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NEB/Luna® Universal Probe qPCR Master Mix/M3004S/500 rxn (5 x 1 ml)
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Description:
Rapid,sensitiveandpreciseprobe-basedqPCRdetectionandquantitationoftargetDNAandCDNAsequences.
Probe-basedquantitativePCR(qPCR)usesreal-timefluorescencereleasedupon5´→3´exonucleasecleavageofaquenched,target-specificprobetomeasureDNAamplificationateachcycleofaPCR.Atapointwherethefluorescencesignalissignificantlydetectableoverthebackgroundfluorescence,aquantificationcycleorCqvaluecanbedetermined.Cqvaluescanbeusedtoevaluaterelativetargetabundancebetweentwoormoresamplesortocalculateabsolutetargetquantitiesinreferencetoanappropriatestandardcurve,derivedfromaseriesofknowndilutions.
TheNEBLunaUniversalProbeqPCRMasterMixisa2Xreactionmixoptimizedforreal-timeqPCRdetectionandquantitationoftargetDNAsequencesusinghydrolysisprobes.ItcontainsHotStartTaqDNAPolymeraseandhasbeenformulatedwithauniquepassivereferencedyethatiscompatIBLeacrossavarietyofinstrumentplatforms(includingthosethatrequireahighorlowROXreferencesignal).ItalsofeaturesdUTPforcarryoverpreventionandanon-fluorescent,visibledyetomonitorreactionsetup.ThisdyedoesnotspectrallyoverlapfluorophorescommonlyusedforqPCRandwillnotinterferewithreal-timedetection.
Themastermixformulationissuppliedat2XconcentrationandcontainsallPCRcomponentsrequiredforamplificationandquantitationofDNAexceptprimers/probesandDNAtemplate.GenomicDNAorcDNAofinterestcanbequantitatedwithLunaqPCRandexistingaswellascommercialqPCRassayprimer/probesequencescanbeused.
LearnmoreaboutourcomprehensiveqPCR/RT-qPCRtestingand“dotsinboxes”datavisualization
Notes:
AssayDesignTheuseofqPCRprimerdesignsoftware(e.g.,Primer3)maximizesthelikelihoodofamplificationsuccesswhileminimizingnonspecificamplificationandprimerdimers.TargetswithbalancedGC/ATcontent(40–60%)tendtoamplifyefficiently.Wherepossible,entersufficientsequencearoundtheareaofinteresttopermitrobustprimerdesignandusesearchcriteriathatpermitcross-referenceagainstrelevantsequencedatabases(toavoidpotentialoff-targetamplification).ForcDNAtargets,itisadvisabletodesignprimersacrossknownsplicingsitesinordertopreventamplificationfromgenomicDNA.Conversely,primersdesignedtotargetintronicregionscanensureamplificationexclusivelyfromgenomicDNA.PrimerandProbeConcentrationFormosttargets,afinalconcentrationof400nMforeachprimerwillprovideoptimumperformance.Ifneeded,primerconcentrationscanbeoptimizedbetween200–900nM.Probeshouldbeincludedat200nMforbestresults.Probeconcentrationcanbeoptimizedintherangeof100–500nMifoptimizationofperformanceortargetfluorescencelevelisdesired.MultiplexingTodetectorquantitatemultipletargetsinthesameLunareaction,selectdifferentfluorophorescorrespondingtoseparatedetectionchannelsofthereal-timeinstrument.Include400nMofforwardandreverseprimerand200nMprobeforeachtargettobedetectedinthereaction,andadjustconcentrationsifnecessarybasedonperformance(primer200–900nM,probe100–500nM).WhenloADIngqPCRprotocolontothereal-timeinstrument,besuretoselecttheappropriateopticalchannels,assomeinstrumentshaveasinglechannelrecordingmodethatwouldpreventmultiplexdatacollectionandanalysis.ForROX-dependentinstruments,avoidROX-labeledprobes.Thefunctionalityoftheprimerandprobesetsshouldbetestedindividuallybeforeattemptingamultiplexreaction.Whendeterminingwhichfluorophorestoincludeinamultiplexreaction,besuretochoosecompatiblereporterdyesandquenchersthathavewellseparatedfluorescencespectraorexhibitminimaloverlap.AmpliconLengthToensuresuccessfulandconsistentqPCRresults,itisimportanttomaximizePCRefficiency.AnimportantaspectofthisisthedesignofshortPCRamplicons(typically70–200bp).Someoptimizationmayberequired(includingtheuseoflongerextensiontimes),fortargetsthatexceedthatrange.TemplatePreparationandConcentrationLunaqPCRiscompatiblewithDNAsamplespreparedthroughtypicalnucleicacidpurificationmethods.PreparedDNAshouldbestoredinanEDTA-containingbuffer(e.g.,1XTE)forlong-termstability,anddilutionsshouldbefreshlypreparedforaqPCRexperimentbydilutionintoeitherTEorwater.Generally,ausefulconcentrationofstandardandunknownmaterialwillbeintherangeof106copiesto1copy.ForgDNAsamplesfromlargegenomes(e.g.,human,mouse)arangeof50ng–1pgofgDNAistypical.Forsmallgenomes,adjustasnecessaryusing106 –1copyinputasanapproximaterange.Notethatforsinglecopydilutions,somesampleswillcontainmultiplecopiesandsomewillhavenone,asdefinedbythePoissondistribution.ForcDNA,usetheproductofareactioncontaining1μg–0.1pgstartingRNA.cDNAdoesnotneedtobepurifiedbeforeadditiontotheLunareactionbutshouldbedilutedatleast1:10intotheqPCR.ROXReferenceDyeSomereal-timeinstrumentsrecommendtheuseofapassivereferencedye(typicallyROX)toovercomewell-to-wellvariationsthatcouldbecausedbybubbles,smalldifferencesinvolume,andautofluorescencefromdustorparticulatesinthereaction.TheLunaUniversalProbeqPCRMasterMixisformulatedwithauniversalreferencedyethatiscompatiblewithavarietyofqPCRinstrumenttypes,includingthosethatusenopassivereferencenormalizationandthosethatusealoworhighconcentrationofpassivereferencedye(ROX).Therefore,noadditionalcomponentsarerequiredtoensurecompatibilitywiththeseinstruments.CarryoverContaminationPreventionqPCRisanextremelysensitivemethod,andcontaminationinnewqPCRassayswithproductsfrompreviousamplificationreactionscancauseavarietyofissuessuchasfalsepositiveresultsandadecreaseinsensitivity.Thebestwaytopreventthis“carryover”contaminationistopracticegoodlaboratoryproceduresandavoidopeningthereactionvesselpostamplification.However,toaccommodatesituationswhereadditionalanti-contaminationmeasuresaredesired,theLunaUniversalProbeqPCRMasterMixcontainsamixtureofdUTP/dTTPthatresultsintheincorporationofdUintotheDNAproductduringamplification.PretreatmentofqPCRexperimentswithuracilDNAglycosylase(UDG)willeliminatepreviously-amplifieduracil-containingproductsbyexcisingtheuracilbasetoproduceanon-amplifiableDNAproduct.TheuseofaThermolabileUDGisimportant,ascompleteinactivationoftheUDGisrequiredtopreventdestructionofnewlysynthesizedqPCRproducts.Toenablecarryoverprevention,0.025units/μlAntarcticThermolabileUDG(NEB#M0372)shouldbeaddedtothereactionmix.Tomaximizeeliminationofcontaminatingproducts,setuptheqPCRexperimentsatroomtemperatureorincludea10minuteincubationstepat25°Cbeforetheinitialdenaturationstep.ReactionSetupandCyclingConditionsDuetothehotstartnatureofthepolymerase,itisnotnecessarytopreheatthethermocyclerpriortouseorsetupreactionsonice.For96-wellplates,werecommendafinalreactionvolumeof20μl.For384-wellplates,afinalreactionvolumeof10μlisrecommended.Whenprogramminginstrumentcyclingconditions,ensureaplatereadisincludedattheendoftheextensionstep,andadenaturation(melt)curveaftercyclingiscompletetoanalyzeproductspecificity.Amplificationfor40cyclesissufficientformostapplications,butforverylowinputsamples45cyclesmaybeused.蚂蚁淘电商平台
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2021-08-03
上海嵘崴达实业有限公司在发布的人心肌营养素（CT-1）亲和纯化的多克隆抗体供应信息，浏览与人心肌营养素（CT-1）亲和纯化的多克隆抗体相关的产品或在搜索更多与人心肌营养素（CT-1）亲和纯化的多克隆抗体相关的内容。 查看更多
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2021-07-25
武汉金开瑞生物工程有限公司在发布的多克隆抗体制备供应信息，浏览与多克隆抗体制备相关的产品或在搜索更多与多克隆抗体制备相关的内容。 查看更多
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2021-09-17
我公司可大量、稳定提供各种抗原、抗体，可用于诊断试剂、病毒结 查看更多
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2017-07-07
北京博尔西科技有限公司在发布的生产供应原料：兔抗羊IgG（多克隆抗体）供应信息，浏览与生产供应原料：兔抗羊IgG（多克隆抗体）相关的产品或在搜索更多与生产供应原料：兔抗羊IgG（多克隆抗体）相关的内容。 查看更多
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实验原理 免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术，这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM, IgG, IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中，首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离，然后将特异性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中，在抗原和抗体的扩散过程中，抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也可用于洗去未结合的蛋白，抗原和抗体结合 查看更多
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武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司在发布的hnRNP H多克隆抗体供应信息，浏览与hnRNP H多克隆抗体相关的产品或在搜索更多与hnRNP H多克隆抗体相关的内容。 查看更多
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2017-08-01
