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ACROBiosystems/Biotinylated Monoclonal Anti-DNP antibody, Mouse IgG1 Isotype Control/200ug/DNP
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ACROBiosystems/Biotinylated Monoclonal Anti-DNP antibody, Mouse IgG1 Isotype Control/200ug/DNP
品牌 / 
ACROBiosystems
货号 / 
DNP
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  • Source
    Dinitrophenyl (DNP) is a hapten that is not normally expressed in the target tissue. Therefore, anti-DNP antibody has no relevant specificity to a target antigen, and can be used as isotype control antibody to differentiate non-specific background signal from specific antibody signal in various in vitro and in vivo studies. Biotinylated Monoclonal Anti-DNP antibody, Mouse IgG1 Isotype Control was purified from HEK293 cell culture. It is the Biotin labeled form ofMonoclonal Anti-DNP antibody, Mouse IgG1 Isotype Control (Cat. No. DNP-M1).
  • Isotype
    Mouse IgG1/kappa
  • Specificity
    Specifically reacts with DNP (Dinitrophenyl) and DNP conjugated proteins.
  • Application
    This antibody is suitable for use as a non-targeting isotype control in various in vitro and in vivo studies. It can also be used as a negative control in various applications such as ELISA, Western blot, immunofluorescence, immunohistochemistry, immunoprecipitation, and flow cytometry. Each laboratory should determine an optimum working titer for use in its particular application.
  • Purity

    >90% as determined by SDS-PAGE.

  • Formulation

    Lyophilized from 0.22 μm filtered solution in PBS, pH7.4 . Normally trehalose is added as protectant before lyophilization.

    Contact us for customized product form or formulation.

  • Reconstitution

    Please see Certificate of Analysis for specific instructions.

    For best performance, we strongly recommend you to follow the reconstitution protocol provided in the CoA.

  • Storage

    For long term storage, the product should be stored at lyophilized state at -20°C or lower.

    Please avoid repeated freeze-thaw cycles.

    This product is stable after storage at:

    1. 4-8°C for 12 months in lyophilized state;
    2. -70°C for 3 months under sterile conditions after reconstitution.
SDS-PAGE
Biotinylated Monoclonal Anti-DNP antibody, Mouse IgG1 Isotype Control (Cat. No. DNP-BM1) SDS-PAGE gel

Biotinylated Monoclonal Anti-DNP antibody, Mouse IgG1 Isotype Control on SDS-PAGE under reducing (R) condition. The gel was stained overnight with Coomassie Blue. The purity of the protein is greater than 90%.

Bioactivity-FACS
FACS assay shows that recombinant Biotinylated FACS

2e5 of Anti-CD19 CAR-293 cells were stained with a series of concentrations of Biotinylated Anti-DNP Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. DNP-BM1), washed and then followed by PE-SA and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol
FACS assay shows that recombinant Biotinylated FACS

5e5 of PBMCs were stained with a series of concentrations of Biotinylated Anti-DNP Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. DNP-BM1), washed and then followed by PE-SA and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol
FACS assay shows that recombinant Biotinylated FACS

2e5 of Anti-CD19 CAR-293 cells were stained with 100 μL of 1 μg/mL of Biotinylated Anti-DNP Antibody, Mouse IgG1 (Cat. No. DNP-BM1) and positive control respectively, washed and then followed by PE-SA and analyzed with FACS (Routinely tested).

Protocol
  • Background
    A hapten is a small molecule that can elicit an immune response only when conjugated with a large carrier such as a protein. Typical haptens include drugs, urushiol, quinone, steroids, etc. Peptides and non-protein antigens usually need conjugating to a carrier protein (such as BSA (bovine serum albumin) or KLH (keyhole limpet hemocyanin) to become good immunogens). Additionally, haptens should be administered with an adjuvant to ensure a high quality immune response. It is important that the hapten design (preserving greatly the chemical structure and spatial conformation of target compound), selection of the appropriate carrier protein and the conjugation method are key conditions for the desired specificity anti-hapten antibodies. We design anti-hapten antibodies based on the HaptenDB information.
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2021-08-28
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需要
制备抗体都需要进行纯化处理
本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。大型动物多为皮下或肌肉免疫,但是初次免疫都建议在皮下进行。免疫形式,抗原通常需要与佐剂混合充分后才进行免疫。免疫剂量,免疫剂量根据被免疫的动物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很远。如果用兔制备多抗,首次免疫(皮下)一般在200-1000ug之间,对于大鼠,首次免疫(皮下)为100-500ug,对于小鼠,首次免疫(皮下)一般在10-100ug之间,加强免疫一般为首次免疫剂量的20%-50%。尾静脉或脾内方式加强则可减至几微克至十微克。对于体型比较大的动物可酌量增加,至于羊,没做过,抱歉,免疫周期,首次免疫后,一般在10-15d左右抗体的产量会达到一个峰值,但是此时抗体亲和力不够,大部分都是IGM,因此需要进行加强免疫,加强免疫一般在首次免疫后三至四周进行。第二次、第三次加强免疫间隔可以缩短至2-3周。这个时间不太能长也不能太短,太短起不到加强的效果,而且还容易引起免疫耐受,如果相隔太久,则前面的免疫将失去初步刺激的效果。
羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的,周期也是一样的,就是免疫的部位不同,羊的免疫部位是:羊的小腿内侧皮下。采血部位是:颈静脉;放血部位是:颈静脉;最后收集血的部位:颈动脉。希望对你有帮助。

