CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
NTN; ABCD3; C3Xkine; CXC3; CXC3C; NTT; SCYD1; ABCD3; FKN; Neurotactin; Fractalkine; Small Inducible Cytokine Subfamily D(Cys-X3-Cys)Member 1
- Product No.SCA040Ra
- Organism SpeciesRattus norvegicus (Rat) Same name, Different species.
- All
- Human
- Mouse
- Rat
- Cavia
- Rabbit
- Simian
- Caprine
- Ovine
- Equine
- Bovine
- Porcine
- Gallus
- Canine
- Others
- Multi-species
- Pan-species
- Test MethodDouble-antibody Sandwich
- Assay Length2h, 40min
- Detection Range3.43-2,500pg/mL
- SensitivityThe minimum detectable dose of this kit is typically less than 1.43pg/mL.
- Sample TypeSerum, plasma and other biological fluids
- DownloadInstruction Manual
- UOM48T96T96T*596T*1096T*100
- FOBUS$ 638 For more details, please contact local distributors!US$ 912 For more details, please contact local distributors!US$ 4104 For more details, please contact local distributors!US$ 7752 For more details, please contact local distributors!US$ 63840 For more details, please contact local distributors!
Packages (Simulation)- Packages (Simulation)
- Results demonstration
- ISO9001: 2008, ISO13485: 2003 Registered
Specificity of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
This assay has high sensitivity and excellent specificity for detection of Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1).No significant cross-reactivity or interference between Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) and analogues was observed.
Recovery of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
Matrices listed below were spiked with certain level of recombinant Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) and the recovery rates were calculated by comparing the measured value to the expected amount of Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) in samples.
| Matrix | Recovery range (%) | Average(%) |
| serum(n=5) | 95-102 | 98 |
| EDTA plasma(n=5) | 86-95 | 91 |
| heparin plasma(n=5) | 91-99 | 96 |
Precision of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
Intra-assay Precision (Precision within an assay): 3 samples with low, middle and high level Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) were tested 20 times on one plate, respectively. Inter-assay Precision (Precision between assays): 3 samples with low, middle and high level Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) were tested on 3 different plates, 8 replicates in each plate. CV(%) = SD/meanX100 Intra-Assay: CV<10%>Inter-Assay: CV<12%>
Linearity of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
The linearity of the kit was assayed by testing samples spiked with appropriate concentration of Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) and their serial dilutions. The results were demonstrated by the percentage of calculated concentration to the expected.
| Sample | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 |
| serum(n=5) | 96-105% | 94-101% | 95-104% | 89-101% |
| EDTA plasma(n=5) | 78-103% | 78-102% | 97-104% | 80-97% |
| heparin plasma(n=5) | 83-101% | 78-103% | 80-93% | 88-102% |
Stability of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
The stability of kit is determined by the loss rate of activity. The loss rate of this kit is less than 5% within the expiration date under appropriate storage condition. To minimize extra influence on the performance, operation procedures and lab conditions, especially room temperature, air humidity, incubator temperature should be strictly controlled. It is also strongly suggested that the whole assay is performed by the same operator from the beginning to the end.
Assay procedure summary of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
1. Prepare all reagents, samples and standards;2. Add 100µL standard or sample to each well. Incubate 1 hours at 37°C;3. Aspirate and add 100µL prepared Detection Reagent A. Incubate 1 hour at 37°C;4. Aspirate and wash 3 times;5. Add 100µL prepared Detection Reagent B. Incubate 30 minutes at 37°C;6. Aspirate and wash 5 times;7. Add 100µL Substrate Solution. Incubate 10 minutes at 37°C;8. Read RLU value immediately.
