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NanoHelix/Genomic DNA Prep Kit, Solution Type/100 preps/GSY100
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NanoHelix/Genomic DNA Prep Kit, Solution Type/100 preps/GSY100
品牌 / 
NanoHelix
货号 / 
GSY100
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Genomic DNA Prep Kit, Solution Type

  • High yield, minimum fragmentation 
  • Simple salting out method 
  • Easy scale-up
  • Safe and economic

 

Products

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GSA100PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Animal], Solution Type100 preps
GSA400PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Animal], Solution Type400 preps
GSBA-100PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Bacteria], Solution Type100 preps
GSBA-400PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Bacteria], Solution Type400 preps
GSB100PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Blood], Solution Type100 preps
GSB400PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Blood], Solution Type400 preps
GSP100PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Plant], Solution Type100 preps
GSP400PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Plant], Solution Type400 preps
GSY100PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Yeast], Solution Type100 preps
GSY400PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit [Yeast], Solution Type400 preps
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PureHelix™ Genomic DNA Prep Kit (Solution type) is designed for high-yield and high-quality isolation of genomic DNA from wide variety of starting materials including whole bloods, cultured cells, animal tissues, plant tissues, yeast, and bacteria. This solution-based system, simple and gentle salting out method, allows easy scale-up and minimizes the DNA fragmentation. Due to no use of phenol, this kit is safe and does not produce any harmful waste. DNA purified with this kit is suitable for a variety of applications, including PCR amplification, digestion with restriction endonucleases and membrane hybridizations. 

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本方案介绍用阳离子去污剂——十六烧基溴化吡啶(cetylpyridinium bromide,CPB) 定量差异沉淀分离放射性标记的寡核苷酸与未掺入的放射性标记物。此方法最初是用于回收磷酸缓冲液从羟磷灰石柱洗脱的 DNA(Geek and Nasz 1983), 也可用于沉淀放射性标记核酸包括寡核苷酸。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。 查看更多>
siRNA DesignRNAi target selection rules:Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG 查看更多>
原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。 查看更多>
全血中含有有核白细胞,因此从血液中抽提 RNA 比较方便,但是红细胞富含核糖核酸酶,所以从血液中分离 RNA 奋其持殊的难度。因此若能先将有核白细胞与红细胞分离开来,从血液中抽提 RNA 更易成功。下述方法是酸-酚. 胍法•硫氰酸胍吋裂解细胞,并有效地灭活核糖核酸酶。 查看更多>
Successful RT-PCR requires a high quality, intact RNA template. Use the following guidelines to help prepare this template: To minimize the activity of RNases 查看更多>
1.电转化感受态细胞的制备 1. 用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照) 2. 37℃,220rpm,培养14-16个小时。 3. 第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小时,每 查看更多>
描述了 cDNA 芯片在人类基因表达分析中的用途。制备 cDNA 芯片的方法之一是用一个特制的打印机将扩增的 cDNA 转移至显微镜载(玻)片上。标记 cDNA 探针的制备以及与芯片的杂交也有所描述。 查看更多>
与 rRNA, 5SRNA, 5.8 SRNA 和 tRNA 相比,大多数真核生物的 mRNA 在其 3' 端带有 poly(A) 尾巴。因此,mRNA 能用 oligo(dT)-纤维素亲和层析法从细胞总 RNA 中分离 (Edmonds et al. 1971; Aviv and Leder 1972)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多>
如果放射性标记的寡核苷酸只是用作杂交探针的话,一般不必完全除去未掺入的放射性标记物。然而,为了使本底降至最低,应该将未掺入的大部分放射性标记物与放射性标记的寡核苷酸分离。如果寡核苷酸长度超过 18 个核苷酸(本方案),则绝大部分未反应的放射性前体物质可通过乙醇分级沉淀除去。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)上册,作者:黄培堂。 查看更多>
Phenol Extraction of rRNA (Rat liver)LEVEL II *** READ THROUGH ALL CAUTIONS BEFORE TRYING THIS EXPERIMENT *** Materials Rat liver (fasted rat)Liquid nitrogenp- 查看更多>
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。 查看更多>
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序列特异性RNA测序文库构建时,当RNA被逆转录后,为什么需要先合成CDNA,再连接头,最后再降解掉二次合成的cDNA呢?为什么不能直接逆转录后加接头?希望资深人士帮忙解答疑问。谢谢!
此方法出自以下文章High-ThroughputIlluminaStrand-SpecificRNASequencingLibraryPreparation(ColdSpringHarborProtocol)
有很多。我选了其中一个试剂盒供参考。SunShineBioTM 总RNA提取试剂盒。向左转|向右转
一场灾难正在悄悄的酝酿,人不知鬼不觉地来临.十四时二十八分,这个恐怖的时间,一场灭顶之灾从天而降,以四川省汶川为震中心的8.0级地震吞噬了人们美好的梦,这场地震摧毁了人们的家园,殃及了多个省市和地区,顿时,电力中断,交通瘫痪,山体崩塌,河水泛滥,灾区人民陷入了水深火热之中,汶川,这个在地图上鲜为人知的地方,人们很少谈起的地方,在一瞬间成为海内外人民关注的焦点,也就是那时,人们便发扬爱的精神,向灾区人民伸出援助之手,国务院在第一时间下达命令,派出国内的搜救精英赶往灾区,以“众志成城,抗震救灾”为口号,“时间就是生命,灾情就是命令”为主要目标,争分夺秒的抢救灾民,
大鼠颗粒细胞的提取和细胞中RNA的抽提
总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
RIpure试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后,RNA可以通过异丙醇沉淀来还原。在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。共纯化DNA对于样品间标准化RNA的产量十分有用。
无论是人、动物、植物还是细菌组织,该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIPURE试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIPURE抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA印迹分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子内时,建议用扩增级的DNase I来处理抽提的总RNA。
TRIpure试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb (28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
前段时间做了一批大鼠模型,提了大鼠血液和淋巴细胞还有肺组织的RNA。量太大了只能选择试剂盒,方便,速度快。Qiagen的效果的确好可是太太贵了,要是像我这样提上百分样品的RNA估计老板不大破产,也得小破产了。比较一下后选择了OMEGA公司得RNA提取试剂盒。
下面是我自己翻译得中文说明书,大家批判着看吧,起码起个借鉴作用。有需要的就看看吧。版主也给加点分哦!:D:I
还有一些具体实验操作中自己总结的经验,不要着急整理好了就会发上来和大家一起分享。:D:D

