请使用支持JavaScript的浏览器! +,Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody (#AAR-012-AG) from Alomone Labs is a highly specific fluorescent rabbit polyclonal Ab. Ideal for experiments requiring simultaneous labeling of different markers. Control antigen includ蚂蚁淘商城
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Discovery Antibodies/Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody/50 µl/AAR-012-AG-50 µl
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Discovery Antibodies/Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody/50 µl/AAR-012-AG-50 µl
品牌 / 
Discovery
货号 / 
AAR-012-AG-50µl
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4000-520-616
Cat#:AAR-012-AG
AlternativeNameAT2 Receptor,AT2R,AGTR2,MRX88
  • LyophilizedPowder
  • AntigenIncl.
  • Type:Polyclonal
    Host:Rabbit
    Reactivity:m,r
      • PeptideDNLNATGTNESAFNC,correspondingtoaminoacidresidues21-35ofratAT2receptor(AccessionP35351).Extracellular,N-terminus.
        Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody
    Accession(Uniprot)NumberP35351
    GeneID24182
    PeptideconfirmationConfirmedbyaminoacidanalysisandmassspectrometry.
    HomologyMouse-identical.
    RRIDAB_2039724.
    PurityAffinitypurifiedonimmobilizedantigen.
    FormLyophilizedpowder.Reconstitutedantibodycontainsphosphatebufferedsaline(PBS),pH7.4,1%BSA,0.05%NaN3.
    IsotypeRabbitIgG.
    SpecificityWillnotrecognizehumanAT2Receptor.
    LabelATTO-488.Maximumabsorption501nm;maximumfluorescence523nm.Thefluorescenceisexcitedmostefficientlyinthe480–515nmrange.Thislabelisanalogoustothewellknowndyefluoresceinisothiocyanate(FITC)andcanbeusedwithfilterstypicallyusedtodetectFITC.
    StoragebeforereconstitutionTheantibodyshipsasalyophilizedpowderatroomtemperature.Uponarrival,itshouldbestoredat-20°C.
    Reconstitution50µldoubledistilledwater(DDW).
    Antibodyconcentrationafterreconstitution1mg/ml.
    StorageafterreconstitutionThereconstitutedsolutioncanbestoredat4°C,protectedfromthelight,forupto1week.Forlongerperiods,smallaliquotsshouldbestoredat-20°C.Avoidmultiplefreezingandthawing.Centrifugeallantibodypreparationsbeforeuse(10000×g5min).
    NegativecontrolantigenstoragebeforereconstitutionLyophilizedpowdercanbestoredintactatroomtemperaturefor2weeks.Forlongerperiods,itshouldbestoredat-20°C.
    Negativecontrolantigenreconstitution100µldoubledistilledwater(DDW).
    Negativecontrolantigenstorageafterreconstitution-20°C.
    PreadsorptionControl1μgpeptideper1μgantibody.
    StandardqualitycontrolofeachlotWesternblotanalysis(unlabeledantibody,#AAR-012),andimmunohistochemistry(labeledantibody).
    Applications:ic,if,ih,lci
      • Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody
        ExpressionofAngiotensinIIreceptortype-2inratbrain
        Immunohistochemicalstainingofratfrozenfreefloatingbrain sectionsusingAnti-AngiotensinII ReceptorType-2(extracellular)-ATTO-488Antibody(#AAR-012-AG),(1:20).AT2receptor(green)wasdetectedinneuronsinthevicinityofthehypothalamicparaventricularnucleus(PVN).Insomeneurons(thickarrow),axonalprocesseswithvaricositieswereobserved(thinarrow).NucleiwerevisualizedwithDAPIcounterstain(blue).
        Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody
        Immuno-colocalizationofAT2 receptorandVGLUT2inratsupraoptichypothalamicnucleus
        Immunohistochemicalstainingofperfusion-fixedfrozenratbrainsectionsusing Anti-AngiotensinII ReceptorType-2(extracellular)-ATTO-488Antibody(#AAR-012-AG),(1:60)and Anti-VGLUT2-ATTO-594Antibody (#AGC-036-AR),(1:60).A.AT2 receptorstaining(green).B.VGLUT2staining(red).C.Mergeofthetwoimagesshowsagenerallackofco-localizationofAT2RandVGLUT2inthispartofthehypothalamus(arrow).CellnucleiarestainedwithDAPI(blue).
      • Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody
        ExpressionofAngiotensinIIreceptortype-2in mouse3T3-L1cells
        Cellsurfacedetectionof AngiotensinIIreceptortype-2inintactlivemouse3T3-L1cellswithAnti-AngiotensinIIReceptorType-2(extracellular)-ATTO-488 Antibody(#AAR-012-AG),(1:50),(green).Liveviewofthesamefieldwassuperimposedtothefluorescentone.
    References
    • 1.Mukoyama,M.etal.(1993)J.Biol.Chem.268,24539.
    • 2.deGasparo,M.etal.(2000)Pharmacol.Rev.52,415.
    • 3.Carey,R.M.andSiragy,H.M.(2003)Endocr.Rev.24,261.
      • AngiotensinIIreceptortype2orAT2 isoneofthereceptorsthatbindtheoctapeptidehormoneAngiotensinII(AngII).
         
        AngIIisthepeptidehormonethatgeneratesmostoftheknowneffectsoftherenin-angiotensinsystem(RAS).AngIIisgeneratedfromtheangiotensinogenproteinbytheactionsofrenin,angiotensinconvertingenzyme(ACE)andotherpeptidases.AngIIhasacentralroleincardiovascularhomeostasisbyregulatingvasoconstriction,renalNa+ andwaterreadsorption.Inaddition,AngIIinducescellgrowthandproliferationandhaspro-inflammatoryeffects.
         
        MostofthephysiologicalactionsofAngIIaremediatedbyAT1 amemberofthe7-transmembranedomain,Gprotein-coupledreceptor(GPCR)superfamily.AT2 isalsoaGPCR,and islargelybelievedtohavecounter-regulatoryrolestotheonesexertedthroughtheAT1 receptor.Hence,bindingofAngIItotheAT2 receptorwillresultingrowtharrestandapoptosis,vasodilatationandhypotension.
         
        AlthoughtheAT2 receptorisstructurallyamemberoftheGPCRsuperfamily,thesignalingmechanismselicitedfollowingAT2 receptoractivationarenotfullyclarified.RecentevidenceindicatesthattheAT2 receptorsignalsthroughtheGiα2 andtheGiα3 proteinsandthroughtheactivationofphosphotyrosinephosphatasessuchas SHP-1.
         
        AT2 receptordistributionismorerestrictedthanthatofthe AT1 receptor.ThehighestexpressionlevelsofAT2 havebeenfoundinthefetus,whichisfollowedbyamarkeddecreaseshortlyafterbirth.Nevertheless,significantAT2 receptorexpressioncanbedetectedintheheart,kidney,vascularendothelialcellsandbrain,amongothers.

    Applicationkey:

    CBE-Cell-basedELISA,FC-Flowcytometry,ICC-Immunocytochemistry,IE-IndirectELISA,IFC-Indirectflowcytometry,
    IF-Immunofluorescence,IHC-Immunohistochemistry,IP-Immunoprecipitation,LCI-Livecellimaging,N-Neutralization,WB-Westernblot

    Speciesreactivitykey:

    H-Human,M-Mouse,R-Rat
    Image&Title:

    Anti-Angiotensin II Receptor Type-2 (extracellular)-ATTO-488 Antibody
    Immuno-colocalizationofMelatoninReceptorType1BandAT2 Receptorinratbrain
    Immunohistochemicalstainingofperfusion-fixedfrozenbrainsectionsusing Anti-MelatoninReceptor1B(MTNR1B)Antibody (#AMR-032),(1:600)and Anti-AngiotensinIIReceptorType-2(extracellular)-ATTO-488 Antibody(#AAR-012-AG),(1:100).A.MTNR1Bstaining(red)(arrows).B.ThesamesectionlabeledforAT2receptor(green).C.Mergeofthetwoimagessuggestsconsiderableco-localizationintheparaventricularnucleus(arrows).Fororientation,notelocalizationwithrespectto3rd ventricle(3rd V).

    Lastupdate:10/11/2019

    Anti-AngiotensinIIReceptorType-2(extracellular)Antibody (#AAR-012)isahighlyspecificantibodydirectedagainstanextracellularepitopeoftheratprotein.The antibodycanbeusedinwesternblot,immunocytochemistryandimmunohistochemistryapplications.IthasbeendesignedtorecognizeAT2receptorfromratandmousesamples.Theantibodywon’trecognizehumanAT2R.

    Anti-AngiotensinIIReceptorType-2(extracellular)-ATTO-488Antibody(#AAR-012-AG)isdirectlylabeledwithanATTO-488fluorescentdye.ATTOdyesarecharacterizedbystrongabsorption(highextinctioncoefficient),highfluorescencequantumyield,andhighphoto-stABIlity.TheATTO-488labelisanalogoustothewellknowndyefluoresceinisothiocyanate(FITC)andcanbeusedwithfilterstypicallyusedtodetectFITC.Anti-AngiotensinIIReceptorType-2(extracellular)-ATTO-488AntibodyhasbeentestedinlivecellimagingandimmunohistochemicalapplicationsandisspeciallysuitedtoexperimentsrequiringsimultaneouslabelingofdifferentMarkers.

    Forresearchpurposesonly,notforhumanuse
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    维生素h药店有卖吗?123
    莪卟罹卟弃2021-07-27
    维生素H(Biotin)又名辅酶R、生物素,是一种水溶性B族维生素,为无色结晶性粉末。天然维生素H广泛存在于动物的肾、肝、胰等器官中以及蛋黄、酵母、牛奶中。近几年,国内外市场对维生素H的需求不断强劲增长,市场需求拉动了生产,我国维生素H的生产和出口大幅增加,市场前景十分广阔。
    河南省郑州市所以食品添加剂有限公司 维生素H1价格 [未实名认证] 国产 1*20 435 元/kg
    生物多糖抗菌含漱溶胶液是不是抗生物素
    化学发光法IgE1380.60
    生物素(biotin)是没有荧光的,但是亲和素(avidin)能与生物素结合,故荧光标记的亲和素能结合生物素并被激发出荧光。
    B7:又称生物素、辅酶R,是水溶性维生素,也属于维生素B族。它是合成维生素C的必要物质,是脂肪和蛋白质正常代谢不可或缺的物质。 相对分子量244.3 熔点39~48‘C为无色长针状结晶,具有尿素与噻吩相结合的骈环,并带有戊酸侧链,能溶于热水,不溶于有机溶剂,在普通温度下相当稳定,但高温和氧化剂可使其丧失活性。它存在于肝、蛋黄、奶、酵母等食物中。 生物素与酶结合参与体内二氧化碳的固定和羧化过程,与体内的重要代谢过程如丙酮酸羧化而转变成为草酰乙酸,乙酰辅酶A羰化成为丙二酰辅酶A等糖及脂肪代谢中的主要生化反应有关。它也是某些微生物的生长因子,极微量(0.005微克)即可使试验的细菌生长。例如,链孢霉生长时需要极微量的生物素。 人体每天需要量约100~300微克。生鸡蛋清中有一种抗生物素的蛋白质能和生物素结合,结合后的生物素不能由消化道吸收;造成动物体生物素缺乏,此时出现食欲不振、舌炎、皮屑性皮炎、脱毛等。然而,尚未见人类生物素缺乏病例,可能是由于除了食物来源以外,肠道细菌也能合成生物素之故。生物素是人体内多种酶的辅酶,参与体内的脂肪酸和碳水化合物的代谢;促进蛋白质的合成;还参与维生素B12、叶酸、泛酸的代谢;促进尿素合成与排泄。用于治疗动脉硬化、中风、脂类代谢失常、高血压、冠心病和血液循环障碍性的疾病。 用于化妆品,可提高血液循环在皮肤血管中的速度,在0.1%~1.0%的浓度范围内,易于配方中的油相相混合。在护肤雪花膏、运动药液、脚用止痛膏、刮胡须液、洗发液中均可使用。 动物肝脏、肾脏、鸡肉、猪肉、牛奶、蛋黄、木瓜、橘子、南瓜、糙米、小麦胚芽、酵母等。需要注意的是蛋黄中虽然富含维生素B7,但生蛋白会影响蛋黄中维生素B7的活性,所以最好煮熟之后在再食用。维生素B7对热不敏感,一般烹调不会损失。
    用封闭液 5%的脱脂牛奶,BSA 或者PBS, TBS都可以
    现配现用
    IgE是确诊过敏的唯一临床指标,人体的免疫细胞目前区分为三类,分别是TH1、TH2和Treg。在健康状态下,TH1和TH2会互相平衡,且共同受到Treg调控。当Treg调控能力不足时或接触到某些蛋白质或细小分子(尘螨花粉或海鲜等食物后,使TH2过度活化,导致 TH2细胞激素分泌量过高,就会帮助B细胞制造较多的过敏抗体IGE,因而出现过敏症状,康敏元抗过敏益生菌主要可调控因过敏而反应过高的TH2型细胞激素分泌量,进而调节免疫细胞活性平衡,可通过增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应的方法。
    【过敏性咳嗽血清学IGE检查】
    以过敏患者血清作为实验材料的本外试验方法称为血清学试验。其它体液如炎症部位分泌物、渗出物、灌洗液也可采用相同的实验方法进行检测。主要检测项目有总IgE和特异性IgE,即过敏原特异性IgE。
    【什么是总IgE?】
    IgE即免疫球蛋白E,是I型变态反应病如过敏性鼻炎、过敏性哮喘、异位性皮炎、湿疹、急慢性荨麻疹发病机制中起主要作用的免疫分子,因而在过敏反应的免疫学实验诊断中是首选的检测项目。总IgE是过敏性疾病的特异性检查项目,IgE水平增高提示I型变态反应病的可能性大,但不能用于判断过敏原。
    【IgE的特点】
    IgE是血清浓度最低的免疫球蛋白 ,只有血清中IgG浓度的万分之一。IgE对热不稳定,是半衰期最短一的免疫球蛋白 ,只有2.8天,与细胞表面结合的IgE半衰期稍长,8~14天,IgE由变应原入侵部位(鼻咽、支气管、胃肠道)的黏膜固有层中的浆细胞合成。在各类免疫球蛋白中,IgE是合成率最低、分解率最高的。属于亲细胞抗体,过敏体质者的胎儿脐带血中IgE浓度可能升高,检测脐血中IgE浓度可用于评估胎儿过敏体质的可能性。
    【IgE检测方法】
    通常用ELISA方法检测总IgE。由于血清IgE浓度很低,一般酶免疫试验方法的敏感性不足以检出血清IgE,现在常规实验室检测血清IgE的试剂盒采用生物素——抗生物素蛋白 放大的ELISA。试剂盒中所含用于制定标准曲线的IgE标准品和检测结果的IgE浓度单位与其它免疫球蛋白 不同,不是用mg/L表示,而是用u/ml或ku/l表示。
    【IgE的正常值(参考范围)】:
    血清IgE水平在正常人群中呈偏态分布,即多数人为0或接近于0,IgE水平越高的人数越少。因此计算平均值时应计算几何平均值才能反映其真实情况,即用对数转换后其分布才能近似正态分布。
    健康人群血清IgE水平与年龄关系较大,小儿和老年人的IgE水平低于成年人。新生儿血清中IgE水平很低,接近于零。随年龄增长,IgE水平也不断升高,5~7岁后接近正常人水平。按Pharmacia公司提供的参考范围,1个月以内<12KU/L,1岁<11KU/L,2~4岁<33KU/L,5岁以上至成人<85KU/L.
    过敏性疾病患者的血清IgE水平可达2000~8000KU/L,当IgE水平高于2000KU/L时应考虑寄生虫感染.
    有时血清总IgE水平检测结果为0或参考范围内低值,并不能排除过敏性疾病的可能,须结合临床表现和血清特异性IgE检测结果进行判断.
    【什么是特异性IgE检测(sIgE)?】
    通常所称的过敏原检测,并非真正检测血液样本中的过敏原分子,而是间接地检测其中针对某种过敏原的特异性IgE分子,特异性IgE检测实际上是检测过敏原特异性IgE,即检测样本中针对某种变应原的特异性IgE,从而间接地判断患者是否对某种过敏原过敏。
    环境中常见的过敏原包括以下类别:
    寄生虫和微生物:各种螨类(屋尘螨和粉尘螨等)、各种真菌(点青霉、烟曲霉、分枝孢霉、交连孢霉等)、蟑螂。
    植物花粉:各种草花粉(豚草、葎草、蒿草)、各种树花粉(桑树、柏树、悬铃木、桦树、榆树、柳树、杨树等)。
    动物皮毛:猫、狗、马、鸽子等动物的毛和皮屑。
    生物素——亲合素原抗在实际应用中有巨大优势主要体现在哪些方面?
    求速度考试,简答
    生物素标记蛋白操作方法123
    43316俪烈2018-01-07
    物素预先化通噻吩环戊酸侧链羧基与抗体、酶等物酰胺键偶联化物素制备获高敏度BAS制剂关键环节用几种:
    1) 物素N—羟基丁二酰亚胺酯(biotinyl-N-hydroxy-succinnimideBNHS)制备:
    取物素1g混悬于12 mlN,N-二甲基甲酰胺(DMF)加0.6g N-羟基丁二酰亚胺(HOSU)0. 8 g二环基碳二亚胺(DCC)置于密闭容器内室温磁力搅拌作用夜滤滤液经旋转蒸干加10mL乙醚洗涤继加200 ml异丙醇使其重结晶获白色粉末状晶体
    BNHS酯键-C=0基团与蛋白质赖氨酸氨基结合使物素标记蛋白含赖氨酸残基越或蛋白质等电点pI 6.0其标记效越BNHS适用于标记抗体及性偏碱性抗原
    抽血检测,一般用三代酶联合免疫法 酶联免疫法,简称ELISA。 它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。 步骤:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清(这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因,其实是误会)。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲,如果第一次检测为阳性的话,无论是哪个实验室,必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测,第二次的方法必须与第一次的不同,如还是阳性,将送确认实验室确认。有的医院很不负责,将初筛阳性的报告发出后就不管了,这是不对的。必须经过确认实验室确认后才可出阳性诊断。祝大家。PS,第一次检测为阳性的话,一定要去确认实验室再做一次,勇敢的去面对,也许结果就不一样了。 基本原理是:①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:①固相的抗原或抗体,②酶标记的抗原或抗体,③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。 具体方法有: (一)双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下: (1)将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。 (2)加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 (3)加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。 (4)加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 根据同样原理,将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物,即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 (二)双位点一步法 在双抗体夹心法测定抗原时,如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体,则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步(图15-5)。这种双位点一步不但简化了操作,缩短了反应时间,如应用高亲和力的单克隆抗体,测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。 在一步法测定中,应注意钩状效应(hookeffect),类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物,所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 (三)间接法测抗体 间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体,故称为间接法。操作步骤如下: (1)将特异性抗原与固相载体连接,形成固相抗原:洗涤除去未结合的抗原及杂质。 (2)加稀释的受检血清:其中的特异抗体与抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合,在洗涤过程中被洗去。 (3)加酶标抗抗体:与固相复合物中的抗体结合,从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体,可用酶标羊抗人IgG抗体。 (4)加底物显色:颜色深度代表标本中受检抗体的量。 本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。 (四)竞争法 竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。操作步骤如下: (1)将特异抗体与固相载体连接,形成固相抗体。洗涤。 (2)待测管中加受检标本和一定量酶标抗原的混合溶液,使之与固相抗体反应。如受检标本中无抗原,则酶标抗原能顺利地与固相抗体结合。如受检标本中含有抗原,则与酶标抗原以同样的机会与固相抗体结合,竞争性地占去了酶标抗原与固相载体结合的机会,使酶标抗原与固相载体的结合量减少。参考管中只加酶标抗原,保温后,酶标抗原与固相抗体的结合可达最充分的量。洗涤。 (3)加底物显色:参考管中由于结合的酶标抗原最多,故颜色最深。参考管颜色深度与待测管颜色深度之差,代表受检标本抗原的量。待测管颜色越淡,表示标本中抗原含量越多。 (五)捕获法测IgM抗体 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在,后者会干扰IgM抗体的测定。因此测定IgM抗本多用捕获法,先将所有血清IgM(包括异性IgM和非特异性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再测定特异性IgM。操作步骤如下: (1)将抗人IgM抗体连接在固相载体上,形成固相抗人IgM。洗涤。 (2)加入稀释的血清标本:保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获。洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分。 (3)加入特异性抗原试剂:它只与固相上的特异性IgM结合。洗涤。 (4)加入针对特异性的酶标抗体:使之与结合在固相上的抗原反应结合。洗涤。 (5)加底物显色:如有颜色显示,则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在,是为阳性反应。 (六)应用亲和素和生物素的ELISA 亲和素是一种糖蛋白,可由蛋清中提取。分子量60kD,每个分子由4个亚基组成,可以和4个生物素分子亲密结合。现在使用更多的是从链霉菌中提取的链霉和素(strepavidin)。生物素(biotin)又称维生素H,分子量244.31,存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物,生物素-羟基琥珀亚胺酯(biotin-hydroxysuccinimide,BNHS)可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。亲和素与生物素的结合,虽不属免疫反应,但特异性强,亲和力大,两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置,可以连接更多的生物素化的分子,形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来,就可大提高ELISA的敏感度。 亲和素-生物素系统在ELISA中的应用有多种形式,可用于间接包被,亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素,原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合,通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量,而且使其结合点充分暴露。另外,在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代,然后连接亲和素-酶结合物,以放大反应信号。
    先用限制性内切酶在DNA上切出两个粘性末端,然后在DNA连接酶的配合下用与这个粘性末端相配的有标志性的(可以是放射性和荧光性等同位素一般属于放射性)DNA片段标记出来,简单地说就是这样~
    帮忙解答下哈,多谢拉!