DescriptionT4 DNA Ligase catalyzes the formation of a phosphodiester bond between juxtaposed 5"-phosphate and 3"-hydroxyl termini in duplex DNA or RNA. This enzyme will join blunt-end and cohesive end termini as well as repair single stranded nicks in duplex DNA, RNA, or DNA-RNA hybrids.
Concentrations 50 - 200u/μl
Features
- Ultrapure recombinant protein
- Seals single-stranded nicks in duplex DNA, RNA or DNA-RNA hybrids.
- ATP is an essential cofactor for the reaction.
Supplied With10X Buffer T4 Ligase 50mM Tris-HCl (pH7.8 at 25˚C), 10mM MgCl2, 10mM DTT, 1mM ATP and 25μg/ml BSA. Store at -20˚C.
Storage Buffer 10mM Tris-HCl (pH7.5), 50mM NaCl, 0.1mM EDTA, 10mM 2-mercaptoethanol and 50% glycerol. Store at -20˚C.
Thermal Inactivation 65˚C for 15 minutes
Unit Definition 1u (*Cohesive End Ligation Unit) is defined as the amount of enzyme that is required to give 50% ligation of Hind III fragments of lambda DNA (5" DNA termini concentration of 0.12μM [300μg/ml]) in 20μl of 1X T4 DNA Ligase Buffer in 30 minutes at 16˚C.*One Cohesive End Ligation Unit is equal to 0.015 Weiss units. Equivalently, one Weiss unit is equal to 67 Cohesive End Ligation Units.
Application
- Catalyzes the linkage of 5" or 3" blunt/cohesive ends of double-stranded DNA by formation of phosphodiester bond.
- Joining of oligonucleotide linkers or adapters to blunt ends.
- Repair nicks formation in duplex nucleic acids.
Quality ControlAll preparations are assayed for contaminating endonuclease, exonuclease and non-specific DNase activities.
Ordering Information
| Catalog No | Description | Pack Size |
|---|---|---|
| ME4303 | T4 DNA Ligase | 4000u |
| ME4304 | T4 DNA Ligase | 20000u |
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T4 DNA Ligase
PublicationThis Product Has Been Used In:Mahboudi et al. (2018)Prospect and Competence of Quantitative Methods via Real-time PCR in a Comparative Manner: An Experimental Review of Current Methods, . The Open Bioinformatics Journal,11:1-11. Dehnaiv, E., Fathi-Roudsari,M., Mirzaie, S., Arab., S.S., Siadat, S.O.R., Khajeh, K. (2017)Engineering disulfide bonds in Selenomonas ruminantium B-xylosidase by experimental and computational methods. International Journal of Biological Macromolecules. 95. Pp.248-255Mohandesi, N., Haghbeen, K., Ranaei, O., Arab, S.S., Hassani, S. (2017) Catalytic Efficiency and thermostability improvement of SUC2 invertase through rational site-directed mutagenesis. Enzyme and Microbial Technology.96. pp14-22Busayapongchai, P., Siri, S.(2017). Sensitive detection of estradiol based on ligand binding domain of estrogen receptor and gold nanoparticles. Analytical biochemistry. 518, pp.60-68.Kohnehrouz, B.B., & Nayeri, S. (2016)Design, Cloning and In silico Analysis of Efficient siRNA-inducing Casette for Silencing Wheat γ-gliadins. Jordan Journal of Biological Sciences9(1), p.35-40. Meidaninikkjeh, S., Vaziri,F., Siadat, S.D. (2015) Cloning of conserved regions of nontypeable Haemophilus influenzae hmw1 core binding domain. International Journal of Molecular and Clinical Microbiology.5(1) pp.510-515
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不同点：
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶没有，当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性，还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对，所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程；DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程。
B、酶大部分是蛋白质、少量是RNA，故某种酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸，B错误；
C、内分泌细胞能产生激素，活的细胞能产生酶，故能产生激素的细胞就能产生酶，C正确；
D、酶通常是蛋白质，蛋白质在低温条件下更加稳定，利于保存，而且低温不会使酶失活，因此在最适温度保存没有意义，D错误．
相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点
1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。
2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。
3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶没有，当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。
4、RNA聚合酶只具有5‘到3’端的聚合酶活性，而DNA聚合酶不仅有5‘到3’端的聚合酶活性，还具有3‘到5’端的外切酶活性。保证DNA复制时候校对，所以复制的忠实性高于转录的。
5、RNA聚合酶通常作用于转录过程；DNA聚合酶通常作用于DNA复制过程
DNA聚合酶和DNA连接酶作用的位点都是3'5'磷酸二酯键；但DNA连接酶是作用在游离的DNA片段间，使其连接成为一条完整的DNA链，而DNA聚合酶则是将游离的脱氧核糖核苷酸连接成DNA片段。
下面是六种不同耐热聚合酶的比较：
Taq：扩增效率最高的耐热DNA聚合酶，能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。
Pfu：目前保真度最高的耐热DNA聚合酶，碱基出错率为10-6，但扩增效率低于Taq酶，一般能很好的扩增2kb以下的片段。
TaqPlus：集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高，保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。
HotstartTaq：经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下，活性被化学基团封闭，要在94℃-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应，避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增，提高了反应的灵敏度和特异性。
LongTaq：具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶，它不但扩增效率高而且错配率低，对于简单模板可扩增长达40kb的模板，对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。
TaqPlatinum：热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高，而用Pfu扩增有难度，可选用TaqPlatinum，一般扩增长度可达4kb。
根据不同的实验目的选择最合适的酶，
克隆普通长度的目的DNA片段：Taq、TaqPlus
保真度要求较高，片段比较短，如点突变、基因筛选等：Pfu、TaqPlatinum
高保真长片段扩增，如构建基因图谱及分子遗传学研究等：LongTaq、TaqPlus
扩增基因组模板，需要降低背景：HotstartTaq、TaqPlatinum
扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板：TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum
实时荧光定量PCR反应：Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum
从菌株或质粒模板，筛选鉴定目的克隆，扩增6kb以下的片段：Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix
模板比较复杂或目的片段丰度低，用普通Taq酶扩增不出条带：2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix
但是也有以RNA为模板的DNA聚合酶和RNA聚合酶 （也就是反转录酶和RNA依赖的RNA聚合酶）,它们的结合位点在RNA上.
也就是说，模版是谁，结合位点就在谁上。
2.结合位点就是启动合成DNA或者RNA的碱基序列，如RNA聚合酶结合位点是转录起始位点,是一段特殊的位于编码基因上游的DNA序列.这段DNA序列可以结合RNA聚合酶,从而起始转录过程.经典的RNA聚合酶结合位点是TATA box.
TATA box是编码序列前的4个碱基.在大多数生物的基因前面都有TATA着4个碱基序列的存在,它就是一个RNA聚合酶结合位点.
DNA连接酶作用于基因工程，用于连接两个DNA片段间的磷酸二酯键。