OMEGArna提取试剂盒中文说明.doc(34.0k)
试剂盒提取RNA123
妞YN4w2021-08-01
看是什么试剂盒,有一些试剂盒是有专门针对性提取的,比如是提取小RNA类的,或者是提取转录组RNA类的,都有,如果是一般的没有说明的那么是总RNA的
TRIZOL裂解细胞
氯仿萃取RNA
异丙醇沉淀RNA
酒精清洗
TRIZOL试剂123
李向tao2017-10-03
主要成分:

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂,在样品裂解或匀浆过程中,TRIZOL 能保持RNA完整性。加入氯仿后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中。取出水相,用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8-羟基喹啉可以抑制RNase,与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失,导致细胞结构降解,核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA,该方法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质,可以通过分层分别将不同层中的RNA(上层)、DNA(中层)、蛋白质(下层)分离纯化出来,效率极好。
Trizol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带,(mRNA和hnRNA成分)两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S),低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA,5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8

TRIZOL
http://baike.baidu.com/view/533842.htm
可以用TRIZOL或者plant trizol,从植物组织中提取RNA需要克服几个困难:
1.破碎和裂解植物细胞壁。
2.抑制rna酶
3.去除植物多糖和多酚。树脂 淀粉和纤维材料。
4.去除许多高等植物组织尤其是成熟组织能产生某些水溶性的次级代谢产物,这些次级代谢产物很容易与RNA结合并与RNA共同被抽提出来而阻碍具有生物活性的RNA分离。
除了干扰RNA分离之外,植物多糖和多酚及次级代谢产物还能明显抑制下游RNA反应如转录和PCR.
RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。
我是个初学者,有很多问题。请大家指教。
1、RNA提取为什么用异丙醇,而且是等体积的?
2、为什么用氯仿,RNA为什么在上清中,中间和下层分别有什么?
3、RNA提取最后为什么用75%乙醇洗,而且为什么使用的是75%乙醇而不用无水乙醇来洗。还有有人建议用完75%乙醇后用无水乙醇洗,会使水分快速蒸发,可行吗?
谢谢大家啦,帮帮忙。
我在提一种植物的RNA用的是上海华舜生物公司的TRIZOL按照他上面的说明书,我应该用System4那种方法,可是里面要用到RNA沉淀试剂,不知道是什么东西,试剂盒只有一瓶,是RNAexReagent。其它的就没有了。不知道那东西是什么,要自己配吗?RNA沉淀试剂是什么东西?