DEAE琼脂糖凝胶CL6B_琼脂糖填料_填料_层析介质_专业生化...
| 实验方法原理 | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | DNA 试剂、试剂盒 | TE酶切缓冲液EDTA 仪器、耗材 | 电泳仪 实验步骤 | 1. 混合下列溶液于一个无菌的微量离心管中 （1）xμl DNA （2）2μl 10×酶切缓冲液 （3）18-xμl H2O 2. 加入限制性内切酶（1~5U/μgDNA）在推荐的温度温育1h（—般是37℃）。 3. 理论上，1U限制性内切酶在推荐的反应条件下，60min内可完全消化1μg纯化的样品。 4. 酶的体积应低于反应总体积的1/10，因为酶液中的甘油可以干扰反应。 5. 加入5μl电泳加样缓冲液终止反应，进行琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳。 6. 反应也可通过加入0.5μl0.5mol/lEDTA（终浓度为12.5mol/l）以螯合镁离于而终止。 7. 很多酶再65℃温育10min可被不可逆灭活，有些不能在65℃热失活的酶在75℃温育15min也能失活。 8. 如果酶对热具完全抗性，可遍过酚抽提和乙醇沉淀或通过硅基质悬浮法来纯化DNA。 |
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发布于 ： 2019-04-22
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