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Miltenyi
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连接酶链反应(Ligase Chain Reaction,LCR)是继PCR后,新出现的一种更加完善的DNA体外扩增和检测技术。在检测点突变等方面具有独特的优点。... 查看更多>
泛素蛋白酶体途径是目前己知的所有真核生物体内具有高度选择性的最为重要的蛋白质降解途径。真核细胞中泛素化修饰后的靶蛋白可能被降解、可能被转移到细胞或细胞外的特定部位,也有可能导致靶蛋白的功能发生变化,这主要取决于靶蛋白所加的泛素链的结构,以及泛素链的长短。泛素连接酶E3... 查看更多>
特性 耐热性好 可在 PCR 和连接酶链式反应过程中掺入磷酸化寡核苷酸 可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测(1,3) 可通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变(4) 概述Taq DNA 连接酶能够催化磷酸二酯键的形成,使杂交到同一互补靶 DNA 链上的两条契合寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键连接。这个连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此,可以用它来检测单碱基替换。在 4 查看更多>
DNA连接酶(DNA Ligase)也称DNA黏合酶,在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色,那就是连接DNA链3‘-OH末端和,另一DNA链的5’-P末端,使二者生成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。... 查看更多>
特性 高反应效率 粘性末端和平齐末端均可连接 限制性酶切片段的克隆 将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端 室温或 16℃ 均有活性 概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1)。 来源纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8(2)。 反应条件1 X 查看更多>
T4 DNA Ligase(T4 DNA 连接酶) 催化粘性末端或平末端两条DNA 链的相邻核苷酸的5`- 磷酸基和3`-OH 的连接。该酶也可催化RNA 与双链DNA 或RNA 的连接,但不能使单链核酸相连。 特点:提供高浓度产品:Cat.# M1794 包含500 单位10–20u/μl 的T4DNA Ligase。 灵活:可用于5`、3` 或平末端DNA 插入片段。 提供10× 反应缓冲液:300mM Tris-HCl (pH 7.8,25℃ ),100mM MgCl2,100mM DTT 查看更多>
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T4 DNA Ligase(T4 DNA 连接酶) 催化粘性末端或平末端两条DNA 链的相邻核苷酸的5`- 磷酸基和3`-OH 的连接。该酶也可催化RNA 与双链DNA 或RNA 的连接,但不能使单链核酸相连。 特点: 提供高浓度产品:Cat.# M1794 包含500 单位10–20u/μl 的T4DNA Ligase。 灵活:可用于5`、3` 或平末端DNA 插入片段。 提供10× 反应缓冲液:300mM Tris-HCl (pH 7.8,25℃ ),100mM MgCl2,100mM D 查看更多>
B. 图二所示的DNA片段被限制酶切割后获得的末端形式与图一下端相同 C. T4DNA连接酶可以将两个图一所示结构连接成为一个DNA片段 D. 基因工程的载体必须具有图二... 查看更多>
嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司,免费热线:400-698-4168。 查看更多>
连接酶链反应(Ligase chain reaction,LCR),是在连接酶扩增反应或连接酶检测反应的基础上,引入热稳定的连接酶而建立的类似PCR 技术的新方法。LCR 既可扩增,又可鉴定D N A 异常,与PCR 技术一样可用于已知病因的遗传病大面积普查。... 查看更多>
真核生物DNA复制中起主要作用的酶是()。 A.Polγ B.单链DNA结合蛋白 C.polα和po1δ D.DNA连接酶 E.解链酶 请帮忙给出正确答案和分析,谢谢!... 查看更多>
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T4连接酶123
杨小样09162021-08-04
各位大神好,我刚开始做连接,用的T4连接酶,takara的,16度连了12h,转了感受态没长菌斑,我的载体酶切后11000bp,我要连上去的片段在760bp,用的是salI和BglII双酶切后看胶图应该是没有问题,第一张图是当时酶切的图,从左至右是2kplusIIMarker,片段双酶切,片段原质粒,片段salI单酶切,片段BglII单酶切,载体双酶切,载体原质粒,载体salI单酶切,载体BglII单酶切,从图中看酶切应该是切开了,就是片段在750bp的条带有点弱,但还是有条带的。现在不太清楚是什么原因,能帮忙分析一下吗?第二张胶图是胶回收之后定量的,从左侧第一个点样孔是2kplusII的marker,第二个是片段双酶切胶回收3微升点样,第三个是载体双酶切胶回收3微升点样。连接体系是10微升,1.5的酶,1的buffer,6.5的片段,1的载体,但就是连不上,各位帮忙分析一下吗,不胜感激

