【求助】流式抗体同型对照

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【求助】流式抗体同型对照

2021-07-30

问题描述：

本人拟进行全血白细胞胞膜受体表达情况的流式实验，已经订购了三种单克隆直标抗体，两种为PE荧光标记，另一种为APC荧光标记，但APC标记的抗体的同型对照缺货，请教各位老师同学，我如果不购买其他品牌的APC标记的同型对照，我能否将APC标记的抗体与PE标记的其中一个抗体共染，进行内对照，也就是APC抗体不设专门的阴性对照？这样对检测出来的结果又多大影响？

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kenny_k

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如果样本中有内对照（阴性/阳性对照）的话，就不用做同型对照的。

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norman204

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不太明白APC抗体与PE抗体在一起共染做内对照是什么意思？做同型对照的意义：1.判断标本和抗体质量。例如标本封闭不佳时，同型对照标本的背景会很高；2.利用同型对照标本调节流式电压，确定所测定分子的阴性、阳性界限，这对于低表达、连续表达的分子非常重要。举个例子，如果你的APC是要做CD4、CD8，那就没有必要再做同型对照了，因为CD4/CD8表达高，分群明显，容易调节流式条件。如果APC标记的是连续表达、低表达的分子，就需要做同型了。

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勇敢坚强

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kenny_k如果样本中有内对照（阴性/阳性对照）的话，就不用做同型对照的。同型对照指应该就是阴性对照吧？我做的是人血标本，大的组群是病人与正常人对比，但各指标（受体）间需要做同型对照（阴性）。

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勇敢坚强

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展开引用norman204不太明白APC抗体与PE抗体在一起共染做内对照是什么意思？做同型对照的意义：1.判断标本和抗体质量。例如标本封闭不佳时，同型对照标本的背景会很高；2.利用同型对照标本调节流式电压，确定所测定分子的阴性、阳性界限，这对于低表达、连续表达的分子非常重要。举个例子，如果你的APC是要做CD4、CD8，那就没有必要再做同型对照了，因为CD4/CD8表达高，分群明显，容易调节流式条件。如果APC标记的是连续表达、低表达的分子，就需要做同型了。......“APC抗体与PE抗体在一起共染做内对照”，我想表达的意思是在设双阴性电压时，是在给两种受体设“门”吗？我检测的受体按实验预想应该是低表达的，在正常人上含量基本没有，按文献报道只在病人上有。APC标记的同型对照今天已经订购了，估计元旦前能到货。

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勇敢坚强

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谢谢两位啦

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