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제품특징
□ 제품설명
TB Green® Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)은 TB Green®을 이용한 intercalating 법 Real Time PCR 전용 시약이다. 2× 농도의 premix type시약으로, 실시간 모니터링에 적합한 농도의 TB Green® 을 미리 포함하고 있어 반응 액의 조제가 간단하다.
anti-Taq 항체를 이용한 Hot Start PCR용 효소TaKaRa Ex Taq HS와 Real Time PCR용에 최적화된 buffer의 조합에 의해, 높은 증폭 효율과 높은 검출 감도로 Real Time PCR을 할 수 있다. 또, 내열성RNaseH인 Tli RNaseH가 2× premix에 미리 첨가되어 있어, cDNA를 주형으로 할 경우 잔존mRNA에 의한 PCR반응 저해를 극한으로 억제할 수 있다.
본 제품은 고속PCR에 적합하며, 폭넓은 범위에서 정확한 타겟의 정량및 검출을 할 수 있어 재현성과 신뢰성이 높은 Real Time PCR해석이 가능하다.본제품의 적응 기종
● Thermal Cycler Dice Real Time System (TaKaRa Code TP850)
● Smart Cycler System/Smart Cycler II System*1(Cepheid)
● Applied Biosystems 7900HT/7300/7500 Real-Time PCR System, 7500 Fast Real-Time, PCR System, StepOnePlus
Real-Time PCR System (Applied Biosystems)
● LightCycler (Roche Diagnostics)
● M×3000P(Stratagene)등
*1Smart Cycler 은 Cepheid사의 등록 상표입니다
□ 내용
TB Green®Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus)(Code RR420A) (200 회, 50 μl 반응시)
| TB Green® Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (2×conc.)*1 | 1 ml×5 |
ROX Reference Dye (50×conc.)*2 | 200 μl |
ROX Reference Dye II (50×conc.)*2 | 200 μl |
TB Green®Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus), Bulk (Code RR420L) (200 회, 50 μl 반응시)
| TB Green®Ex Taq (Tli RNaseH Plus), Bulk*1 | 5 ml |
ROX Reference Dye (50×conc.)*3 | 200 μl |
TB Green®Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus), ROX plus (Code RR42LR) (200 회, 50 μl 반응시)
| TB Green®Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus), ROX plus*4 | 5 ml |
*1 TaKaRa Ex Taq HS, dNTP Mixture, Mg2+, Tli RNaseH포함*2 Life Technologies의 Real Time PCR 장치 등 well 간 형광 신호를 보정하는 장치로 해석하는 경우에 사용한다.ABI PRISM 7000/7700, Applied Biosystems 7900HT/7300 Real - Time PCR System과 StepOnePlus에는 ROX
Reference Dye를,7500 Real - Time PCR System 및 7500 Fast Real - Time PCR System에는 ROX Reference
Dye II가 적합하다.Agilent Mx3000P의 경우에는 ROX Reference Dye II가 적합하다.TaKaRa Thermal Cycler Dice Real Time System 과 Smart Cycler System, LightCycler에서는 필요하지 않다. *3 ROX Reference Dye(50×)로 ABI PRISM 7000/7700, Applied Biosystems 7900HT/7300 Real - Time PCR System과
StepOnePlus 사용시에는 1/50로 사용, 7500 Real - Time PCR System 및 7500 Fast Real - Time PCR System 사용시에는
1/250로 사용한다.*4 TaKaRa Ex Taq HS, dNTP Mixture, Mg2+, Tli RNaseH 및 ROX Reference Dye를 포함한다.ROX Reference Dye II 로 보정해야 하는 Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System(Life Technologies)
에는ROX Reference Dye가 별도로 첨부되어 있는 TB Green®Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus), Bulk (Code RR420L)의 사용을
추천한다.
□ 보존
4 ℃, 보존 : 6 개월간 안정 ※ 반드시 차광하십시오. 또한 오염에 주의 하십시오. - 장기간 저장하려면, 각 제품의 포장라벨 또는 매뉴얼 V. Storage의 추천온도에서 보관하십시오. - 일단 용해 후에는 4 ℃ 보관하고 6 개월안에 사용 할 것을 권장 합니다.
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同一管dna有的酶可以切开，比如dra1，ecoR1,Hind111
有的酶又完全不能切动，如BamH1，sac1，xba1，xho1，pst1
请问高手这是什么原因？?
感谢赐教~！
我做的双酶切反应，酶分别是宝生物的BamHI和XhoI，双酶切体系是：载体及目的片段分别是30ul，通用buffer4ul，XhoI、BamHI各2ul，无核酶水2ul，总体积40ul。载体和目的片段都是经37度酶切6h。载体上面这两个酶切位点的距离是6个碱基，目的片段是由pcr反应获得的，从puc19中p出来的，两端带有这两种酶的酶切位点，酶切完成后，做连接反应，体系如下：目的片段（全长1441bp）4ul，无核酶水3ul，10*T4DNA连接酶缓冲液1ul，载体1ul，T4DNA连接酶1ul，总体积10ul。16度过夜。之后摇菌送沉菌测序结果回来，送了5管一个都不对。重复实验两次还是不对！
之后改为先用BanHI单切载体，体系如下：载体17ul，酶1ul，buffer2ul，总体积20ul，30度切6小时后，Promega纯化试剂盒直接纯化，完了之后再用XhoI，37度酶切6小时，体系如上，再次用promega纯化试剂盒纯化，目的片段用双酶切体系酶切，之后做连接反应，之后铺板，挑取菌落共10个，摇菌13小时，取菌液做pcr鉴定，结果10个菌落全是引物2聚体，跑出来的条带都是100bp左右。
各位老师这是怎么回事呢？为什么连接不上呢？小弟先谢过各位大哥了！
求问酶切体系为10ul,内切酶1ul,37℃水浴45min，不知道DNA产物是否完全被切开了？
所用内切酶信息如下
配后是否应该分装,因为不能反复冻融?
多谢!
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