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Reliablyjoindouble-strandednucleicacidchains.
T4DNALigasecatalyzestheformationofaphosphodiesterbondbetweentheterminal5′phosphateand3′hydroxylgroupsofduplexDNAorRNA.TheenzymeefficientlyjoinsbluntandcohesiveendsandrepairssinglestrandednicksinduplexDNA,RNAorDNA/RNAhybrids.
| T4DNALigaseVersion | Sizes | LigaseConcentration | ProvidedBuffer |
| LowConcentrationLigase | 1,500U | 2U/µL | 10XT4DNALigaseBuffer |
| HighConcentrationRapidKit | 1,500U 7,500U | 10U/µL | 2XRapidLigationBuffer, 10XT4DNALigaseBuffer |
10XT4DNALigaseBufferiscomposedof500mMTris-HCI,100mMMgCl2,50mMdithiothreitol,10mMATP,pH7.6@25°C.
2XRapidLigationBufferiscomposedof132mMTris-HCI,20mMMgCl2,2mMdithiothreitol,2mMATP,15%PEG,pH7.6@25°C.
 |
Figure1: Purity |
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Figure2: ExonucleaseandEndonucleaseActivityAssay |
UnitDefinition:OneWeissUnitisdefinedastheamountofenzymerequiredtoconvert1nmolof32P-labeledinorganicpyrophosphateintoNoritadsorbablematerialin20minutesat37°C,usingspecifiedreactionconditions.Note:1WeissUnitisapproximately67cohesiveendunits.
Source:ArecombinantE.colistraincarryingtheclonedT4DNALigasegene.
ORDERINFORMATION
Storagebuffer:T4DNALigaseissuppliedin10mMTris-HCl,50mMKCl,1mMdithiothreitol,0.1mMEDTA,0.1%TritonX-100,50%glycerol,pH7.5@25°C.
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2021-08-23
产气荚膜梭菌产生的α毒素是() A、胶原酶 B、DNA酶 C、蛋白酶 D、卵磷脂酶 E、透明质酸酶 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!... 查看更多
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2021-08-11
一个国际科学家小组已经发现了化合物如何阻断皮瓣核酸内切酶1(FEN1) - DNA损伤反应中的关键酶类和癌症治疗的潜在靶点。在健康的人DNA复制和DNA修复期间形成具有单链末端的分支或拍打的DNA。这些单链皮瓣可以通过酶如皮瓣内切核酸酶1(FEN1)除去，以将DNA的完整性恢复到其双链状态。在癌细胞中已经观察到更高水平的FEN1，具有临床上更差的预后3并且这些细胞更依赖于该修复酶，尤其是在没有其他支持性DNA损伤应答蛋白的情况下。当FEN1被阻断时，这些后面的细胞对敏感和死亡 - 这个 查看更多
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2021-09-13
人抗DNA酶B抗体 ELISA人抗DNA酶B抗体 ELISA属人ELISA试剂盒，是ELISA试剂盒中常用检测产品，的检测原理、产品报价及操作事项请咨询上海通善生物工程师，企业QQ 1465907913。属 人ELISA试剂盒规格 96T/48T包装 进口分装储存 2~8℃产品 美国供应商 上海通善生物特别说明 利用ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血液(指血，静脉血)，尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，**分泌物等，这些 查看更多
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2021-08-17