北京爱博生生物技术有限公司在发布的多克隆抗体定制供应信息，浏览与多克隆抗体定制相关的产品或在搜索更多与多克隆抗体定制相关的内容。 查看更多
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2017-10-04
青岛中科爱博生物科技有限公司在发布的中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白多克隆抗体供应信息，浏览与中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白多克隆抗体相关的产品或在搜索更多与中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白多克隆抗体相关的内容。 查看更多
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2021-08-11
艾美捷科技有限公司在发布的PART-1 多克隆抗体 | PART-1 Polyclonal Antibody供应信息，浏览与PART-1 多克隆抗体 | PART-1 Polyclonal Antibody相关的产品或在搜索更多与PART-1 多克隆抗体 | PART-1 Polyclonal Antibody相关的内容。 查看更多
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2021-07-15
我们的理念： 纳米颗粒标记小分子抗原技术，更好地展示抗原位点，提高免疫效果 蛋白、多肽分别免疫，提高抗体开发成功率 只提供满足客户实际应用要求的抗体 我们的优势： 现有员工60余人，其中博士5人，均拥有抗体开发10年以上经验 在小分子抗原标记、纳米颗粒制备等领域做出卓越的成果 我们的能力覆盖了从基因到抗体、再到Assay建立，再到成熟的试剂盒 2013年保证型多抗促销活动（截止6月30号）... 查看更多
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2017-10-20
艾美捷科技有限公司在发布的IGSF4多克隆抗体(A01) | IGSF4 polyclonal antibody (A01)供应信息，浏览与IGSF4多克隆抗体(A01) | IGSF4 polyclonal antibody (A01)相关的产品或在搜索更多与IGSF4多克隆抗体(A01) | IGSF4 polyclonal antibody (A01)相关的内容。 查看更多
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什么是多克隆抗体?与单克隆抗体有哪些区别? 安必奇生物123
moleca822017-11-04
所谓混合单克隆抗体就是只含一个单细胞核混合其他氨基酸物质的克隆细胞产生的。
说得简单点就是，细胞核是原封不动的，没有重组过，而细胞核外的东西是很多别的细胞中提取出来的并组合起来的。这样的混合体淋巴细胞产生的抗体具有很强的嵌合能力，针对性比一般的抗体强，但是它的来源没变，所以称之为混合单克隆抗体
说得简单点就是，细胞核是原封不动的，没有重组过，而细胞核外的东西是很多别的细胞中提取出来的并组合起来的。这样的混合体淋巴细胞产生的抗体具有很强的嵌合能力，针对性比一般的抗体强，但是它的来源没变，所以称之为混合单克隆抗体
【求助】羊多克隆抗体的制备,求助,谢谢各位 免疫学讨论版...123
流年eMT2017-11-04
本数据来源于百度地图，最终结果以百度地图最新数据为准。大型动物多为皮下或肌肉免疫，但是初次免疫都建议在皮下进行。免疫形式，抗原通常需要与佐剂混合充分后才进行免疫。免疫剂量，免疫剂量根据被免疫的动物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很远。如果用兔制备多抗，首次免疫（皮下）一般在200-1000ug之间，对于大鼠，首次免疫（皮下）为100-500ug，对于小鼠，首次免疫（皮下）一般在10-100ug之间，加强免疫一般为首次免疫剂量的20%-50%。尾静脉或脾内方式加强则可减至几微克至十微克。对于体型比较大的动物可酌量增加，至于羊，没做过，抱歉，免疫周期，首次免疫后，一般在10-15d左右抗体的产量会达到一个峰值，但是此时抗体亲和力不够，大部分都是IGM，因此需要进行加强免疫，加强免疫一般在首次免疫后三至四周进行。第二次、第三次加强免疫间隔可以缩短至2-3周。这个时间不太能长也不能太短，太短起不到加强的效果，而且还容易引起免疫耐受，如果相隔太久，则前面的免疫将失去初步刺激的效果。
羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的，周期也是一样的，就是免疫的部位不同，羊的免疫部位是：羊的小腿内侧皮下。采血部位是：颈静脉；放血部位是：颈静脉；最后收集血的部位：颈动脉。希望对你有帮助。
羊多抗免疫步骤和兔多抗免疫步骤一样的，周期也是一样的，就是免疫的部位不同，羊的免疫部位是：羊的小腿内侧皮下。采血部位是：颈静脉；放血部位是：颈静脉；最后收集血的部位：颈动脉。希望对你有帮助。
[辅助检查]第二节 多克隆抗体的制备及鉴定 医学免疫学实验技术 天...123
不想等待1432021-08-10
抗体的效价鉴定 不管是用于诊断还是用于治疗，制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体，要求的效价不一。鉴定效价的方法很多，包括有试管凝集反应、琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验9ELISA)等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法，以资比较。如制备抗抗体的效价，一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
