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Key Benefits
- Cell permeability allow direct measurement of apoptosis and mitochondrial potential in live cells.
- Applications – Cells can be analyzed by Flow Cytometry, Fluorescent plate reader or Fluorescent microscopy.
- Incubate for 15 minutes, wash and measure.
- Add this reagent directly to live cells in your media of choice.
Additional information
| Kit Size | 100 |
|---|
Detection of the mitochondrial permeability transition event provides an early indication of the initiation of cellular apoptosis. This process is typically defined as a collapse in the electrochemical gradient across the mitochondrial membrane, as measured by the change in the membrane potential (YD). Loss of mitochondrial (YD) is indicative of apoptosis and can be detected by a unique fluorescent cationic dye, 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl- benzamidazolocarbocyanin iodide, commonly known as JC-1. This dye has been incorporated into the user-friendly kit for the simple and reproducible detection of the membrane potential (YD) event in apoptotic cells. The kit has been formatted for use on Flow cytometers, Fluorescent plate readers and Fluorescent Microscopes
Fig (A). Jurkat cells were cultured with DMSO for 2 hours. Cells were then stained with JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit for 15 minutes and analyzed by flow cytometry.
Fig (B). urkat cells were cultured with staurosporine for 2 hours. Cell were then stained with JC-1 Mitochondrial Membrane Potential Detection Kit for 15 minutes and analyzed by flow cytometry.
| Document Title |
| JC1Protocol |
| JC1 Datasheet |
| msds.JC100 |
| Title | File | Link | Author(s) | Journal | Year; Edition:Pages |
| http://www.jem.org/cgi/content/full/199/4/547 | http://www.jem.org/cgi/content/full/199/4/547 | ||||
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| SGLT-1-mediated glucose uptake protects intestinal epithelial cells against LPS-induced apoptosis and barrier defects: a novel cellular rescue mechanism? | http://www.fasebj.org/cgi/content/abstract/19/13/1822 | Linda C. H. Yu Andrew N. Flynn, Jerrold R. Turner and Andre G. Buret | The FASEB Journal | 2005;19:1822-1835 | |
| Ceramide induces mitochondrial abnormalities in insulin-secreting INS-1 cells: Potential mechanisms underlying ceramide-mediated metabolic dysfunction of the β cell | http://www.springerlink.com/content/t3g0p313518r2747/ | R. Veluthakal, R. Palanivel Y. Zhao, P. McDonald, S. Gruber and A. Kowluru | Apoptosis Journal | Vol 10/No 4, Aug 2005 | |
| Opposing effects of bovine papillomavirus type 1 E6 and E7 genes on Fas-mediated apoptosis | http://www.nature.com/onc/journal/v24/n24/abs/1208542a.html | Yun Liu, Zhiguo Liu, Hua Gao, You Zhou, Elliot J Androphy and Jason J Chen | Oncogene | (March 2005) 24, 3942–3953 | |
| Resveratrol-caused apoptosis of human prostate carcinoma LNCaP cells is mediated via modulation of phosphatidylinositol 3"-kinase/Akt pathway and Bcl-2 family proteins | http://mct.aacrjournals.org/cgi/content/abstract/5/5/1335 | Moammir H. Aziz,Minakshi Nihal, Vivian X. Fu, David F.Jarrard and N Ahmad | Mol Cancer Ther | 2006;5:1335-1341 |
| Reference |
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| Part# | Reagent | Temperature |
| Part# 4001 | Lyophilized JC-1 Dye | Store at 2-8C |
| Part# 3002 | 10X Assay Buffer | Store at 2-8C |
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半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。
定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。
荧光定量PCR较普通PCR不同的一点就是可以实时检测PCR扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?
