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用目的蛋白的单抗就能检测到，请问你是怎么解决这个问题的呢？

条件：Western10%分离胶，蛋白抗体1:500，FlagMouse1:1000，目的蛋白N端带Flag标签。
求助：为什么用蛋白抗体仅出来一条带，而用Flag抗体则出来两条带？
谢谢大家啊
图一：蛋白抗体

图二Flag抗体

重组蛋白的话，一般在蛋白冻干或最终制得之前，都会进行纯化，一般的生物公司可以纯化纯度到达90%，就是不会有其他的杂蛋白存在。做抗体或者抗原等都不会对免疫有影响的，如有你的里面其他杂蛋白多的话，建议先做蛋白纯化（亲和纯化，分子筛都可，一般的亲和纯化，带有his标签或者GST标签都可到达最少85%以上的纯度）
抗体指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白.
载体,你说的是那种载体?生命科学载体有2种,一种是分布于膜上的载体蛋白,和物质运输有关.另一种是基因工程里面的携带外源DNA的一段DNA片段,例如质粒、噬菌体和动植物病毒.
所以,抗体全部是蛋白质,载体部分是蛋白质.

标签蛋白抗体是一类经过亲和纯化的小鼠单克隆抗体。用于检测各种商品化表达载体上的标签序列（如：MyC、His、GST、HA等），籍以分析检目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。
百度上的，，，，，搬运

小弟我最近在做Western，目的蛋白是一个加了6×His和Flag标签的融合蛋白，不过实验室还存有Anti-His抗体（并不是Anti-6×His抗体），就拿这个抗体跑了WB，但是内参什么的都很好，目的条带出不来，不知道是不是与一抗有关。

另外质粒转染细胞应该也没问题，设的阳性对照pGFP转染的荧光量很高（转染效率在90%左右），所以理论上讲蛋白表达和提取没有问题。

在这里先谢过！

最近要买GST标签抗体，但是看santa cruz的抗体有抗原表位，请问要考虑吗？为什么呢？
例如 GST (1-109):

•epitope corresponding to amino acids 1-109 mapping at the N-terminus of GST of Schistosoma japonicum origin
•recommended for detection of GST fusion proteins and glutathione-S-transferase (GST) of Schistosoma japonicum origin by WB, IP, IF and ELISA
还有Schistosoma japonicum origin 跟我载体pGEX4T-1表达的融合蛋白可用Western Blot吗?它们有什么关系？
十分感谢

并不是必须的，加标签一个重要原因就是方便在蛋白水平检测目的基因表达。如果目的基因编码蛋白有现成的抗体，就不用加标签，如果没有现成的抗体，加上标签后就可以用与目的基因融合的标签蛋白抗体检测目的蛋白表达，不需要再合成目的蛋白的抗体，方便且廉价。标签一般都是经过广泛使用的，如果有问题就不会一直被使用了。

我买的santa crua的抗体sc-7787（FLAG标签抗体），做western，结果融合蛋白用目的蛋白的抗体能检测出来。用FLAG标签抗体就做不出来，这应该说明抗体不行吧，santa crua得是不是很差阿？DAB显色，操作没问题。
有用过FLAG标签抗体的高手们来指点下，FLAG标签抗体那个公司的效果好啊，我准备买。
同时希望能提供宝贵意见。
谢谢各位阿

标签抗体，别名为抗原表位，又称抗原决定簇，是抗原分子中决定抗原特异性的特殊区域或基团，是与抗体特异性结合的结构或序列。向左转|向右转

所谓的肽序列标签就是指那些分子量小，不影响介导蛋白活性的多肽。这些多肽通常具有免疫反应性及其他功能。在生命科学研究中，常制备他们的抗体进行反应如我们常见的WB等。这种方法一般在目标蛋白的抗体无法制备时，有肽标签标记目标蛋白然后用肽序列标签的抗体进行免疫检测。常见的标签有Flag,Gst,His，HA等。