抗体的特异性鉴定 抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高，它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线，计算各自的结合率，求出各自在 IC50时的浓度，并按下列公式计算交叉反应率。 如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管，而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时，表示 这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为 0，即该血清的特异性较好。
抗体的亲和力 是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键、疏水键、侧链相反电荷基因的库仑力、范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示，K的单位是L/mol，通常K的范围在 108 ～1010 /mol，也有多达 1014 /mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选，确定抗体的用途，验证抗体的均一性等均有重要意义。向左转|向右转
AKT2多克隆抗体应该切取哪个分子量大小的条带呢?_问答详情_多...123
淡忘回忆的石头2016-10-07
多克隆抗体制备流程 免疫学讨论版论坛123
摉栣鵸轊疩r2021-08-14
一般选用鼠或兔来做，如果你的免疫原分子量够大的话，就直接免疫，如果是小分子的话，可以连上BSA等的一些蛋白再免疫，五免后取血检测血清中抗体含量
【求助】求助抗NGF、BDNF、NT3、GDNF多克隆抗体信息 ...123
lhb20061299a2021-08-01
【求助】杂带123
彼岸花开dx2021-08-13
单克隆一定好吗?选择单克隆抗体还是多克隆抗体?|产品技术|上海...123
木恋晓丶UFT2021-07-28
这个没有硬性规定，要根据实验情况而定。如果有文献参考，也可以先用发表的方法。
一般来说多克隆的阳性率高一些，但出现假阳性的比例也高一些。
一般来说多克隆的阳性率高一些，但出现假阳性的比例也高一些。
国内多克隆抗体定制服务有哪些比较好的公司推荐啊? 123
3岁之翼2021-07-20
能详细说下嘛
毕兹多克隆抗体的制备和分析应用123
第三名IMG2017-11-04
废话，
没有marker，怎么知道你做的蛋白大小？
没有参照物，怎么知道你跑的快不快？
没有尺子，怎么知道你的size大小？
凭嘴说吗？
没有marker，怎么知道你做的蛋白大小？
没有参照物，怎么知道你跑的快不快？
没有尺子，怎么知道你的size大小？
凭嘴说吗？
【求助】IHC一抗选择单克隆抗体好还是多克隆抗体好? 免疫学讨论...123
hotxinxin2021-08-04
请问各位，做免疫组化用单克隆抗体好，还是多克隆抗体好。这两个有什么区别，顺便，大家帮我看看我的免疫荧光实验步骤有没有什么太大的问题。谢谢各位。
1取组织
（1） 灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2） 固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3） 脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4） 切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。
2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后， 用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2） 吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3） 吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。
1取组织
（1） 灌注固定：暴露心脏,将注射针头插入左心室,剪开右心耳,快速灌注PBS,待右心耳处流出澄清液体,换4%多聚甲醛灌注到大鼠四肢强直为止,快速取脑和肾。
（2） 固定：将组织置于4%多聚甲醛中固定15小时
（3） 脱水：将组织放入30% 蔗糖溶液中直至下沉
（4） 切片：脑组织冰冻切片20微米，37度烘干2h以上；
（5）将切片放置－80度保存，随用随取。
2免疫单标记
（1）做抗原修复（0.4g柠檬酸、3g柠檬酸钠、1000ml水配制成溶液，放到水浴箱中90~94℃保存15min）,冷却后， 用1*PBS反复洗标本10min，吸去PBS，同时向标本加渗透液（配0.4%trition液，然后将BSA加入到配好的trition液中，配成1％浓度）100ul，常温下湿盒反应1h。
（2） 吸去渗透液，同时向标本加block液（5％封闭用正常山羊血清）100ul，常温下湿盒反应5h。
（3） 吸去block液，同时向标本加入1：50稀释的羊抗鼠一抗100ul，37度湿盒反应过夜。
（4）吸去一抗，并回收，用1*PBS洗液反复洗15min。
（5）快速从冰箱中取出驴抗羊的二抗，并立即用锡纸包裹，注入到一个新的以锡纸包裹的tube管中并用PBS以1：200稀释。
（6）进入暗室，吸去PBS，同时加入二抗100ul，37度湿盒反应2h,封片。
（7）放置到荧光显微镜下观察。
兔单克隆抗体 123
最后一次HVVLE2021-08-05
单抗制备难度大，使用时候容易受到目标蛋白降解的影响。
多抗，稀释度更大，特异性相对较差，容易出现多条带。
兔的单克隆抗体和鼠的单克隆抗体在使用上不会有什么区别。
用来很多抗体，许多时候觉得单抗多抗也未必是理论上那样的。单抗做不好的也有，多抗条带唯一且清晰的也有。
而且很多蛋白的抗体未必有那么多的选择。
多抗，稀释度更大，特异性相对较差，容易出现多条带。
兔的单克隆抗体和鼠的单克隆抗体在使用上不会有什么区别。
用来很多抗体，许多时候觉得单抗多抗也未必是理论上那样的。单抗做不好的也有，多抗条带唯一且清晰的也有。
而且很多蛋白的抗体未必有那么多的选择。
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