核酸扩增是核酸分子诊断的关键技术。根据核酸扩增反应中温度变化要求,可以将核酸扩增技术分为两大类:一类是PCR核酸扩增技术,另一类是核酸恒温扩增技术。
PCR技术是指通过控制温度的变化来实现DNA扩增的三个步骤:模板变性(如95℃)-引物杂交(如58℃)-DNA合成(如72℃)。这种温度变化的循环重复(如重复35次)过程通常由精密而复杂的仪器(PCR仪)来控制。核酸恒温扩增技术(NucleicAcidIsothermalAmplification,NAIA)则是扩增反应的全过程均在同一温度下进行,不须象PCR反应那样需要经历几十个温度变化的循环过程。这一特点使得它们对扩增所需仪器的要求大大简化,反应时间大大缩短,因而具有巨大的应用价值,成为分子诊断行业发展中的热点。
目前的NAIA技术主要有滚环扩增技术(RollingCircleAmplification,RCA)、转录酶扩增技术(TranscriptionMediatedAmplification,TMA)、依赖核酸序列扩增技术(NucleicAcidSequenceBasedAmplification,NASBA)、链置换扩增技术(stranddisplacementamplification,SDA)、环介导的等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)、解链酶扩增技术(HelicaseDependentAmplification,HDA)。上述各种核酸扩增技术均由国外公司所拥有。
交叉引物扩增技术(CrossingPrimingAmplification,CPA)是完全由优思达公司独立研发成功的一种新的核酸恒温扩增技术,也是中国首个具有自主知识产权的核酸扩增技术。CPA与优思达公司其他技术相结合(如快速核酸提取技术、核酸试纸条检测技术等),形成一个完整的现场快速分子检测平台,可以开发出众多恒温扩增检测试剂盒,广泛应用于分子诊断、防疫检疫、生物医学研究、个体化治疗等领域。该技术已申请中国和美国发明专利,在美国《MolecularDiagnostics》等杂志发表论文二篇,并通过了比尔?盖茨基金会资助申请。
CPA扩增体系中除包含具有链置换功能的BstDNA聚合酶外,还主要包括扩增引物和两条交叉引物。这些寡聚核苷酸链能依靠BstDNA聚合酶的高活性的链置换特性,使DNA的循环扩增能不断的实现。CPA扩增主要包含以下几个步骤:
交叉正向引物CPF中的PFs与模板DNA中PFa互补,启动DNA合成,使得PRa被引入到所扩增的产物中;
外围引物DP1s与PFa前端DP1a序列互补,通过链置换型DNA聚合酶向前延伸,一边置换CPF合成的能与CPR和DP2a结合的单链产物(结构3),一边与模板DNA形成双链产物(结构2);
在结构3中,DP2a通过链置换型DNA聚合酶向前延伸,置换出由CPR所延伸的单链产物(结构5),同时合成与步骤2中由CPF延伸所产生单链DNA形成双链产物(结构4),而结构5相对起始的DNA模板,多了PRs和PFs两个片段序列;
单链结构5中的3’端的PFa和PRs可分别与CPF中的PFs和CPR中的PRa互补结合,可在链置换型DNA聚合酶的作用下延伸和置换出相应的单链产物。延伸产物相对结构5来说又增加了一个PFs区域(结构8);
因此,扩增引物CPF和CPR的不断杂交和延伸,不仅使得结构5的长度不断的加长,从而引入更多CPF和CPR3’端互补区域,同时也置换出了各种可与CPF和CPR3’端互补的单链产物;
通过CPF和CPR的不断杂交延伸和DNA聚合酶的链置换作用,使得DNA拷贝数不断的增加,从而达到基因扩增的效果。
使用本装置提取临床生物样品的核酸成本低廉,只需几分钟,可以应用于现场检测或实验资源较少的基层医院和经济不发达地区;同时也可以满足大医院特定情况下的需求,如急诊或床边的核酸快速诊断。该技术已申请发明专利,并取得盖茨基金会研发资助。
CPA基本原理如下:
图2CPA扩增的反应原理图
与目前广泛使用的荧光PCR技术相比较,CPA技术有以下几个优点:
反应速度快:反应时间约1小时,使试剂盒可用于检验检疫、突发性传染病的检测与监控现场检测或医院的床边诊断(Point-of-Testing,POCT);
检测成本低:目前荧光光定量PCR仪价格昂贵,无法在很多中小医院普及。CPA扩增只需要离心机和一台简单的恒温装置,如普通的水浴锅、金属浴,即可进行扩增。
操作简单:对操作人员的技能要求不高,绝大多数人通过简单培训或自学都可掌握,为核酸检测试剂的广泛应用创造了条件。
在科学研究中细胞培养等技术已是相当成熟,可对细胞的状态完全无保留的呈现给研究者是一直以来的难点。不过,现在一种新的成像技术的出现,给研究者们带来了曙光,那就是全息成像技术,前期这种技术大多应用在摄影方面,目前瑞典Phiab公司采用这种全息技术新开发出HoloMonitorTMM4激光全息成像及分析系统,成功将这种高新技术应用到生命科学领域。
那这位新晋之主能为我们带来哪些惊喜呢?
