请教大家关于单克隆抗体的技术问题
2017-07-19
问题描述:
最近我想筛选一个针对膜蛋白的单克隆抗体,这个抗体的参考文献中提到的一种筛选方法是用DNA质粒直接免疫小鼠,然后再脾融合筛选出来的。这里有几个问题想向大家请教一下:
1.DNA效果比蛋白差很远,但是膜蛋白的抗体有可能是针对空间构象的,能起效的抗体位点很少,所以要在免疫阶段保证抗体多样性和特异性。看参考文献的剂量都是25ug或者50ug这种比较低的剂量,免疫次数2-3次,最后在融合前用细胞加免一次。而我设计的实验组是100ug剂量,免疫了4-5次,我这样是不是筛不出来特异性的抗体了?
2.DNA筛到的阳性抗体,可能亲和力低,如果不想筛到IgM的抗体,DNA免疫从什么时候开始由IgM转换成IgG的?抗体多样性在免疫的什么阶段比较高?
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