在使用NEB的T4DNA连接酶,想请问一下平末端连接的体系和反应温度、时间,因为之前用了10微升的体系,2微升buffer,1微升载体,6微升目的片段,1微升T4连接酶,没成功,有用过的同志们帮帮忙。

SNP检测方法汇总123
拜仁的饺子2021-08-01
我找公司做了iMLDR法,实验报告中链接反应每个位点有三个引物
例如rs1492100FA:
TCTCT…GGCAATT
rs1492100FP:
…TTTAGAGAGAAACTCCATG
rs1492100FT:
…GAGCTCAGCGTGGGTT
这里的FA/FP/FT是什么涵义,有的是RC/RP/RT,有的是RA/RG/RP
F/R应该是正向/反向,后面的字母什么涵义就不懂了?谢大神
所有的DNA连接酶都具有专一性
酶对所作用的底物有严格的选择性。一种酶仅能作用于一种物质,或一类分子结构相似的物质,促其进行一定的化学反应,产生一定的反应产物,这种选择性作用称为酶的专一性。
限制性核苷酸酶与DNA连接酶都是作用于磷酸二酯键。
只不过限制性核苷酸酶是将磷酸二酯键切断;而DNA连接酶则是形成磷酸二酯键。
不需要识别特定的碱基序列吗?例如用不同的限制酶切出的平末端用T4DNA连接酶都能连起来吗?

菌体构建时,目的基因连接在T载体上,测序也正确,但是将目的基因还有载体分别双酶切后总是连接不上,将连接后产物跑核酸胶,什么也没有,不知道是什么原因?我的目的基因浓度为9ng/ul,载体回收后的浓度为6ng/ul,是因为浓度太低的原因吗?还有就是连接有目的基因的T载体双酶切后出现了三条带,这个又是什么原因呢?希望得到解答

现有DNA双链,其中一条有缺口,用T4DNA连接酶封闭缺口反应体系是什么?连接酶浓度有什么要求?

有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix?

有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix?

有没有人用过NEB的Blunt/TALigaseMasterMix和InstantSticky-endLigaseMasterMix?

.....它说连得又快又好,想问问有木有小白鼠试过它家的这两个产品呢。。如果用过能不能请教下效果咋样呢。。我之前用Thermo的T4,属于又便宜又慢效果还可以的那类型的。。(虽然说thermo也说室温30min就ok,但是还是4度过夜了,室温30min不靠谱)

泛素连接酶的简介 123
发帅哥Gb192017-09-28
泛素连接酶,又称为E3泛素连接酶,是一个能够将泛素分子连接到目的蛋白质的某个赖氨酸上的酶。向左转|向右转
DNA的复制事实上是半不连续复制 即只有一条链的合成是连续的 这听起来很神奇 但确实是这样 连续合成的链叫做前导链 另一条链称为后随链 它的合成是不连续的 以它为模板的合成 需要一段一段地进行 所合成的片段叫做冈崎片段
产生这一现象的原因在于 DNA合成酶只能沿5'-3'的方向合成DNA 而DNA本身的两条链又是反向分布的 所以就造成了只有一条链合成可以连续地进行下去(以它为模板的子链生成方向正好是DNA聚合酶可以直接提供的) 而后随链要盘绕成回环 反扭过来 才能合成
再合成起始的时候 DNA聚合酶是需要一段RNA引物的 在原核生物中这一引物是由dnaQ(一种酶)在已解旋的单链5'端合成,真核生物中也有对应的酶 由于后随链的合成不连续 所以每个片段都要有引物 在DNA合成结束的时候 这些引物要被切除 因而留下缺口 这时又要特定的酶去填补缺口(比如 大肠杆菌中的DNA聚合酶I)可是填补序列和周围序列间会有缺刻 也就是说他们交界处的3'-5'磷酸二脂键是断开的 这时需要DNA连接酶发挥作用 将其连好
所以 后随链上的缺刻多 还真够DNA连接酶忙一阵的 前导链上只有一开始有RNA引物 因此 最后也基本只有这个地方会用到连接酶
请问,用T4连接酶连接以后,做转化时是否需要酒精纯化一下?还有一个问题,用T4聚合酶补平粘性末端以后,可以直接用来做连接吗?