Overview:
TAK1 is a serine/threonine protein kinase that mediates signaling by TGFB and morphogenetic protein (BMP) (1). In response to IL-1, TAK1 forms a kinase complex with TAB1 and this complex is required for the activation of nuclear factor kappa B (NfkB). TAK1 can also activate MAPK8/JNK and MAP2K4/MKK4 and thus play a role in the cell response to environmental stress. Tak1 is essential for thymocyte development and activation and deletion of TAK1 prevents maturation of single-positive thymocytes displaying CD4 or CD8 (2). Thymocytes lacking TAK1 fail to activate NfkB and JNK and are prone to apoptosis upon stimulation.TAK1 is a serine/threonine protein kinase that mediates signaling by TGFB and morphogenetic protein (BMP) (1). In response to IL-1, TAK1 forms a kinase complex with TAB1 and this complex is required for the activation of nuclear factor kappa B (NfkB). TAK1 can also activate MAPK8/JNK and MAP2K4/MKK4 and thus play a role in the cell response to environmental stress. Tak1 is essential for thymocyte development and activation and deletion of TAK1 prevents maturation of single-positive thymocytes displaying CD4 or CD8 (2). Thymocytes lacking TAK1 fail to activate NfkB and JNK and are prone to apoptosis upon stimulation.
Gene Aliases:
3'-Tab1; MAP3K7IP1
Genbank Number:
NM_006116
References:
1. Yamaguchi, K. et al: Identification of a member of the MAPKKK family as a potential mediator of TGF-beta signal transduction. Science 270: 2008-2011, 1995. 2. Liu, H.-H. et al: Essential role of TAK1 in thymocyte development and activation. Proc. Nat. Acad. Sci. 103: 11677-11682, 2006.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
准备RNA用的试剂：70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），DEPC处理后的水，新开封的三氯甲烷等，
容器：玻璃试剂瓶需要180度，8个小时以上烘烤
Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，20-40分钟）。
如果需要使用研钵和药品匙，研钵和药品匙也是需要180度，8小时以上的烘烤。
还需要没开封的手套，提取RNA时，尽量勤换手套，少说话，尽量不要对着样品吹气。
总RNA提取试剂盒（TRIzol法）
RIpure试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后，样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA，在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIPURE试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIPURE抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
TRIpure试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
Trizol法和试剂盒提取组织中的RNA，哪个方法更可靠和精确呢？谢谢！
RNA提取对于科研人员来说并不陌生，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上，现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要，为什么往往提取的RNA却容易失败呢？
RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？
首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差。
其次，选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时，操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚氯仿抽提等步骤，简单快捷。组织或细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。
对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点，Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等）、富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌提取高纯度的TotalRNA，适用范围广泛。按照标准流程，本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂，无需额外购买其它试剂。
动物体内RNA转染试剂，核酸和转染试剂混合后注射，轻松进行RNA干扰，基因敲除、沉默实验，3天可得出结果。下面以50μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积200μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。
1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl，加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl，使葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl，充分混匀。
2.转染试剂的稀释。取25μl的Entranster-invivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释，并用纯水25μl补足，得到葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl液体，充分混匀。
3.转染复合物形成。立即将稀释后的转染试剂加入到稀释后的核酸溶液中，立即充分振荡混匀。
4.室温静置15分钟。配制好的转染复合物请即配即用，不宜长期存放。
5.动物注射。
说明：1).尾静脉注射时请掌握注射技巧，一般选用远端1/3处静脉注射，如感觉到阻力和轻微隆起，请停止注射，重新寻找静脉进行操作，不要强力推注，否则容易将药液注射在尾部，导致尾部溃烂。注射完成后移去针头，按压针孔10秒以上，防止药液流出。2).2.5mg/kg的给药剂量是起始给药剂量，如果动物可以耐受，可以按比例增加剂量，这样效果更好。3).局部注射，尽可能多注射药液，有利于提高转染效果。
6.基因表达检测。一般来说，根据注射方法和靶器官的差异，12-48小时后基因表达效果较好。
7.长期给药。一次给药检测的最佳时间是注射后12-48小时。如果需要维持长期效果，可以采用多次注射的方法，注射频度一般为每间隔2-3天一次，也可以根据实验情况适当延长至每7天一次。
氯仿萃取RNA
异丙醇沉淀RNA
酒精清洗
