TheApolloLibraryPrepSystemcombinesautomatedprecisionliquidhandlingwithgold-standardchemistries,suchasSMART-Seqv4andThruPLEX,todeliverthereliABIlity,flexibility,andreproducIBLeresultsyouexpect.YoucanalsoperformyourTruSeq®strandedmRNAlibraryprep,orgenerateVeriSeq™PGSlibraries,ontheApollosystemtomaximizeyourtimeandminimizesampleloss.
TheApolloLibraryPrepSystemcombinesautomatedprecisionliquidhandlingwithgold-standardchemistries,suchasSMART-Seqv4andThruPLEX,todeliverthereliability,flexibility,andreproducibleresultsyouexpect.YoucanalsoperformyourTruSeq®strandedmRNAlibraryprep,orgenerateVeriSeq™PGSlibraries,ontheApollosystemtomaximizeyourtimeandminimizesampleloss.Preprogrammedscripts,includingthosevalidatedforrunningtheSMART-Seqv4reagentkit,aThruPLEXkit,IlluminaTruSeqStrandedmRNALibraryPrepkit,orVeriSeqPGSonthesystem,contributetosignificantlyreducedhands-ontimecomparedtomanuallibraryprepmethods.Simplysetup,hit[RUN],andwalkawaytoperformothertasks.
SMART-Seqv4ReagentKitfortheApolloSystem
Thiskitisdesignedtogeneratehigh-quality,full-lengthCDNAdirectlyfrom1–1,000cellsor10pg–10ngoftotalRNAusingahigh-throughputworkflowthatenablesprocessingofupto96samplesinasingleworkingday.Withthiskit,wehavereformattedourbest-in-classmethodforultra-low-inputRNA-seqlibraryprepforautomationontheApolloplatform,providingawalkwaysolutionthatperformscomparablytomanualworkflows.cDNAproducedwiththiskitcanbeprocessedintoNGSlibrariessuitableforanalysisonIlluminaorIonTorrentplatforms.ThekitincorporatesthesametechnologiesandchemistriesassociatedwithourotherSMART-Seqv4products,includingoligo(dT)-priming,SMARTtemplate-switchingtechnology,andlockednucleicacids(LNA),ensuringtheproductionofcDNAlibrariesthatprovidefull-lengthsequenceinformation,accuraterepresentationofGC-richtranscripts,andindustry-leADIngsensitivity.
ThruPLEXDNALibraryPrepontheApolloSystem
WeadaptedourtrustedThruPLEXchemistryforautomationontheApollosystem,enablingyoutostartwith50pg–30ngoffragmenteddouble-strandedDNAor1–30ngofcfDNAandefficientlyprocessupto48samplesperrun,withoutwastingreagents.Thisversatilekit,combinedwiththeconvenienceandconsistencyoftheApollosystem,providesaddedsensitivitytobetterunderstandgeneticvariationswithinfragmentedDNAsamplesfrombiofluidssuchascell-freeDNA,genomicDNA,DNAfromFFPEmaterials,cDNA,orChIPDNA.Oncepurifiedandquantified,theresultinglibraryisreadyforIlluminaNGSinstrumentsusingstandardIlluminasequencingreagentsandprotocols.
AutomatedTruSeqStrandedmRNALibraryPrepWorkflowontheApolloSystem
NeverperformIlluminaTruSeqstrandedmRNAlibraryprepbyhandagain.Ourautomatedprotocol(downloadprotocol)adaptstheTruSeqStrandedmRNAlibraryprepprotocolfortheApollosystem,allowingyoutostartwith0.1–1µgoftotalRNAor10–100ngofpreviouslyisolatedmRNA(fromspecieswithpolyAtails)andprocessupto48samplesperrun,inmultiplesofsix(IlluminaCat.#20020594forlow-throughputorCat.#20020595forhigh-throughputworkflows).Oncepurifiedandquantified,theresultinglibraryisreadyforsequencingonIlluminaNGSinstrumentsusingstandardIlluminasequencingreagentsandprotocols.
AutomatedVeriSeqLibraryPrepforPGSontheApolloSystem
Screenall24chromosomesforaneuploidywiththeIlluminaVeriSeqPGSKit(IlluminaCat.#RH-101-1001)usingourautomatedprotocol(downloadprotocol).ThisworkflowleveragestheApollosystem"sprecisionautomationtoallowthegenerationofupto96VeriSeqlibrariesin13hours,increasingreliabilityandefficiencybydecreasingvariabilityandhumanerror.Followinglibrarygenerationandnormalization,theresultinglibrariesarereadyforIlluminaNGSusingstandardIlluminasequencingreagentsandprotocols.
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说得简单点就是，细胞核是原封不动的，没有重组过，而细胞核外的东西是很多别的细胞中提取出来的并组合起来的。这样的混合体淋巴细胞产生的抗体具有很强的嵌合能力，针对性比一般的抗体强，但是它的来源没变，所以称之为混合单克隆抗体
羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的，周期也是一样的，就是免疫的部位不同，羊的免疫部位是：羊的小腿内侧皮下。采血部位是：颈静脉；放血部位是：颈静脉；最后收集血的部位：颈动脉。希望对你有帮助。
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
一般来说多克隆的阳性率高一些，但出现假阳性的比例也高一些。
没有marker，怎么知道你做的蛋白大小？
没有参照物，怎么知道你跑的快不快？
没有尺子，怎么知道你的size大小？
凭嘴说吗？
1取组织
（1） 灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2） 固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3） 脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4） 切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。
2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后， 用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2） 吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3） 吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。
多抗，稀释度更大，特异性相对较差，容易出现多条带。
兔的单克隆抗体和鼠的单克隆抗体在使用上不会有什么区别。
用来很多抗体，许多时候觉得单抗多抗也未必是理论上那样的。单抗做不好的也有，多抗条带唯一且清晰的也有。
而且很多蛋白的抗体未必有那么多的选择。
