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RemovecontaminatingbacterialchromosomalDNAfromplasmid,cosmid,fosmid,andBACpreps
DigestcontaminatinglinearDNAwithoutdigestingnickedorclosed-circulardsDNAorsupercoiledDNA(plasmids,fosmids,etc.)- Useasafinalpurificationstepforplasmid,cosmid,fosmid,andBACvectorandclonepreparations
- UtilizewheneverprotectingcirculardsDNAisimportant
Plasmid-Safe™ATP-DependentDNaseselectivelyremovescontaminatingbacterialchromosomalDNAfromplasmid,cosmid,fosmid,andBACclonesorvectorpreparations.SuchpreparationsarefrequentlycontaminatedwithfragmentsofbacterialgenomicDNAgeneratedduringalkalinelysis.Otherpurificationoptions,suchasspin-columnsorevenCsClcentrifugation,donoteffectivelyremovethesecontaminantsandrequirefurtherpurificationsteps.ContaminatingDNAfragmentsleftbehindbythesemethodsultimatelycanbecomeligatedintoacloningvector,resultinginfalsepositivesandhighbackgrounds,orerroneoussequencedata. Plasmid-SafeATP-DependentDNasedigestslineardsDNAtodeoxynucleotidesatslightlyalkalinepHand,withlowerefficiency,closed-circularandlinearssDNA.Theenzymehasnoactivityonnickedorclosed-circulardsDNAorsupercoiledDNA.Therefore,Plasmid-SafeDNaseisidealasthefinalpurificationstepforplasmid,cosmid,fosmid,andBACvectorandclonepreparations. |  | Figure1.Plasmid-Safe™ATP-DependentDNaseremovescontaminatinggenomicDNAfromplasmidpreps.Lane1,3µgofSma I-digestedbacterialchromosomalDNA;lane2,500ngofuncutplasmidDNA;lane3,mixtureof3 µgofdigestedbacterialchromosomalDNAand500ngofuncutplasmidbeforePlasmid-SafeDNasetreatment;lane4,mixtureofchromosomalDNAandplasmidDNAafterPlasmid-SafeDNasetreatment(incubationwithPlasmid-SafeDNasefor30minutesat37°C);laneM,Kilobaseladder. |
Benefits
- MinimizesthepossibilityofcloningorsequencingcontaminatingchromosomalDNAfromplasmid,cosmid,fosmid,orBACpreparations.
- Fastandeasyprotocolwithminimalhandlingtime.
- CompleteprotocolsprovidedforusingPlasmid-SafeDNasewithminiprep,midiprep,andmaxiprepplasmid,cosmid,fosmid,andBACDNApurifications.
UnitDefinition:OneunitofPlasmid-SafeDNaseconverts1nmolofdeoxynucleotidesinlinearT7DNAintoanacid-solubleformin30 minutesat37°Cunderstandardassayconditions.Threeunitswilldigest1µgofDNAin30minutesat37°C.
StorageBuffer:50%glycerolcontaining50mMTris-HCl(pH7.5),0.1MNaCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,and0.1%Triton®X-100.
Plasmid-Safe10XReactionBuffer:330mMTris-acetate(pH7.5),660mMpotassiumacetate,100mMmagnesiumacetate,and5.0 mMDTT.ATPmustbeaddedtoafinalconcentrationof1mMinthe1XBuffer.
QualityControl:Plasmid-SafeDNaseisfreeofdetectableRNaseanddouble-stranded,DNA-specificendonucleaseactivities.