50ml离心管,RCF:10000,不带泡沫底座，PP,无RNA/DNA酶，无热源无菌 查看更多
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2021-09-06
安倍医疗器械贸易（上海）有限公司在发布的水，DNA酶，无RNA酶，DEPC供应信息，浏览与水，DNA酶，无RNA酶，DEPC相关的产品或在搜索更多与水，DNA酶，无RNA酶，DEPC相关的内容。 查看更多
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2021-09-21
第二章 DNA酶切及凝胶电泳第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和 查看更多
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2021-09-05
上海樊克生物科技有限公司在发布的抗DNA酶B抗体ELISA试剂盒,人(anti-DNase B)ELISA试剂盒价格供应信息，浏览与抗DNA酶B抗体ELISA试剂盒,人(anti-DNase B)ELISA试剂盒价格相关的产品或在搜索更多与抗DNA酶B抗体ELISA试剂盒,人(anti-DNase B)ELISA试剂盒价格相关的内容。 查看更多
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2021-08-27
1.50ml离心管,RCF:30000，PP,无RNA/DNA酶，无热源 查看更多
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2021-09-22
一． 实验目的： 1、 掌握质粒 DNA 分离，纯化的原理 2、 学习煮沸法快速提取质粒 DNA 的方法 3、 学习 DNA的限制性酶切的基本技术 4 、 学习利用琼脂糖电泳测定 DNA片段的长度 二、 实验原理 在基因工程中， DNA 分子的切割是由限制性内切酶来完成的。限制性内切酶能识别特定的 DNA 序列，在一 查看更多
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2021-08-15
上海晶抗生物工程有限公司 在发布的人抗DNA酶B抗体ELISA检测试剂盒图片供应信息，浏览与人抗DNA酶B抗体ELISA检测试剂盒图片相关的产品或在搜索更多与人抗DNA酶B抗体ELISA检测试剂盒图片相关的内容。 查看更多
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2021-09-09
上海研生实业有限公司所提供的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-08-13
合肥基赛生物科技有限公司在发布的合肥基赛生物销售Crystalgen的0.1-10ul、1-200ul、100-1000ul、100-1300ul无DNA酶无RNA酶无热源、带滤芯吸头供应信息，浏览与合肥基赛生物销售Crystalgen的0.1-10ul、1-200ul、100-1000ul、100-1300ul无DNA酶无RNA酶无热源、带滤芯吸头相关的产品或在搜索更多与合肥基赛生物销售Crystalgen的0.1-10ul、1-200ul、100-1000ul、100-1300ul无DNA酶无RNA酶 查看更多
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邓子新团队DNA骨架硫修饰研究获新突破—新闻评论123
freelane2021-07-31
邓子新团队DNA骨架硫修饰研究获新突破
------发现两种全新的细胞自我防卫机制
来源：上海交通大学
近日，上海交通大学邓子新院士团队对DNA骨架硫修饰生物学意义的研究又获得两项突破。
聚焦核酸研究的著名国际学术刊物《核酸研究》（NucleicAcidsResearch）以特写文章（Featuredarticle）发表了由该团队由德林副教授主持，博士生徐铁刚和姚芬为共同第一作者的论文——“沙门氏菌中与DNA骨架上硫修饰直接关联的一种新的限制系统”。该论文报道了一种新的宿主专一性限制-修饰系统，它与以前所熟知的DNA甲基化限制-修饰系统截然不同，由7个基因负责，其功能与DNA骨架上的硫修饰直接相关。编辑部在特写中写道：“在沙门氏菌中所发现的这种宿主专一性硫修饰系统看来是细菌为了抵御外源对DNA的限制性所装备的又一种新的细胞防卫机制，它被一种新的途径酶所编码，堪比细菌在依赖于DNA甲基化之外加装了又一套新的防御体系。”
与之相反的另一套全新的细胞防卫系统发现于天蓝色链霉菌中，由贺新义副教授主持，博士生刘光为第一作者，以“一种IV型限制内切酶ScoMcrA对硫修饰和甲基化修饰DNA都切割”为题发表在《公共科学图书馆—遗传学》（PLoSGenetics）上，这种酶不仅可以切割DNA骨架上发生了硫修饰的DNA，还可以切割DNA碱基上发生了甲基化修饰的DNA。另外，这套限制-修饰系统分别位于两个相互排斥的基因组岛上，具有“水火不容”的敌对性，两者同时表达会导致细胞瞬时死亡。论文评审员称这是一篇“重要的、epoch-making”的论文。这项发现是上海交大与中国科学院微生物研究所和英国Leicester大学合作的结晶。