Test principle of the CLIA Kit for Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1)
The microplate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1). Standards or samples are then added to the appropriate microplate wells with a biotin-conjugated antibody specific to Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1). Next, Avidin conjugated to Horseradish Peroxidase (HRP) is added to each microplate well and incubated. Then the mixture of substrate A and B is added to generate glow light emission kinetics. Upon plate development, the intensity of the emitted light is proportional to the Chemokine C-X3-C-Motif Ligand 1 (CX3CL1) level in the sample or standard.;
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Single-component Reagents of Assay KitLysis Buffer Specific for ELISA / CLIAQuality Control of ELISA / CLIACLIA Kit Customized ServiceDisease Model Customized ServiceSerums Customized ServiceELISA / CLIA Experiment ServiceTGFB1 Activation ReagentReal Time PCR Experimental ServiceGlutathione S-Transferase (GSH-ST) Assay KitMicroscale Reduced Glutathione assay kitGlutathione Reductase Activity Coefficient (GRAC) Assay KitAngiotensin Converting Enzyme KitStreptavidin
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步骤
A． 真核细胞和组织
自己需要的材料：
β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果，选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的，根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤1*107），使细胞团松散，轻轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中，更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK裂解液，漩涡振荡混匀，转移到1.5ml EP管中，进行步骤2。
2． 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”－第四页有详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s，使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器（0.9mm直径），至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3． 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中，离心，≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤：
1． 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞（≤30mg），使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg，难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时，也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用，除非是使用液氮，
2． 离心，≥1,5000*g, 5min, 室温。
3． 转移上清至，Homogenization Spin Column中，离心，≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离：
4． 在裂解产物中加入50％体积（250ul－350ul）的无水乙醇（96％－100％）混匀，漩涡振荡20s。
5． 样品转移到Hibind RNA Mini column上，离心管的最大容量为750ul，加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心，10,000*g,0.5-1min。弃去流出液（透过柱子流出到离心管里的液体）。
6． 将柱子放在一个新的2ml收集管中，加上300ul RNA wash buffer I。室温离心，10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7． DNase I 消化（选择性）
在我的实验中没有做这一步。
8． 将柱子再放到一个新的2ml收集管中，加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。
9． 将柱子放到2ml收集管中，加入500ul RNA wash buffer II（乙醇稀释过的），室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。注意：使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml)，按照标签上的说明。
10． 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子，同上一步骤一样。室温离心，10,000*g, 30s，弃流出液。然后在空收集管中，以最大转速离心柱子，≥12,000*g, 2min, 室温，使的HiBind 基质完全干燥。
11． 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中，（试剂盒中没有提供），加入50－100ul的DEPC水洗脱柱子（试剂盒中提供）。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug，可以进行二次洗脱。
注意：可以选择性地，用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱，总RNA的量会增加，但是浓度会降低，因为80％以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
RNA提取对于科研人员来说并不陌生，但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上，现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要，为什么往往提取的RNA却容易失败呢？
RNA提取失败的主要现象有三个：提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢？
首先，要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分，但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键，但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时，使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便，同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外，如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中，可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化，减少实验组间的误差。
其次，选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时，操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取，Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市，进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚氯仿抽提等步骤，简单快捷。组织或细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。
对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点，Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料（叶片、茎、幼苗等）、富含多糖多酚的植物组织材料（果实、种子等）、真菌提取高纯度的TotalRNA，适用范围广泛。按照标准流程，本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA，也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂，无需额外购买其它试剂。
－－本来，看好丹麦Exiqon公司，Qiagen的两个试剂盒，无奈经费有限，这两个盒子很不错，价格也不菲，有米的兄弟姐妹可以买。
－－另外查询到国产上海诺伦公司的血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒－－广州这边用的人不多，不知道上海那边的兄弟姐妹有什么经验？
－－－还有，北京康为世纪公司的游离RNA（血清血浆尿液）提取试剂，货号：CW2281，也比较便宜，但是俺心中也没有底，请大家给点意见。
－－－已经订购了LIFETECHNOLOGY的TrizolLS专门提取体液RNA的试剂（100毫升2000元人民币，也不菲），准备预试验看看提取RNA的质量。(Lifetechnology公司的AM1556也不错，但是也不便宜，每个盒子40次/2590元）
－－－－但是还是希望有试剂盒，比较简单，快捷，最重要的是样本量太大，要分离400份左右的血清。
准备RNA用的试剂：70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），DEPC处理后的水，新开封的三氯甲烷等，
容器：玻璃试剂瓶需要180度，8个小时以上烘烤
Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，20-40分钟）。
如果需要使用研钵和药品匙，研钵和药品匙也是需要180度，8小时以上的烘烤。
还需要没开封的手套，提取RNA时，尽量勤换手套，少说话，尽量不要对着样品吹气。
Trizol法和试剂盒提取组织中的RNA，哪个方法更可靠和精确呢？谢谢！
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物，这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外，植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL 能保持RNA完整性。加入氯仿后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，导致细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA，该方法对少量的组织（50-100 mg）和细胞（5×106）以及大量的组织（≥1 g）和细胞（>107）均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质，可以通过分层分别将不同层中的RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）分离纯化出来，效率极好。
Trizol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带，（mRNA和hnRNA成分）两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA,5S）。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8
TRIZOL
http://baike.baidu.com/view/533842.htm
