[kataokasan] (明日方舟) 本子 19P 绅士茶馆
| 实验材料 | 酵母菌 试剂、试剂盒 | TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇 仪器、耗材 | 离心管离心机摇床 实验步骤 | 1. 酵母细胞在10ml培养基中生长至指数中期（OD600=1.0）。 2. 将培养液转移到50ml，离心管，于4℃，1500g离心3min。 3. 弃上清，菌体沉淀用1ml冰冷的水重悬，转移至一个干净的1.5ml微量离心管中，4℃离心10s，弃上清，继续步骤4。需要时，将离心管置于干冰上速冻。 4. 用400μlTSE溶液重悬细胞沉淀，加400μl酸性酚，激烈振荡10s，65℃温育30~60min，不时用旋涡振荡器短暂振荡。 5. 冰浴放置5min，4℃高速离心5min。 6. 水（上）相移到一个干净的1.5ml微量离心管中，加400μl酸性酚，激烈振荡，重复步骤5。 7. 将水相移到一个干净的1.5ml微量离心管中，加入400μl氯仿，激烈振荡，4℃高速离心5min。 8. 将水相移到一个新管中，加40μl3mol/l乙酸钠，pH5.3及1ml冰冷的无水乙醇沉淀，4℃高速离心5min，在冰冷的70%乙醇中快速振荡以洗涤RNA沉淀。如上离心以沉淀RNA。 9. 沉淀用50μl水重溶，用分光光度法测A260及A280以确定浓度，于-70℃或-20℃贮存，可使用1年。 注意事项 | 不要用高浓度的细胞制备RNA，因为进入静止期后，结果的一致性差，RNA产量不稳定。 |
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发布于 ： 2021-08-15
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