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IncludesPlasmid-Safe™10XReactionBufferand25-mMATPSolution.蚂蚁淘电商平台
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2019-02-18
被称作是DNA重组技术中一把神奇"手术刀"的是 A、DNA聚合酶 B、碱性磷酸酶 C、DNA连接酶 D、逆转录酶 E、限制性核酸内切酶 请帮忙给出正确答案和分析,... 查看更多
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2018-12-26
Several forms of post-translational modification regulate protein activities. Recently, protein methylation by CARM1 (coactivator-associated arginine methyltr 查看更多
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2021-08-06
分子酶专栏之耐热型DNA聚合酶（中篇） 一．来自Thermus耐热菌的A型DNA聚合酶Thermus属的细菌属于Deinococci纲，它们的最佳培养温度是65~70℃，可在80℃的极端温度条件下生存。这些细菌中的耐热A型DNA聚合酶与真核生物中的聚合酶I是同源的，早在1976年就被发现，而且已经有越来越多的Thermus DNA聚合酶被发现和表征。这一类酶有几点共性，包括94~95 kDa左右的蛋白分子量、内生的5’-3’方向核酸外切... 查看更多
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2020-05-15
E.特异性酯酶法 进入在线模考 有关尿干化学检测原理,葡萄糖测定用 A.偶氮偶联法 B.马来酐试剂 C.葡萄糖氧化酶法 D.多聚电解质离子解离法 E.特异性酯酶... 查看更多
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B、DNA连接酶 C、拓扑异构酶 D、解链酶 E、限制性核酸内切酶查看答案您可能感兴趣的试题 左心衰竭最早出现的症状是( )。 A.劳力性呼吸困难 B.心源性哮... 查看更多
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复杂的生物系统可以被描述为一个网络中发生的化学过程的分子。科学家们“ChemLife”研究计划的康斯坦茨大学的工作在一起,一个同样与动态interconnections-both科目和跨学科的有源网络。最近的见解DNA聚合酶通过跨学科合作有机化学、生物化学、结构生物学和理论化学显示生产力和相互鼓舞人心的生物和化学技术之间的相互作用。这些新的发现在分子水平上的聚合酶可用于基因组测序和分子的其他领域的基于诊断。研究结果刊登在2018年9月17日的《美国国家科学院学报 查看更多
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2020-06-03
Z2超保真DNA聚合酶是由杭州谨澳生物科技有限公司代理或销售的GZL品牌的试剂，产品来源于中国。杭州谨澳生物科技有限公司是中国最权威的Z2超保真DNA聚合酶试剂销售服务商之一，在杭州等地方销售Z2超保真DNA聚合酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业Z2超保真DNA聚合酶仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的Z2超保真DNA聚合酶产品 查看更多
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2021-07-20
Z1高保真DNA聚合酶是由杭州谨澳生物科技有限公司代理或销售的GZL品牌的试剂，产品来源于中国。杭州谨澳生物科技有限公司是中国最权威的Z1高保真DNA聚合酶试剂销售服务商之一，在杭州等地方销售Z1高保真DNA聚合酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业Z1高保真DNA聚合酶仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的Z1高保真DNA聚合酶产品 查看更多
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2021-08-07
Klenow酶是大肠杆菌八聚合酶I的羧基端片段，它具有DNA聚合酶和3’到5’方向的外切酶活性，不含5’到3”方向的外切酶活性。 查看更多
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2021-08-18
分子酶专栏之等温扩增酶与原核DNA聚合酶 一．经典的原核DNA聚合酶在细菌中，三种DNA聚合酶Pol I、Pol II、Pol III共同作用，实现DNA的复制。这三种酶具有相同的5’-3’的延伸活性，只是延伸的速率不同。同时它们都具有3’-5’方向的核酸外切酶活性，这保证了DNA复制过程中的保真性，也就是所谓的矫正活性（proofreading）。除此之外，DNA Pol I还具有5’-3’方向的核酸外切酶活性。这个活性很重要，它可以... 查看更多
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2021-08-05
利用聚合酶链式反应（PCR），任何两个DNA片段可连接成一个新的重组DNA分子。通过在PCR引物中引入的额外非同源的核苷酸，可在连接处产生所需要的读码框架或酶切位点。用该技术并不需要知道待亚克隆的DNA的核苷酸序列，只需要知道两小段伸展于片段两俩的区段作为扩增反应的引物结合区。 查看更多
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2021-07-14
订1支7折，订2支5折，下单即送必拓充电宝活动日期：2017.07.13-2017.9.30ExFi Tusion DNA聚合酶是一种高度热稳定的DNA聚合酶，来源于嗜热菌Thermococcus sp.4557的PolB基因，通过单链DNA结合结构域融合及多个关键位点的基因进化，经大肠杆菌表达及多种介质纯化而得到。酶的分子量为106 kDa。产品特色1.更高保真性；2. 更快的扩增速度，延伸速度为3-4 kb/min；3. 可很好的扩... 查看更多
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...3月机考答案考试试卷:(1194)《生活中的DNA科学》3123
