热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃，温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。 在50μl的反应体系中，37℃条件下，以0.5μg小牛胸腺DNA作为底物，加入5-10μl内切酶及相应缓冲液，反应60分钟，然后升温至65℃或80℃温育20分钟进行热失活。在上述混合液中加入0.5μg底物DNA（通常为λDNA），调节温度至最适反应温度，温育60分钟。若琼脂糖电泳显示底物部分或完全被消化，则表明该酶没有完全被热失活。Enzyme HeatInactivation(temperature) AATII Yes(65°C) AccI Yes(80°C) Acc65I Yes(65°C) AciI Yes(65°C) AclI No AcuI Yes(65°C) AfeI Yes(65°C) AflII Yes(65°C) AflIII Yes(80°C) AgeI Yes(65°C) AhdI Yes(65°C) AleI Yes(65°C) AluI Yes(65°C) AlwI Yes(65°C) AlwNI Yes(65°C) ApaI Yes(65°C) ApaLI No ApeKI No ApoI Yes(80°C) AscI Yes(65°C) AseI Yes(65°C) AsiSI Yes(80°C) AvaI Yes(80°C) AvaII Yes(65°C) AvrII No BaeI Yes(65°C) BamHI No BanI Yes(65°C) BanII Yes(65°C) BbsI Yes(65°C) BbvI Yes(65°C) BbvCI Yes(80°C) BccI Yes(65°C) BceAI Yes(65°C) BcgI Yes(65°C) BciVI Yes(65°C) BclI No BfaI Yes(80°C) BfrBI Yes(80°C) BfuAI Yes(65°C) BfuCI Yes(80°C) BglI Yes(65°C) BglII No BlpI No Bme1580I Yes(80°C) BmgBI Yes(65°C) BmrI Yes(65°C) BmtI Yes(65°C) BpmI Yes(65°C) Bpu10I Yes(80°C) BpuEI Yes(65°C) BsaI Yes(65°C) BsaAI Yes(80°C) BsaBI Yes(80°C) BsaHI Yes(80°C) BsaJI Yes(80°C) BsaWI Yes(80°C) BsaXI No BseRI Yes(65°C) BseYI Yes(65°C) BsgI Yes(65°C) BsiEI Yes(80°C) BsiHKAI Yes(80°C) BsiWI Yes(80°C) BslI Yes(80°C) BsmI Yes(80°C) BsmAI Yes(80°C) BsmBI Yes(80°C) BsmFI Yes(80°C) BsoBI No Bsp1286I Yes(65°C) BspCNI Yes(80°C) BspDI Yes(65°C) BspEI Yes(80°C) BspHI Yes(65°C) BspMI Yes(65°C) BsrI Yes(80°C) BsrBI Yes(80°C) BsrDI Yes(80°C) BsrFI No BsrGI Yes(80°C) BssHII Yes(80°C) BssKI Yes(80°C) BssSI Yes(80°C) BstAPI Yes(80°C) BstBI No BstEII No BstF5I No BstNI No BstUI No BstXI Yes(65°C) BstYI Yes(80°C) BstZ17I No Bsu36I Yes(80°C) BtgI Yes(80°C) BtgZI Yes(80°C) BtsI Yes(80°C) Cac8I Yes(65°C) ClaI Yes(65°C) CviAII Yes(65°C) DdeI Yes(65°C) DpnI Yes(80°C) DpnII Yes(65°C) DraI Yes(65°C) DraIII Yes(65°C) DrdI Yes(65°C) EaeI Yes(65°C) EagI Yes(65°C) EarI Yes(65°C) EciI Yes(65°C) EcoNI Yes(65°C) EcoO109I Yes(65°C) EcoRI Yes(65°C) EcoRV Yes(80°C) FatI Yes(65°C) FauI Yes(65°C) Fnu4HI Yes(65°C) FokI Yes(65°C) FseI Yes(65°C) FspI Yes(65°C) HaeII Yes(80°C) HaeIII Yes(80°C) HgaI Yes(65°C) HhaI Yes(65°C) HinP1I Yes(65°C) HincII Yes(65°C) HindIII Yes(65°C) HinfI Yes(80°C) HpaI No HpaII Yes(65°C) HphI Yes(65°C) Hpy99I Yes(65°C) Hpy188I Yes(65°C) Hpy188III Yes(65°C) HpyCH4III Yes(80°C) HpyCH4IV Yes(65°C) HpyCH4V Yes(65°C) I-CeuI Yes(65°C) I-SceI Yes(65°C) KasI Yes(65°C) KpnI No MboI Yes(65°C) MboII Yes(65°C) McrBC Yes(65°C) MfeI Yes(65°C) MluI Yes(65°C) MlyI Yes(65°C) MmeI Yes(80°C) MnlI Yes(65°C) MscI Yes(65°C) MseI Yes(65°C) MslI Yes(65°C) MspI Yes(65°C) MspA1I Yes(65°C) MwoI No NaeI Yes(65°C) N.AlwI Yes(80°C) NarI Yes(65°C) N.BbvCIA Yes(80°C) N.BbvCIB Yes(80°C) N.BstNBI Yes(80°C) NciI No NcoI Yes(65°C) NdeI Yes(65°C) NgoMIV Yes(80°C) NheI Yes(65°C) NlaIII Yes(65°C) NlaIV Yes(65°C) NotI Yes(65°C) NruI Yes(65°C) NsiI Yes(65°C) NspI Yes(65°C) PacI Yes(65°C) PaeR7I No PciI Yes(65°C) PflFI Yes(65°C) PflMI Yes(65°C) PhoI No PI-PspI No Pl-SceI Yes(65°C) PleI Yes(65°C) PmeI Yes(65°C) PmlI Yes(65°C) PpuMI No PshAI Yes(65°C) PsiI Yes(65°C) PspGI No PspOMI Yes(65°C) PstI Yes(80°C) PvuI Yes(80°C) PvuII No RsaI Yes(65°C) RsrII Yes(65°C) SacI Yes(65°C) SacII Yes(65°C) SalI Yes(65°C) SapI Yes(65°C) Sau96I Yes(80°C) Sau3AI Yes(65°C) SbfI Yes(65°C) ScaI Yes(80°C) ScrFI Yes(65°C) SexAI Yes(65°C) SfaNI Yes(65°C) SfcI Yes(65°C) SfiI No SfoI Yes(65°C) SgrAI Yes(65°C) SmaI Yes(65°C) SmlI No SnaBI Yes(80°C) SpeI Yes(65°C) SphI Yes(65°C) SspI Yes(65°C) StuI Yes(65°C) StyI Yes(65°C) StyD4I Yes(65°C) SwaI Yes(65°C) TaqI Yes(80°C) TfiI No TliI No TseI No Tsp45I No Tsp509I No TspRI No Tth111I No XbaI Yes(65°C) XcmI Yes(65°C) XhoI Yes(65°C) XmaI Yes(65°C) XmnI Yes(65°C) ZraI Yes(80°C)
