用流式检测血小板活化标志物CD62p 遇到棘手问题 很头疼
2021-07-20
问题描述：
我按照以下步骤操作：测定P选择素1、静脉血枸橼酸钠抗凝2管各5l，一管+IgG1PE5L+CD41APC5L另一管+CD62PE5l+CD41APC5l放暗室处20min，+0.5mlPBS流式检验可是测得结果非常低（比如同型对照是0.8，测定管就只有0.9左右）注：用的是冠心病患者的血标本并...
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用户
博凌科为解答：你的阴性对照的比率是多少？是0吗，然后你的同型对照是0.8，而样品是0.9？如果是这样的话，很明显你用的抗体太多了，导致非特异性结合非常强，所以你的同型对照的背景色也会有0.8。另外，你的样品中的细胞数呢？做流式要求细胞1-2个M， 细胞数过多或者是过少都会影响染色的效果。我不知道你用的抗体是哪个公司的，一般而言，我们在染色的时候，样品（也就是1-2M细胞，悬浮在100uL的PBS中）加入1uL抗体来进行染色。而你的样品似乎只有5uL，居然还是使用5uL的抗体。在这样的体系中，染色肯定不会好的，
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