havocking2021-07-23
需要镁离子催化的酶_真核生物的dna聚合酶需要镁离子,这和它的...123
陡变吧AWJ2017-11-27
TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶，该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感。以活性程度很低的鲑鱼精子DNA为模板，dNTP的浓度为0.7～0.8mmol/L时，用不同浓度Mg2+进行PCR反应10min，测定结果为Mgcl2浓度在2.0mmol/L时该酶催化活性最高，此浓度能最大限度地激活TaqDNA聚合酶的活性，Mg2+过高就抑制酶活性，当Mgcl2浓度在10mmol/L时可抑制40～50%的酶活性。由于Mg2+能与dNTP结合而影响PCR反应液中游离的Mg2+浓度，因而Mgcl2的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度。一般反应中Mg2+浓度至少应比dNTP总浓度高0.5～1.0mmol/L。适当浓度的KCl能使Taq DNA聚合酶的催化活性提高50～60%，其最适浓度为50mmol/L，高于75mmol/L时明显抑制该酶的活性。
聚合酶的聚合酶分类 123
小超制作6352017-11-05
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。向左转|向右转
高保真DNA聚合酶在SNP检测中的应用123
luzhikunjxnk2021-07-27
各位，我需要做基因的序列测定检测突变，想请教一下各位用过哪个公司的哪种高保真酶比较好？（最好是保真性能高而且扩增效率也好）谢谢！
【求助】高保真DNA聚合酶 核酸基因技术讨论版论坛123
lixiaofeng1112021-07-20
DNA连接酶和DNA聚合酶的异同_123
凌乱美4612017-11-05
连结酶是最后把dna粘起来
聚合酶就是多功能的dna的制作机器
聚合酶就是多功能的dna的制作机器
高中生物DNA聚合酶和DNA连接酶的区别_123
ggj20033070012021-07-24
二者的区别在于作用的底物：DNA连接酶与DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键。但DNA连接酶连接的是DNA片段（比如冈崎片段）；DNA聚合酶是将单个脱氧核糖核苷酸按顺序连接到DNA链上。向左转|向右转
DNA聚合酶与DNA连接酶等作用如何区别 实验方法 123
束缚之日2017-10-01
DNA聚合酶是DNA复制时起作用的酶。DNA复制酶这个说法很少见。
DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?123
猴德车12021-07-21
不是
DNA聚合酶和DNA连接酶作用的位点都是3'5'磷酸二酯键；但DNA连接酶是作用在游离的DNA片段间，使其连接成为一条完整的DNA链，而DNA聚合酶则是将游离的脱氧核糖核苷酸连接成DNA片段。
DNA聚合酶和DNA连接酶作用的位点都是3'5'磷酸二酯键；但DNA连接酶是作用在游离的DNA片段间，使其连接成为一条完整的DNA链，而DNA聚合酶则是将游离的脱氧核糖核苷酸连接成DNA片段。
观察以下dna结构图,判断dna聚合酶能够与哪一个结合123
啊姗痚2017-11-05
观察以下dna结构图，判断dna聚合酶能够与哪一个结合
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶；(2)依赖RNA的DNA聚合酶；(3)依赖DNA的RNA聚合酶；(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶，它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基础上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外，还需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样，上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶，它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物，并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下，在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′，5′-磷酸二酯键，其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105，由5条多肽链组成，分别命名为α，α，β，β′，和γ，全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105，由10～12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外，在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。
DNA聚合酶,解旋酶,RNA聚合酶各自的作用对象和作用时期(详细) 懂得123
Azshin2017-11-05
DNA聚合酶：在DNA复制时，作用于游离的脱氧核苷酸，将游离的脱氧核苷酸连接形成新的脱氧核苷酸长链。
解旋酶：在DNA复制、转录时，作用于DNA双链，将双链DNA解开形成单链。
RNA聚合酶：在转录过程中，作用于游离的核糖核苷酸，将它们连接形成mRNA链
解旋酶：在DNA复制、转录时，作用于DNA双链，将双链DNA解开形成单链。
RNA聚合酶：在转录过程中，作用于游离的核糖核苷酸，将它们连接形成mRNA链
PCR实验中DNA聚合酶的选择及实验方法 实验方法123
无双蛛蛛2009-03-16
我要P一个3kb左右的目的基因，需要一个保真性高的酶，因为后面要测序，而且我的两个引物的GC含量相差也很大，还需要一个载体连接去进行筛选，这个载体要4kb以上的，因为要和我的目的基因大小相差大一点的，而且这个载体上还要有多个切割位点，好让我切割下来，与最终的质粒相连。
最近，我看了很多这方面的资料，但是我对这个方面不是很了解，所以现在搞得头昏眼花的，不知道该选什么酶和载体，希望大家多多帮忙
在此十分感谢
最近，我看了很多这方面的资料，但是我对这个方面不是很了解，所以现在搞得头昏眼花的，不知道该选什么酶和载体，希望大家多多帮忙
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