Purified Anti-PtdIns(3,4,5)P3 monoclonal antibody conjugated with fluorescein.Subclass: IgMSource: MouseApplications: ELISA, Immunofluorescence
Product Background:Phosphoinositides (PIPns) are minor components of cellular membranes but are integral signaling molecules for cellular communication. Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate (PIP3), formed from PI(4,5)P2 though phosphorylation by PI 3-kinase, activates numerous signaling pathways resulting in cell proliferation, growth, survival, glucose transport and protein synthesis. High PIP3 levels from disregulation of PI3-K have been demonstrated in cancer and inflammatory diseases. PIP3 is hydrolyzed by the phosphatases PTEN to PI(4,5)P2 and SHIP to PI(3,4)P2.
Storage
Protect from light. 2-8 °C for up to 30 days, -20 °C for greater than 30 days. Do not freeze thaw multiple times.
Featured in Publications
1) Vedham, V., H. Phee, et al. (2005). “Vav activation and function as a rac guanine nucleotide exchange factor in macrophage colony-stimulating factor-induced macrophage chemotaxis.” Mol Cell Biol 25(10): 4211-20.2) Gupta, S., A. R. Ramjaun, et al. (2007). “Binding of ras to phosphoinositide 3-kinase p110alpha is required for ras-driven tumorigenesis in mice.” Cell 129(5): 957-68.3) Lin, H. V., L. Plum, et al. (2010). “Divergent Regulation of Energy Expenditure and Hepatic Glucose Production by Insulin Receptor in Agouti-Related Protein and POMC Neurons.” Diabetes 59(2): 337-346.
Product keywords: PIP3, PI(3,4,5)P3, PtdIns(3,4,5)P3, IgM, anti-PIP3
Documents
Technical Data Sheet
| Categories | Antibodies & Proteins |
|---|---|
| Filter | Antibody, Fluorescent, Lipid Binding, PI(3,4,5)P3 |
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求速度考试，简答
1） 物素N—羟基丁二酰亚胺酯（biotinyl-N-hydroxy-succinnimideBNHS）制备：
取物素1g混悬于12 mlN,N-二甲基甲酰胺(DMF)加0．6g N-羟基丁二酰亚胺(HOSU)0. 8 g二环基碳二亚胺(DCC)置于密闭容器内室温磁力搅拌作用夜滤滤液经旋转蒸干加10mL乙醚洗涤继加200 ml异丙醇使其重结晶获白色粉末状晶体
BNHS酯键-C=0基团与蛋白质赖氨酸氨基结合使物素标记蛋白含赖氨酸残基越或蛋白质等电点pI 6.0其标记效越BNHS适用于标记抗体及性偏碱性抗原
现配现用
链接很容易，就用EDC或者CMC等碳二亚胺，是最容易在羧基和氨基之间催化形成酰胺键，反应条件就是0到4度，过夜，用磁力搅拌子温和搅拌，pH<7反应快，不过pH=7或稍微pH>7也关系不大。EDC或者CMC等碳二亚胺催化活性极高，而且一般的蛋白质的分子表面总有Lys,Arg,Asn,Gln，所以游离在分子表面的羧基和氨基总是不少的，参与反应的两种蛋白质用大致10：1的比例混合（哪种蛋白质便宜，哪种蛋白质的物质的量就大些，但是这不是全部原因），反应样品浓度就按照平时使用时的浓度或略微更低浓度（别用储存液的浓度）即可。很容易反应，而且EDC或者CMC等碳二亚胺是零臂连接试剂，用于空间位阻，形成多分子交联可能较小，即使形成了也很容易用分子筛层析按照分子量区分开。
参与反应的两种蛋白质用大致10：1的比例混合（哪种蛋白质便宜，哪种蛋白质的物质的量就大些，但是这不是全部原因），为了避免两种蛋白质之间发生交联成为串联，因为一种蛋白质形成串联的可能性低一些；即使要形成串联的蛋白质串珠，最好也不要是价格高的那种；另外，EDC或者CMC等碳二亚胺催化活性极高，室温下即会催化，所以要在0到4度，过夜，用磁力搅拌子温和搅拌，一方面避免碳二亚胺催化活性太高形成串联的蛋白质串珠，另一方面，保护蛋白质不变性；反应样品浓度就按照平时使用时的浓度或略微更低浓度（别用储存液的浓度）即可，为什么？因为浓度高了更易形成串联的蛋白质串珠结构，浓度低了，没有反应成功，通过分子筛层析还可以分离出来接着连接，如果形成了酰胺键再要专一性切开就没有那么容易了。
SP法是生物素-卵白素系统：生物素为一种小分子维生素，卵白素又称为抗生物素，SP法的染色步骤为一抗～生物素化二抗～ABC复合物～DAB显色，其中ABC复合物是由一分子抗生物素蛋白与三分子结合有HRP的生物素组合成的复合物。
PV法属于非生物素系统免疫组化方法，应该是称为二步法，是以高分子的葡聚糖为载体将多个二抗分子和酶结合在一起，代替了传统的二抗和三抗，是检测变得简单而且增加了敏感性。
叶酸和生物素都属于B族维生素,
对维持机体的生理功能有重要作用。