一、血清样品采集和处理：
　　对于艾滋病和HIV感染的诊断，血清样品检测HIV抗体。可用真空采血管采血5—10ml（确定采样量）静脉血，室温下自然放置1—2h，待血液凝固后用3000rpm，离心15分钟，吸取血清HIV抗体检测。血清样品置2—8℃冰箱保存7天。
　　若用检测试剂检测HIV抗体，也可用末梢全血，成人、儿童或幼儿可选择中指、无名指采集、足跟部位采血。采血部位用75%酒精或碘伏认真消毒皮肤，用EDTA毛细管吸取血样。采血结束后，彻底止血，完成后的穿刺针头丢弃于耐穿透的容器内，妥善处理，严防职业暴露损伤。
　　采集血浆或全血应实验项目要求选用的抗凝剂，CD4/CD8+T淋巴细胞测定可选用EDTA或肝素。本实验室完成的实验尽早完成，完成检测项目，采集后在规定限时内及时送到，避开采集不当、暂存环境与时间的延误等因素而影响检测结果，如要检测CD4/CD8+T淋巴细胞测定的样品应选择合适的抗凝剂， 血样检测抗凝剂用EDTA（5 ml）若用EDTA钾盐血样品应在30h以内，尽早（8h以内）处理用ACD或肝素抗凝，血样在48h以内，尽早（8h）处理。静脉采集血样运用EDTA钾盐真空管，采集后立即颠倒混匀8--10次，使血液与抗凝剂混匀，对样品编号、日期、采集时间。
　　二、样品的保存：
　　用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放在-20℃，短期在一周内检测的样品可存放于2-8℃。HIV检测阳性血清样品可保存至少十年。艾滋病筛查实验室存放阳性血清，阳性血清有资质的实验室可存放（确认艾滋病实验室）用于CD4/CD8+T淋巴细胞测定样品采集时
间超过48小时则检测。HIV检测阳性反应血清样品均保有着艾滋病检测确认实验室，，在HIV阳性反应血清样品较多的地区，艾滋病检测确认实验室应配置-20℃的低温冰箱和-80℃的超低温冰箱保存。
　　三、样品的运送：
　　确认阳性反应的血清或血浆，应WHO的三级包装系统。层容器：装样品、防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上有明确的标记、受检者的姓名、种类和采集时间。在试管周围应垫有缓冲吸水，以防碰碎。随样品应附有送检单。要填写送检单种类信息，分开放置。层容器：要求耐受性好的、防渗漏、容纳保护层容器，容器便于消毒处理。层容器：是运输用于外层包装内，应易于消毒。在层容器外面要贴有标签（注明数量、收样单位等内容）血清或血浆样品应在2--8℃条件下专人运送。
　　检测检测CD4/CD8+T淋巴细胞测定的清或血浆温样品应在室温下（18--23℃）运送。但三级包装要求将盛样品的试管放好，避开使用玻璃容器，以保证不会破碎和渗漏。运送要有感染防护措施。
　　四、样品的接收
　　在有感染源设备的实验室内由经过培训、则在生物安全柜中戴手套、口罩、戴防护衣、带防护眼镜、的工作人员打开，用后的包裹应消毒。认真核对样品盒送检单、检查样品有无破损和渗漏，如渗漏立即将存留的样品移出，对样品管和渗漏消毒，检查样品情况，有无溶血、微生物污染、血脂过高及黄疸等情况，污染或溶血等情况样品被接受，则应将样品安全废弃，并要将样品情况立即通知送样人或单位。打开标本容器时要小心，以防皮肤或粘膜污染，以防内容物泼溅。
aware天猫唾液检测不用抽血！

最近在构建一个过表达质粒，载体是pef-flag。基因测序是完全正确，WB检测有flag的条带，但是用内源性抗体杂空载和过表达的变化基本没有，所以这个是否已经过表达了？坛友们是否遇到过这种情况？