
Accuris Taq DNA Polymerase and Master Mix
Accuris Taq DNA Polymerase provides superior results for routine applications. Modified to improve DNA-binding, this polymerase offers higher processivity and greater template affinity, resulting in consistently superior performance. Accuris Taq Polymerase exhibits a 5 to 3 nuclease activity, but no 3 to 5 (proofreading) activity and works well with a wide range of DNA templates including GC-rich sequences.
· Ideal for routine PCR applications as well as genotyping, colony PCR and fast PCR.
· Improved template affinity and increased processivity for higher enzymatic activity and greater yields.
· Proprietary buffer optimized for a variety of assay conditions.
· Supplied with 5X buffer or as a convenient 2X Master Mix.
The polymerase is supplied with a 5X buffer containing MgCl2 and a proprietary mix of enhancers (dNTPs not included). For convenience, Accuris Taq is also available in a ready to use 2X Master Mix - just add primers and template DNA. The Master Mix can be ordered with a red loading dye that allows samples to be loaded directly on an agarose gel.
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求有经验的大神指教,我的载体和目的基因连不上,转化不到大肠中,比例为1:3。另外,为啥胶回收后的载体浓度那么低,大约6ng/ul了,影响连接么?
连接酶通常是包括“连接酶”这个字,就如DNA连接酶是将脱氧核糖核酸(DNA)片段连接。其他普遍的名称包括“合成酶”,因为这些酶是用作合成新的分子,或当它们是将二氧化碳加入一个分子时则称为“羧化酶”。
菌体构建时,目的基因连接在T载体上,测序也正确,但是将目的基因还有载体分别双酶切后总是连接不上,将连接后产物跑核酸胶,什么也没有,不知道是什么原因?我的目的基因浓度为9ng/ul,载体回收后的浓度为6ng/ul,是因为浓度太低的原因吗?还有就是连接有目的基因的T载体双酶切后出现了三条带,这个又是什么原因呢?希望得到解答
DNA连接酶主要是连接DNA片段之间的磷酸二酯键最初从原核生物(大肠杆菌)分离得到的.现在生物基因工程主要是从T4噬菌体中分离得到的,
大家有用过Invitrogen的T4连接酶吗?说明书上是23-26度连接,一般的连接酶不都是16度吗?应该用多少度呢?另外,说明书上还说连接后为了达到更好的转化效率,应将连接反应液至少稀释5倍再转化,是这样吗?谢谢大家帮忙啊
DNA连接酶:可以连接被限制酶切割开磷酸二酯键
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶

