Product Specifications: Item# 1001-B: Biotin rgp120 HIV-1 IIIB Mass/Vial: 50µg Vol./Vial: 50ul Diluent: PBS+ 0.2% BSA, pH 7.5 Stabilizer: BSA Preservative: 0.1% NaN3 Storage: 4°C Stability: 6 Months Minimum Dilution:1 : 2,000 Application: T-Cell Research, Diagnostics, ELISA, Western ELISA, Drug Screening. Description: Biotin conjugated to rgp120 HIV-1 IIIB. Coupling Ratio: Approximately 5-20 moles of biotin per mole gp120. Specificity: Biotin gp120 binds to Murine and Human Anti-gp120 mAbs as determined by strepavidin-HRP ELISA and Western ELISA assays. Biological Activity: Biotin gp120 binds to solid phase CD4 as determined by capture ELISA using strepavidin-HRP as a secondary reagent. Application and Instructions for use Recommended concentrations for use are approximate values. A dose dependent response assay should be performed to determine the optimal concentration for use in specific applications. 1. ELISA may be performed in 1 : 10,000 dilution range depending on the concentration of the test ligand and specificity and sensitivity of the secondary reagents. gp120/CD4 capture ELISA may be performed in 100ng CD4 in solid phase and 0.1-10ng of biotin-gp120. |
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1) 物素N—羟基丁二酰亚胺酯(biotinyl-N-hydroxy-succinnimideBNHS)制备:
取物素1g混悬于12 mlN,N-二甲基甲酰胺(DMF)加0.6g N-羟基丁二酰亚胺(HOSU)0. 8 g二环基碳二亚胺(DCC)置于密闭容器内室温磁力搅拌作用夜滤滤液经旋转蒸干加10mL乙醚洗涤继加200 ml异丙醇使其重结晶获白色粉末状晶体
BNHS酯键-C=0基团与蛋白质赖氨酸氨基结合使物素标记蛋白含赖氨酸残基越或蛋白质等电点pI 6.0其标记效越BNHS适用于标记抗体及性偏碱性抗原
河南省郑州市所以食品添加剂有限公司 维生素H1价格 [未实名认证] 国产 1*20 435 元/kg
叶酸和生物素都属于B族维生素,
对维持机体的生理功能有重要作用。
现配现用
链接很容易,就用EDC或者CMC等碳二亚胺,是最容易在羧基和氨基之间催化形成酰胺键,反应条件就是0到4度,过夜,用磁力搅拌子温和搅拌,pH<7反应快,不过pH=7或稍微pH>7也关系不大。EDC或者CMC等碳二亚胺催化活性极高,而且一般的蛋白质的分子表面总有Lys,Arg,Asn,Gln,所以游离在分子表面的羧基和氨基总是不少的,参与反应的两种蛋白质用大致10:1的比例混合(哪种蛋白质便宜,哪种蛋白质的物质的量就大些,但是这不是全部原因),反应样品浓度就按照平时使用时的浓度或略微更低浓度(别用储存液的浓度)即可。很容易反应,而且EDC或者CMC等碳二亚胺是零臂连接试剂,用于空间位阻,形成多分子交联可能较小,即使形成了也很容易用分子筛层析按照分子量区分开。
参与反应的两种蛋白质用大致10:1的比例混合(哪种蛋白质便宜,哪种蛋白质的物质的量就大些,但是这不是全部原因),为了避免两种蛋白质之间发生交联成为串联,因为一种蛋白质形成串联的可能性低一些;即使要形成串联的蛋白质串珠,最好也不要是价格高的那种;另外,EDC或者CMC等碳二亚胺催化活性极高,室温下即会催化,所以要在0到4度,过夜,用磁力搅拌子温和搅拌,一方面避免碳二亚胺催化活性太高形成串联的蛋白质串珠,另一方面,保护蛋白质不变性;反应样品浓度就按照平时使用时的浓度或略微更低浓度(别用储存液的浓度)即可,为什么?因为浓度高了更易形成串联的蛋白质串珠结构,浓度低了,没有反应成功,通过分子筛层析还可以分离出来接着连接,如果形成了酰胺键再要专一性切开就没有那么容易了。