这是邓子新院士团队发现DNA骨架硫修饰以来，瞄准科技界普遍关注的有关DNA硫修饰的生物学，尤其是修饰的生理功能这个重大的科学问题公开发表的新的引人注目的原创性成果。与DNA甲基化限制-修饰系统一样，这类新系统的广泛和深度挖掘可能具有重大的分子生物学和生物工程学意义。
目前，DNA骨架硫修饰的研究已成为该团队瞄准前沿，奋力开拓的主要科研方向之一，自他们首次报道DNA硫修饰以来，已先后发表了十余篇相关的系统性研究论文，稳步地把对此新兴领域的研究推向新的高度。
据悉，2010年初，中国微生物学会为了促进、激励和纪念DNA硫修饰这个原创性科学发现，彰显我国基础生命科学领域的显示度和影响力，决定在上海交通大学设立“DNA大分子硫修饰科学发现诞生地”纪念牌。
------发现两种全新的细胞自我防卫机制
来源：上海交通大学
近日，上海交通大学邓子新院士团队对DNA骨架硫修饰生物学意义的研究又获得两项突破。
聚焦核酸研究的著名国际学术刊物《核酸研究》（NucleicAcidsResearch）以特写文章（Featuredarticle）发表了由该团队由德林副教授主持，博士生徐铁刚和姚芬为共同第一作者的论文——“沙门氏菌中与DNA骨架上硫修饰直接关联的一种新的限制系统”。该论文报道了一种新的宿主专一性限制-修饰系统，它与以前所熟知的DNA甲基化限制-修饰系统截然不同，由7个基因负责，其功能与DNA骨架上的硫修饰直接相关。编辑部在特写中写道：“在沙门氏菌中所发现的这种宿主专一性硫修饰系统看来是细菌为了抵御外源对DNA的限制性所装备的又一种新的细胞防卫机制，它被一种新的途径酶所编码，堪比细菌在依赖于DNA甲基化之外加装了又一套新的防御体系。”
与之相反的另一套全新的细胞防卫系统发现于天蓝色链霉菌中，由贺新义副教授主持，博士生刘光为第一作者，以“一种IV型限制内切酶ScoMcrA对硫修饰和甲基化修饰DNA都切割”为题发表在《公共科学图书馆—遗传学》（PLoSGenetics）上，这种酶不仅可以切割DNA骨架上发生了硫修饰的DNA，还可以切割DNA碱基上发生了甲基化修饰的DNA。另外，这套限制-修饰系统分别位于两个相互排斥的基因组岛上，具有“水火不容”的敌对性，两者同时表达会导致细胞瞬时死亡。论文评审员称这是一篇“重要的、epoch-making”的论文。这项发现是上海交大与中国科学院微生物研究所和英国Leicester大学合作的结晶。
这是邓子新院士团队发现DNA骨架硫修饰以来，瞄准科技界普遍关注的有关DNA硫修饰的生物学，尤其是修饰的生理功能这个重大的科学问题公开发表的新的引人注目的原创性成果。与DNA甲基化限制-修饰系统一样，这类新系统的广泛和深度挖掘可能具有重大的分子生物学和生物工程学意义。
目前，DNA骨架硫修饰的研究已成为该团队瞄准前沿，奋力开拓的主要科研方向之一，自他们首次报道DNA硫修饰以来，已先后发表了十余篇相关的系统性研究论文，稳步地把对此新兴领域的研究推向新的高度。
据悉，2010年初，中国微生物学会为了促进、激励和纪念DNA硫修饰这个原创性科学发现，彰显我国基础生命科学领域的显示度和影响力，决定在上海交通大学设立“DNA大分子硫修饰科学发现诞生地”纪念牌。
【求助】甲基化修饰中DNA模板的浓度与修饰量的问题 核酸基因...123
danbai2021-07-29
想请问各位，甲基化修饰后测量DNA的浓度一般是多少啊？
修饰前有250ng/ul，修饰后只有25ng/ul，请问你们测的修饰后的浓度有多少？我的值正常吗？
这个浓度做pcr行吗？要上多少微升dna啊。
修饰前有250ng/ul，修饰后只有25ng/ul，请问你们测的修饰后的浓度有多少？我的值正常吗？
这个浓度做pcr行吗？要上多少微升dna啊。
DNA水解酶可以彻底水解DNA分子吗 雨露学习互助123
灼眼丶夏娜侄2021-07-30
不存在不能被DNA水解酶水解的DNA。
DNA水解酶，用于切断磷酸二酯键的酶，这些酶使糖-磷酸酯主链上的磷酸二酯键水解.一般分为两种：外切核酸酶和内切核酸酶。
简介：
原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
DNA水解酶，用于切断磷酸二酯键的酶，这些酶使糖-磷酸酯主链上的磷酸二酯键水解.一般分为两种：外切核酸酶和内切核酸酶。
简介：
原理
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
[原创]亚硫酸氢盐修饰DNA步骤& lt;& lt;DNA methylation& gt;& gt;译稿 ...123
doctoryangjp2021-08-03
亚硫酸氢盐修饰DNA步骤
一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26gaugeneedle5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中，搅拌混匀，短暂离心。
3.37℃孵育15min。（有的资料介绍说可以42度20min）