1,长期、非侵入性细胞检测
M4是采用物理干涉成像技术,实现了对细胞非侵入、无标记性的观察,最大程度地体现细胞的真实状态,并可以排除实验处理的假阳性。在系统的分析软件中,可以对观察细胞实现3D重建,并对图片添加伪彩,增加细胞与背景的对比度,让你实验图片焕然多彩,不再只是黑或白。
2,细胞追踪
M4可以对细胞进行长时间延时拍摄,实现细胞边培养边拍摄,自动记录细胞的运动性。目前在许多科学研究中,细胞运动性,细胞迁移率是判断细胞敏感性的重要指标,在M4系统中不仅可以获得细胞长时间的形态上的直观图片,同时,分析软件中的Trackcells可以给予单细胞,多细胞的运动轨迹,迁移方向,迁移距离等多种数据,避免了你在实验之后的数据统计和数据分析过程,真可谓是省时省力。
3,数量统计
M4分析系统中采用细胞分割识别的方法,可以进行多种统计方法的细胞识别。(也可以进行手动调节哦!)根据采集图像区域与培养皿体积的相关性,对整个培养皿的细胞数量进行统计。除此之外,系统会自动生成任一细胞参数的数量统计柱形图,比如细胞体积的柱状图即不同细胞体积下的细胞数量分布。
4,形态学分析
形态学分析是M4系统中相当强大的功能。无论是实时成像还是延时成像,对图片中每个细胞的各个形态参数都有记录,如:体积、面积、最大厚度、平均厚度、周长、不规则度等。软件中Analyzecell可以对细胞参数之间的相互关系及细胞的分布情况直接输出散点图,研究者同时可以对散点图进行标记,记录实验所需的实验分析区域。并对每个区域又仅进行细胞形态学及统计学分析。该功能对细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等领域有很好的应用。
5,数据输出
M4不仅可以输出图片也可以对延时拍摄图片制作成视频进行输出,更加直观的对细胞形态及细胞活动进行观察,为你的科研汇报更添佐证。
HoloMonitorTMM4激光全息成像及分析系统利用全息技术将细胞的每个点都几录下来,每个全息图中包含了图像中的全部数据,对于科研要求越来越严格的研究人员来讲,这无疑是细胞生物学的一个新的里程碑。
HoloMonitorTMM4激光全息成像及分析系统已经应用到了许多生命科学研究方面,如肿瘤侵袭与转移、细胞耐药性、纳米微阵列、混合纳米聚合物胶束、细胞周期、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、神经细胞观察等。目前研究者仍在挖掘M4的更多技术,更多应用、更多创新。
组织用Trizol法提取总RNA浓度、纯度都很好,但逆转录后跑PCR,CT值偏高,内参的在22-27之间,目的基因在30-36之间,不知道是怎么回事,如何来解决,求高手赐教。我用的Takara的试剂盒。

