
Overview:
ThePI3Kcomprisesofa110kDacatalyticsubunitanda85kDaregulatorysubunit.Anumberofisoformsofthe110kDacatalyticsubunitandthe85kDaregulatorysubunitexistincells.Thep110alphacatalyticsubunit(PIK3CA)isfrequentlymutatedoramplifiedinavarietyofcancersincludingovarianandcolonandthisproteinisoneofthePI3Kmutants(1).PIK3CAgenecopynumberisincreasedinover30%ofovariancancersandthisleadstoincreasedPI3-kinaseactivity.FurThermore,theactivityofp110alphaisessentialforvasculardevelopmentandinactivationofp110alphaleadstoseveredefectsinangiogenicsproutingandvascularremodeling(2).
GeneAliases:
p110alpha:PIK3CA,MGC142161,MGC142163,p110-alphap85alpha:PIK3R1,GRB1,p85-ALPHA
GenbankNumber:
NM_006218NM_181523
References:
1.Samuels,Y.etal:HighfrequencyofmutationsofthePIK3CAgeneinhumancancers.Science304:554only,2004.2.Graupera,M.etal:Angiogenesisselectivelyrequiresthep110-alphaisoformofPI3Ktocontrolendothelialcellmigration.Nature453:662-666,2008.
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再来说真核生物,真核生物的DNA聚合酶分为α,β,γ,δ,ε,.首先我来说三个和原核生物中的Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ功能相同的酶.ε类似于原核生物DNA聚合酶Ⅰ,β类似于原核生物DNA聚合酶Ⅱ,δ类似于原核生物DNA聚合酶Ⅲ.α具有引物酶活性,而γ则是作为复制真核生物线粒体内的DNA所需要的酶.
我用来扩增一个1.1kb的基因,用TAKARA的EXtaq和其他的总是出现突变不知道这个酶能不能完全保真,另外末端是否加A
最近,我看了很多这方面的资料,但是我对这个方面不是很了解,所以现在搞得头昏眼花的,不知道该选什么酶和载体,希望大家多多帮忙
在此十分感谢
DNA连接酶作用于基因工程,用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
可分为以下几个类群:(1)依赖DNA的DNA聚合酶;(2)依赖RNA的DNA聚合酶;(3)依赖DNA的RNA聚合酶;(4)依赖RNA的RNA聚合酶。前两者是DNA聚合酶,它使DNA复制链按模板顺序延长。如在原核生物中仅就大肠杆菌中已被发现的就有三种(分别简称为PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基础上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,这DNA的合成方向记为5′→3′。换言之DNA聚合酶催化反应除底物(αNTP)外,还需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今细胞内尚无发现可从单体起始DNA的合成。同样,上述(3)和(4)是催化RNA生物合成反应中最主要的RNA合成酶,它们以四种三磷酸核糖核苷(NTP)为底物,并需有DNA模板以及Mn2 及Mg2 的存在下,在前一个核苷酸3′-OH与下一个核苷酸的5′-P聚合形成3′,5′-磷酸二酯键,其新生链的方向也是5′→3′。RNA聚合酶也大量存在于原核和真核生物的细胞中。如大肠杆菌RNA聚合酶分子量4.8×105,由5条多肽链组成,分别命名为α,α,β,β′,和γ,全酶可用α2ββ′λ表示。真核生物RNA聚合酶分子大于5×105,由10~12个大小不等亚基组成。聚合酶除作为自然界生命活动中不可缺少的组分外,在实验室中大多用作生命科学研究的工具酶类之一。向左转|向右转