4.90℃孵育2min（95度5nin也可），置于冰上，短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0（BDH）。（加7.6gNa2S2O5到15ml水，加464ul新鲜配制的10MNaOH）
6.加12ul10mM氢醌（55mg加水50ml氢醌），混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.55℃孵育4-16h（水浴）。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连，（注意连接紧）用吸管吸到注射器，底加2ml的离心管；轻轻加压，不要弄破膜；②加2ml80％的异丙醇洗涤，离心10000rpm，30s，底换管；柱子换到新1.5ml尖EP管，弃注射器；③加50ul预热水（60-70℃）放2-3min；离心（柱子与离心管一起，10000rpm，30s，DNA到EP管，弃柱子；
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液，弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原（10mg/ml）
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷（-20℃）100％乙醇，充分混匀
18.－20℃过夜（或者－70℃30min）
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清，加70％乙醇洗涤，4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中，室温下静置～2h，间隔旋涡振荡
22.－20℃保存DNA
hotstar酶做PCR，或者做Q-PCR
一、内切酶作用体系：（自建立，试过，效果很好）
EcoRⅠTaKaRa消化DNA37℃3h
ddH2O11ul
H溶液2ul
EcoRⅠ1ul
DNA6ul
37℃孵育3h
二、亚硫酸氢盐修饰过程：（翻译稿）
1.用适合的内切酶消化大分子量的DNA（避免目的基因被切割），或者通过把DNA悬于蛋白酶k/SDS缓冲液，通过26gaugeneedle5次，37℃孵育30min（降低DNA大小，利于充分变性）
2.加2.2ul新鲜配制的3MNaOH到18ulDNA样品中，搅拌混匀，短暂离心。
3.37℃孵育15min。（有的资料介绍说可以42度20min）
4.90℃孵育2min（95度5nin也可），置于冰上，短暂离心。
5.加208ul饱和的Na2S2O5PH5.0（BDH）。（加7.6gNa2S2O5到15ml水，加464ul新鲜配制的10MNaOH）
6.加12ul10mM氢醌（55mg加水50ml氢醌），混匀并短暂离心
7.加200ul矿物油，防止水分蒸发，限制氧化。
8.55℃孵育4-16h（水浴）。
9.吸弃上层矿物油。
10.①加1mlPromega’sWizardDNAClean-upresin按照指导书进行脱盐处理。每个管与2.5ml注射器相连，（注意连接紧）用吸管吸到注射器，底加2ml的离心管；轻轻加压，不要弄破膜；②加2ml80％的异丙醇洗涤，离心10000rpm，30s，底换管；柱子换到新1.5ml尖EP管，弃注射器；③加50ul预热水（60-70℃）放2-3min；离心（柱子与离心管一起，10000rpm，30s，DNA到EP管，弃柱子；
11.加50ul水到minicolumn室温下静置5min
12.离心20s收积洗提液，弃掉minicolumn
13.加5.5ul3MNaOH然后37℃孵育15min
14.短暂离心
15.加1ul糖原（10mg/ml）
16.加33.3ul5MNH4OAcetatePH7.0
17.加330ul冷（-20℃）100％乙醇，充分混匀
18.－20℃过夜（或者－70℃30min）
19.4℃下14000rpm离心15min
20.弃上清，加70％乙醇洗涤，4℃下14000rpm离心15min。
21.重悬DNA于10ul水中，室温下静置～2h，间隔旋涡振荡
22.－20℃保存DNA
hotstar酶做PCR，或者做Q-PCR
然后如何去除DNA中的RNA酶 123
禽兽TA02072017-11-27
（一）从源头控制污染：
（1）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180 ℃干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。DEPC是RNA酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小时，然后用灭菌水淋洗数次， 并于100℃干烤15分钟（Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3％的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA实验专用。
（2）研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主有涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。
