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SP6 RNA Polymerase
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2021-08-06
制备和纯化 mRNA 显示蛋白实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。<link rel="stylesheet" type="text/css" href="/ueditor/theme... 查看更多
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2018-12-26
Sucrose Density FractionationLEVEL II Figure 14.2 Sucrose gradient distribution of RNA Materials 10% and 40% (w/v) Sucrose 80.02 M sodium acetate, pH 5.1, cont 查看更多
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Quantization of gene expression requires that an accurate measurement of a specific transcript is made. In this paper, a quantitative reverse transcription-pol 查看更多
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2021-08-07
虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点，但并不推荐使用 poly(A)+RNA，因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸，并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2021-08-30
In-gel digestion protocol.pdf 查看更多
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2021-07-30
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可从各种样品中提取 RNA，且产量和质量非常稳定。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。 查看更多
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2018-12-26
Northern BlotI. Electrophoresisclean gel box with NaOH and/or SDS, 2 hours to overnight, rinse with water prepare Agarose gel solution [1 % Agarose, 1 x MOPS, 查看更多
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2018-12-26
Purification of poly(A)+ RNA from total RNA0. (Optional)Before using Oligotex-dT30, I recommend to wash Oligotex-dT30 to remove fine particle of latex. To wash 查看更多
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2021-09-06
我先说我有的质粒和菌株：PPIC9K，PPIC9，PPICZahphaA，B，C以及一个改造的PPIC9K载体，EcoRI和BamHI双酶切，C末端引入了一个6histag菌株：GS115，KM71，X33，以及十几个空载体对照菌株我的酵母表达Protocol：>10ug质粒用Sal线性化，加1/10体积的3M 查看更多
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DNA ultrapurificationThe success of DNA purification can have profound consequences on the success or failure of any injection effort. This summary of techniqu 查看更多
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2021-08-11
在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多
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2018-12-26
We routinely produce dsRNA by in vitro transcription of a PCR generated DNA template containing the T7 promoter sequence on both ends (I. Primer Designed dsRNA 查看更多
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《rna干扰》ppt课件123
zkk4042021-08-02
我自己看了几十篇文献后做的。应用方面主要是病毒学，有用你就顶一下。
RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
RNAi技术的原理与应用（一）.ppt(218.5k)
RNA提取中各种试剂的作用 123
guojing郭晶2021-07-25
Trizol法和试剂盒提取组织中的RNA，哪个方法更可靠和精确呢？谢谢！
求教,从少量RNA构建cDNA文库的方法 分子生物 综合其他...123
feijifeifei2021-07-26
TRIPURE REAGENT(TRIZOL总RNA提取试剂)123
lee康2017-10-03
TRIpure 试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。 无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIpure 试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIpure抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。 TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳A260/A280比值≥1.8。
"为了能及时给您提供服务，保证实验的顺利完成，请直接拨打电话或者发送企业邮件
北京博凌科为生物科技有限公司 -- 北京亦庄经济技术开发区康定街6号 "
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OMEGArna提取试剂盒中文说明总RNA提取 123
游客随风43yO2017-10-01
E.Z.N.A. Total RNA Kit I
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
Trizol(总RNA提取试剂)上海通蔚生物有限公司123
clf19922021-07-22
求助：最近要提取血浆中的RNA，不知道用哪种试剂好，查了好多资料，有用Trizol，TrizolLS，RNAisoBlood和天根。但我从没做过，求各位大神给点意见。提取的RNA用于qPCR。
用QIAGEN_RNeasy_Plant_Mini试剂盒提取总RNA(胍盐法)操...123
34534107812017-10-01
rn2502试剂盒提取rna还需要哪些试剂
准备RNA用的试剂：70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），DEPC处理后的水，新开封的三氯甲烷等，
容器：玻璃试剂瓶需要180度，8个小时以上烘烤
Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，20-40分钟）。
如果需要使用研钵和药品匙，研钵和药品匙也是需要180度，8小时以上的烘烤。
还需要没开封的手套，提取RNA时，尽量勤换手套，少说话，尽量不要对着样品吹气。
准备RNA用的试剂：70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），DEPC处理后的水，新开封的三氯甲烷等，
容器：玻璃试剂瓶需要180度，8个小时以上烘烤
Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，20-40分钟）。
如果需要使用研钵和药品匙，研钵和药品匙也是需要180度，8小时以上的烘烤。
还需要没开封的手套，提取RNA时，尽量勤换手套，少说话，尽量不要对着样品吹气。
试剂盒提取RNA123
妞YN4w2021-08-01
看是什么试剂盒，有一些试剂盒是有专门针对性提取的，比如是提取小RNA类的，或者是提取转录组RNA类的，都有，如果是一般的没有说明的那么是总RNA的
【求助】求真菌RNA提取试剂盒~那个厂家的性价比高呀~ 核酸基因...123
zhouqixian2021-07-20
想请问各位大神~哪个厂家的真菌RNA提取的试剂盒性价比高点呀~~本人毕业论文，想做基因表达的~~查了一下天根RNAprepPure植物总RNA提取试剂盒，跟生工的酵母总RNA快速抽提试剂盒与真菌总RNA快速抽提试剂盒，就想在这三个里面选~~但天根的比较贵呀~~生工的效果有不知道如何~？想问一下各位有木有用过这几个试剂盒的？那样好一点呀~~求回复~~~~谢谢各位了~
RNA提取?(RNA沉淀试剂是什么东西?) 核酸基因技术讨论版...123
wgqhappy2021-08-03
我在提一种植物的RNA用的是上海华舜生物公司的TRIZOL按照他上面的说明书，我应该用System4那种方法，可是里面要用到RNA沉淀试剂，不知道是什么东西，试剂盒只有一瓶，是RNAexReagent。其它的就没有了。不知道那东西是什么，要自己配吗？RNA沉淀试剂是什么东西？
【求助】天根RNA提取试剂盒DP419提出的蛋白可以做WB吗 核酸...123
deadbird12021-08-04
天根RNA试剂盒DP419提取的蛋白可以做WB吗：分三层后，上层是RNA，那个中间层的蛋白怎么提出来纯化一下做WB？请高手解答，非常感谢！
OMEGA Total RNA 提取试剂盒中文步骤123
proteing2007-04-27
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