的细胞大规模培养工艺开发,将朝着稳定产能,提高质量的方向发展。
小弟是单抗新手,目前我有分别构建的PET32a和PET30a为载体表达的重组蛋白,想用来免疫做单克隆抗体.
我的问题是PET32a和30a用哪个好些?PET32a表达似乎带有融合的TRX蛋白什么的,单抗不好筛选:(

另外我的重组蛋白想以HIS-镍柱纯化,不知纯化的纯度应达到什么程度,才合适做单抗?

请各位大侠指点!
抗体制备品牌及商品 123
焙妊娇诿拖2017-10-09
推荐
国内做小分子抗原(如地高辛)的重组抗体,如ScFv,哪个大老板哪个实验室做得好,做得比较多,技术平台优良?请大伙来晒晒。谢谢。
寻找做重组蛋白重组抗体(尤其是小分子抗体scFv、Fab)的实验室或公司

大家好,我们实验室最近要做重组蛋白和抗体,问一下哪位大侠能提供此类服务啊?公司和实验室都可以。
主要是两类:
1.重组蛋白和重组抗体(尤其是小分子抗体scFv、Fab、嵌合抗体)的制备服务。
2.抗体库的构建和筛选服务。

哪个实验室或公司能提供的话,请联系我啊.zhao121min@126.com电话18910973075
谢过各位大侠。
益赛普【重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白】是什么?听起来怪吓人的心里总是不踏实,对身体有坏处吗?网上搜了半天,都是专业术语,也看不懂啊,那个肿瘤坏死因子,还受体是什么,抗体融合是什么意思?有大神给科普下吗
大家好,本人对免疫学不是很懂,现在从植物中克隆到一个基因,大肠杆菌重组表达后为包涵体,包涵体含有HIS标签,已经经过亲和纯化,如果用这种纯化的包涵体去免疫兔子,得到抗血清应该没有问题,请问大家用这种抗血清去检测我植物中对应的天然蛋白成功率如何?
因为包涵体毕竟是变性蛋白,得到的抗体去检测具有天然结构的活性蛋白,感觉有些不妥,请明白的高手指点一下!
我想买Abcam的Cre重组酶抗体(ab24608)请问诶福建有没有代理啊?或者中国的代理也可以,知道的朋友请告之~谢谢!
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