（3）污染的溶液 用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1％DEPC于37℃至少处理12小时，然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高压下蒸气灭菌15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因些不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。可存几瓶新的未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
（二）已经污染，可以加入RNA酶的抑制剂
（1）RNA酶的蛋白质抑制剂是 从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合（KI≈3x1010）形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。此蛋白质体内可能是血管生成素的抑制剂，血管生成素是氨基酸序列和推测的三级结构与胰RNA酶类似的一种血管生成因子， 几个厂家以不同的商品名出售这种抑制剂，该蛋白质应置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DTT）的50％甘油中，贮存于－20℃。抑制剂制品冻融数次后或放置在氧化条件下即应弃之不用，因为上述处理会使蛋白质变性从而释放出所结合的RNA酶。因此，在使用变性剂裂解哺乳动物(mammal;mammalian)细胞这一提取RNA的初始步聚中不应使用这种蛋白抑制剂。然而职用更温和的裂解方法时应使用这种抑制剂，并且在后续的所有RNA纯化步骤中均应有此蛋白质存在。由于酚抽提可以除蛋白质抑制剂，故应在纯化过程中补加几次抑制剂。其最大活性的发挥要求巯基试剂，而且它并不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
（2）氧钒核糖核苷复合物 这种由氧钒（1V）离子和4种核糖核苷之中的任意一种所形成的复合物，是量种过渡态类似物，它能与多种RNA酶结合并几科能百分之百地抑制RNA酶的活性。这4种氧钒核糖核苷复合物可加入完整细胞中，在RNA提取和纯化的所有过程中，其使用浓度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母细胞中进行翻译， 并能作为某些外酶促反应（如mRNA反转录）的模板。然而氧钒核糖核苷复合物强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译，因此必须用含0.1 ％羟基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有几家公司出售氧钒核糖核苷复合物。
（3）Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就发现它能吸附RNA酶，用缓冲液将其制成浆液，以0.015％（W/V）的终浓度溶解细胞。 这种粘土随同它所吸附的RNA酶可在后续的RNA纯化过程中（如酚抽提后）经离心去除。
（三）提取核酸时可以加入盐酸胍或硫氰酸胍溶液。盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，从而免受RNA酶的干扰。
（1）玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶，可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染，使用前必须于180 ℃干烤8小时或更长时间（玻璃器皿）或用氯仿冲洗（塑料制品）。另一种方法是用0.1 ％焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯，试管和其他用品。DEPC是RNA酶的强烈抑制剂，但其作用并不是绝对的（Fedorcsak和Ehrenberg,1966）。灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小时，然后用灭菌水淋洗数次， 并于100℃干烤15分钟（Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC，以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净，再用水冲洗，用乙醇干燥，然后灌满3％的H2O2溶液，于室温放置10分钟，然后用0.1 ％DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记，存放在指定地点，为RNA实验专用。
（2）研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此，在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时，主有涉及RNA的一切操作过程中，都应戴一次性手套，接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后，手套就可能沾染上RNA酶，因此进行RNA实验时应勤换手套。