AKT2多克隆抗体应该切取哪个分子量大小的条带呢?磷酸化和非磷酸化有啥区别么?分别应该怎么跑呢?磷酸化的蛋白在提取时有啥讲究么?求大神指导。

单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇的特异性抗体。
单克隆抗体这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,可用于探讨: ①蛋白质的精细结构;②淋巴细胞亚群的表面新抗原;③组织相容性抗原;④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤肿瘤的定位和分类;⑥纯化微生物和寄生虫抗原;⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合,将药物带至病灶部位.。
因此,单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究,为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。
抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于治疗,制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验9ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在 IC50时的浓度,并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0,即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol,通常K的范围在 108 ~1010 /mol,也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
废话,
没有marker,怎么知道你做的蛋白大小?
没有参照物,怎么知道你跑的快不快?
没有尺子,怎么知道你的size大小?
凭嘴说吗?
抗体的制备—多克隆抗体123
弗兰爱贝尔2452017-11-04
一、多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤:
1、制备抗原。
2、选择实验动物。
3、动物免疫。
4、试取血进行测试,看看是否成功免疫。
5、如果成功免疫,杀死实验动物,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。
二、抗体分类
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monoclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。多克隆抗体由于其可识别多个抗原表位、可引起沉淀反应,制备时间短,成本低的原因广泛应用于研究和诊断方面。
三、免疫方法
可以采用以下各种方法之一进行免疫。
(1)淋巴结注射法:①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗 50mg(每侧约0.30ml) 。7~10 天后,兔跖及腘肌淋巴结肿大;②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml);③必要时,14 天后,重复步骤②一次;④再过 7 天后,于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml) ;⑤5~7天后,耳静脉采血。测定血清效价。
(2)皮下多点注射法:①家兔两侧掌(跖内各注射含有完全佐剂抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7~10 天后,脊柱两侧多点(颈、胸、腰椎各两点、共 6 点)皮下注射含不完全佐剂5的抗原,每点 0.50ml;③7~10 天后,脊柱两侧重复注射一次;④7~10 天后试血。不合格者重复步骤③。
(3)多途径联合注射法:①两侧掌(跖)内侧皮下注射含完全佐剂抗原 0.50ml(IgG 量为 5mg/ml) ;②14 天后,多点皮下注射含有不完全佐剂抗原;③7 天后,耳静脉注射不含佐剂的抗原 2ml;④测定血清抗体效价,不合格者重复步骤③,并适当递增 IgG 量。

本人做多克隆抗体制备,所用蛋白为纯化的过敏原,与福氏佐剂等量混合,每次量为1mg,每次总的注射量为3-4ml,兔子皮下多点注射,但是其中两只兔子在首次免疫后死亡,另有一致在首次加强免疫后死亡,死亡原因全是消化不良,胃鼓的像气球一样,请问各位老师这是什么原因啊,应该如何改进啊?谢谢

兔单克隆抗体 123
最后一次HVVLE2021-08-05
单抗制备难度大,使用时候容易受到目标蛋白降解的影响。
多抗,稀释度更大,特异性相对较差,容易出现多条带。
兔的单克隆抗体和鼠的单克隆抗体在使用上不会有什么区别。

用来很多抗体,许多时候觉得单抗多抗也未必是理论上那样的。单抗做不好的也有,多抗条带唯一且清晰的也有。
而且很多蛋白的抗体未必有那么多的选择。
多克隆抗体的概念抗原刺激机体,产生免疫学反应,由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白,这就是免疫球蛋白,这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。抗原通常是由多个抗原决定簇组成的,由一种抗原决定簇刺激机体,由一个B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体(Monclone antibody)。由多种抗原决定簇刺激机体,相应地就产生各种各样的单克隆抗体,这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体,机体内所产生的抗体就是多克隆抗体;除了抗原决定簇的多样性以外,同样一类抗原决定簇,也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。
这个没有硬性规定,要根据实验情况而定。如果有文献参考,也可以先用发表的方法。

一般来说多克隆的阳性率高一些,但出现假阳性的比例也高一些。
单克隆抗体多克隆抗体IgG,IgD,IgE,IgA,IgM单克隆抗体定义到底是什么样的,不要用书上的答,说人话我不理解的地方在于,一个抗原决定簇能诱导产生一种抗体,这个一种是IgG,IgD,IgE,IgA,IgM其中一种呢还是指别的分类标准?一个抗原决定簇诱导产...