【求助】请教pXJ41p21质粒扩增中新霉素的浓度
2021-07-23
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dxc75
用户
1.换用卡那霉素试试。25ug/ml，应该可以的。2.把菌液稀释不同浓度凃盘，有时太浓了也不长。即37℃摇1小时后，50ul涂一个，1ul加50ul水来再另涂一个。3.用另一个已知质粒作对照，看感受态细菌是否失效。
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louise3653
用户谢谢dxc75的精辟解答！我用的质粒是pXJ41-neo，应该用新霉素啊，为何卡那霉素也可以，在网上搜到一篇博士论文，也是pXJ41-p21，加的是氨苄青霉素100ug/ml，如果所用的是pXJ41-neo，那么以上三种霉素都可以使用了，照理说不同质粒应对应特定的抗生素啊，可否解释一下？
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dxc75
用户我仅是猜测而已。因为没有它的图谱无法知道是何种抗生素。但在细菌中多用氨苄青霉素或卡那霉素，没有见过用新霉素的。卡那霉素与新霉素是相同的基因序列，往往在真核细胞中表现新霉素抗性而在细菌中则以抗卡那霉素表现，如Cloncetech公司的真核表达系列。也有的质粒虽在真核细胞中表达新霉素抗性但在质粒本身又加入另一个在细菌中表达的抗氨苄青霉素基因，如Invitrogen公司的pCDNA3.1和Promega公司的pCI-Neo载体等。后两者在细菌的筛选就是氨苄青霉素了。在网上查不到你的pXJ41-neo图谱。你可以试一下卡那霉素和氨苄青霉素。其实很简单，做两个胶盘，一个涂点卡那霉素另一个涂点氨苄青霉素就行了。分别加菌后培养，大量出现菌落的就是相应抗生素的。
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