（3）污染的溶液 用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液，用干烤过的药匙称取试剂，将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1％DEPC于37℃至少处理12小时，然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高压下蒸气灭菌15分钟。注：DEPC可与胺类迅速发生化学反应，因些不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。可存几瓶新的未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
（二）已经污染，可以加入RNA酶的抑制剂
（1）RNA酶的蛋白质抑制剂是 从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合（KI≈3x1010）形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。此蛋白质体内可能是血管生成素的抑制剂，血管生成素是氨基酸序列和推测的三级结构与胰RNA酶类似的一种血管生成因子， 几个厂家以不同的商品名出售这种抑制剂，该蛋白质应置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DTT）的50％甘油中，贮存于－20℃。抑制剂制品冻融数次后或放置在氧化条件下即应弃之不用，因为上述处理会使蛋白质变性从而释放出所结合的RNA酶。因此，在使用变性剂裂解哺乳动物(mammal;mammalian)细胞这一提取RNA的初始步聚中不应使用这种蛋白抑制剂。然而职用更温和的裂解方法时应使用这种抑制剂，并且在后续的所有RNA纯化步骤中均应有此蛋白质存在。由于酚抽提可以除蛋白质抑制剂，故应在纯化过程中补加几次抑制剂。其最大活性的发挥要求巯基试剂，而且它并不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
（2）氧钒核糖核苷复合物 这种由氧钒（1V）离子和4种核糖核苷之中的任意一种所形成的复合物，是量种过渡态类似物，它能与多种RNA酶结合并几科能百分之百地抑制RNA酶的活性。这4种氧钒核糖核苷复合物可加入完整细胞中，在RNA提取和纯化的所有过程中，其使用浓度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母细胞中进行翻译， 并能作为某些外酶促反应（如mRNA反转录）的模板。然而氧钒核糖核苷复合物强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译，因此必须用含0.1 ％羟基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有几家公司出售氧钒核糖核苷复合物。
（3）Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘土，很多年前就发现它能吸附RNA酶，用缓冲液将其制成浆液，以0.015％（W/V）的终浓度溶解细胞。 这种粘土随同它所吸附的RNA酶可在后续的RNA纯化过程中（如酚抽提后）经离心去除。
（三）提取核酸时可以加入盐酸胍或硫氰酸胍溶液。盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质，从而免受RNA酶的干扰。
【求助】DNA的甲基化修饰123
萝莉控听说1234562021-07-24
今天晚上开始做甲基化修饰DNA实验，由于没有试剂盒，需要自己配置所有容易来进行修饰。晚上溶解亚硫酸氢钠时，由于太晚了，着急走，就在管子底部还有少许结晶沉淀的情况下，就加入到EP管中了。这样对于整个甲基化修饰影响大吗？？担心啊。
脱氧核糖核酸酶Ⅰdnaasei是水解酶类吗..._DNA修饰酶_核酸酶类_...123
Qmfi丶鼬ゅ2017-11-27
脱氧核糖核酸酶Ⅰ是一种核酸内切酶，你说的水解酶为一类可以将组成DNA分子的脱氧核糖核苷酸之间的连接（3’，5’-磷酸二酯键）打开的酶。
具体包括：DNA聚合酶α/引发酶（引发及后随链的部分合成），DNA聚合酶δ（DNA复制主要酶），增殖细胞核抗原（滑动夹子，与合成连接性有关），拓扑异构酶（母链DNA拓扑异构化），解（螺）旋酶（能解开DNA双螺旋），单链DNA结合蛋白及复制蛋白（单链DNA结合作用），复制因子C（参与滑动夹子的装配），DNA连接酶（连接冈崎片段及参与修复），核酸酶（去除RNA引物），侧翼核酸内切酶（去除RNA引物）。
总体作用是在DNA复制过程中发挥的，在DNA复制过程中起到关键性的作用。
以上信息详见高等教育出版社《生物化学》一书第十二章：DNA的生物合成。
