
The Thermal Cycler Dice Real Time System is a compact, high-performance qPCR machine that accommodates 96-well plates. This system includes easy-to-use software. To support robust and reliable qPCR, Takara Bio offers the Dice Real Time System—a compact, high-performance thermal cycler that is well-suited for high-throughput experiments. Equipped with easy-to-use software, the Dice Real Time System is reliable and precise. Use the Dice Real Time System with confidence as a "Perfect" real-time PCR system for your gene expression and qPCR experiments.
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其次,察看次目的蛋白的存在形式,有没有多聚体形式及变构形式;
最后,查看多家抗体公司的DATA,看看别人的WB做出来的条带的位置。
根据你说的,特异识别多个组织中的同样大小的条带,我觉得很可能就是你的目的蛋白。
一般来说多克隆的阳性率高一些,但出现假阳性的比例也高一些。
1取组织
(1) 灌注固定:暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
(2) 固定:将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
(3) 脱水:将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
(4) 切片:脑组织冰冻切片20微米,37度烘干2h以上;
(5)将切片放置-80度保存,随用随取。
2免疫单标记
(1)做抗原修复(0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液,放到水浴箱中90~94℃保存15min),冷却后, 用1*PBS反复洗标本10min,吸去PBS,同时向标本加渗透液(配0.4%trition液,然后将BSA加入到配好的trition液中,配成1%浓度)100ul,常温下湿盒反应1h。
(2) 吸去渗透液,同时向标本加block液(5%封闭用正常山羊血清)100ul,常温下湿盒反应5h。
(3) 吸去block液,同时向标本加入1:50稀释的羊抗鼠一抗100ul,37度湿盒反应过夜。
(4)吸去一抗,并回收,用1*PBS洗液反复洗15min。
(5)快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗,并立即用锡纸包裹,注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1:200稀释。
(6)进入暗室,吸去PBS,同时加入二抗100ul,37度湿盒反应2h,封片。
(7)放置到荧光显微镜下观察。
又由于自然存在的抗原大都存在多个抗原表位,会刺激机体产生多种针对同一抗原的不同抗原表位相应的不同抗体.