具体包括：DNA聚合酶α/引发酶（引发及后随链的部分合成），DNA聚合酶δ（DNA复制主要酶），增殖细胞核抗原（滑动夹子，与合成连接性有关），拓扑异构酶（母链DNA拓扑异构化），解（螺）旋酶（能解开DNA双螺旋），单链DNA结合蛋白及复制蛋白（单链DNA结合作用），复制因子C（参与滑动夹子的装配），DNA连接酶（连接冈崎片段及参与修复），核酸酶（去除RNA引物），侧翼核酸内切酶（去除RNA引物）。
总体作用是在DNA复制过程中发挥的，在DNA复制过程中起到关键性的作用。
以上信息详见高等教育出版社《生物化学》一书第十二章：DNA的生物合成。
核酸酶发展历史123
TSˊ控白2021-07-21
20世纪70年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序，称为限制性核酸内切酶（restriction endonuclease，简称限制酶）。当外源DNA侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被水解，从而得到保护。
限制性核酸内切酶的研究和应用发展很快，已提纯的限制性核酸内切酶有100多种，许多已成为基因工程研究中必不可少的工具酶。
限制性核酸内切酶可被分成三种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。
Ⅰ型和Ⅲ型酶具有限制和修饰两种作用，而特异性弱，切割位点的序列不固定，不已知，不宜用于基因克隆中。
Ⅱ型限制酶水解DNA不需要ATP也不以甲基化或其它方式修饰DNA，能在所识别的特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA。因此，被广泛用于DNA分子克隆和序列测定。
限制性核酸内切酶的研究和应用发展很快，已提纯的限制性核酸内切酶有100多种，许多已成为基因工程研究中必不可少的工具酶。
限制性核酸内切酶可被分成三种类型。Ⅰ型和Ⅲ型限制酶水解DNA需要消耗ATP，全酶中的部分亚基有通过在特殊碱基上补加甲基基团对DNA进行化学修饰的活性。
Ⅰ型和Ⅲ型酶具有限制和修饰两种作用，而特异性弱，切割位点的序列不固定，不已知，不宜用于基因克隆中。
Ⅱ型限制酶水解DNA不需要ATP也不以甲基化或其它方式修饰DNA，能在所识别的特殊核苷酸顺序内或附近切割DNA。因此，被广泛用于DNA分子克隆和序列测定。
275第十四章基因工程技术原理与应用123
詛躷囖482021-07-27
基因工程中聚合酶不是基本酶的原因：DNA聚合酶是将单个的脱氧核苷酸加到原有的DNA片段上的，所以不用！DNA聚合酶是不论何种片段强制连接的，而聚合酶是连接有特定顺序的碱基对片段的DNA。基因工程常见几种酶比较：DNA聚合酶： 在DNA复制时起作用，将多个脱氧核苷酸催化聚合为脱氧核苷酸链（也就是DNA单链），此时形成的化学键是磷酸二酯键。DNA解旋酶： 在DNA复制或转录时起作用，将DNA的双链解开，作用对象是氢键，使氢键断裂 DNA水解酶： 在消化道或细胞内起作用，将DNA水解为脱氧核苷酸，作用对象是磷酸二酯键。DNA连接酶：在DNA修饰过程或基因工程中起作用，将两个DNA片段连接起来，此时形成的化学键是磷酸二酯键。
Taq DNA Polymerase 和rTaq酶有什么区别？作业慧海网123
小月哈哈0312017-11-27
Taq DNA Polymerase 和rTaq酶有什么区别
第一代热启动Taq酶是一种DNA聚合酶。 第一代指的是直接从Taq（这是一种细菌）体内提取的天然聚合酶，没有进行化学修饰的，为了达到更好的聚合催化效果，往往需要经过酶工程处理，得到的聚合酶催化效率更高。 热启动是指这种酶的反应温度条件
Taq DNA polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经过柱纯化分离出来的一个约94 KD的重组蛋白。无外源核酸酶和细菌DNA污染，稳定性好，特异性强，适用于常规PCR扩增。
第一代热启动Taq酶是一种DNA聚合酶。 第一代指的是直接从Taq（这是一种细菌）体内提取的天然聚合酶，没有进行化学修饰的，为了达到更好的聚合催化效果，往往需要经过酶工程处理，得到的聚合酶催化效率更高。 热启动是指这种酶的反应温度条件
Taq DNA polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经过柱纯化分离出来的一个约94 KD的重组蛋白。无外源核酸酶和细菌DNA污染，稳定性好，特异性强，适用于常规PCR扩增。
人源性抗角蛋白单链抗体在巴氏毕赤酵母的分泌表达①123
jarnoyvonne2021-08-06
20192020学年西南四省名校高三(下)第一次大联考生物试卷(有答案解析...123
穷比烟味丶潵抨2017-11-27
A、酶的本质是绝大多数酶是蛋白质，所以绝大多数酶是基因转录和翻译的产物，A错误； B、细胞核基因是染色体的组成部分，细胞质基因不是染色体的组成部分，酶不是细胞内染色体的组成成分，B错误； C、基因可以通过控制酶的合成控制代谢进而控制生物的性状，C正确； D、有某种酶的基因，细胞中不一定有相应的酶，因为在细胞中基因是选择表达的，D错误．故选：C．
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